曹睿
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 双靶向配体化力达霉素DTLL的制备优化和稳定性研究被引量：2
- 2018年
- 目的通过对具有高效抗肿瘤活性的类抗体偶联药物—--双靶向配体化力达霉素(DTLL)制备过程的优化,获得纯度高和活性强的DTLL产品;探讨影响DTLL稳定性的主要因素,为临床申报和工业化生产提供依据。方法分别对DTLL前体(DTLP)蛋白表达载体、宿主菌株、表达温度、诱导剂终浓度、菌体密度和诱导时间进行优化。以高压破碎法提取可溶性目的蛋白,采用Ni+亲和与分子筛层析两步纯化,得到高纯度DTLP,再与力达霉素发色团组装获得DTLL。采用HPLC、MTS、ELISA法进行稳定性试验,分别监测DTLL冻干样品的蛋白纯度、发色团含量、细胞毒和亲和力活性的变化。结果经过发酵提取工艺优化,每升发酵液所得DTLP蛋白约为22 mg,是优化前每升9 mg的2.4倍,其蛋白纯度达到99.7%;DTLL组装效率达到68%;稳定性试验结果显示,DTLL冻干样品对光照敏感,在–80℃低温避光环境下可稳定保存。结论成功优化了双靶向配体化力达霉素DTLL的制备工艺,提升了产品纯度和产率,为其后续生产和临床申报提供了实验基础,也为其他抗体偶联药物的制备提供了较成熟完善的技术平台。
- 叶程曹睿宋文凭李良李毅赵春燕李亮邵荣光
- 关键词：重组融合蛋白质类蛋白质稳定性
- 肿瘤靶向治疗抗体药物的研究进展被引量：5
- 2016年
- 近年来,随着人类对癌症的细胞生物学和遗传学方面的认识达到分子生物学水平,新的治疗理念和方法被不断的提出,其中关于肿瘤的分子靶向性治疗药物的研发与应用受到了广泛的关注。抗体药物以其靶向性强,副作用小,疗效显著等优点,迅速成为了肿瘤靶向治疗领域中的热点药物。目前已有20多种抗肿瘤抗体药物经过批准应用于临床,并取得了显著的疗效。本文总结了靶向肿瘤的单克隆抗体药物的发展历程和现状,及其抗肿瘤作用的机制。同时总结了单抗药物在肿瘤研究领域中取得的新进展,并对其应用前景以及存在的不足做了概述。
- 曹睿邵荣光李亮
- 关键词：肿瘤单克隆抗体分子靶向治疗抗体药物
- 双靶向配体化力达霉素在大鼠体内药动学及组织分布和排泄
- 2019年
- 目的研究双靶向配体化力达霉素(DTLL)在大鼠体内的药动学特征及组织分布和排泄。方法单次iv给予Wistar大鼠[125I]DTLL,给药剂量为2625 kBq·0.05 mg-1·kg-1。分别收集0~6 h内组织样本、0~24 h内血清样本以及0~168 h内尿液、粪便和胆汁样本,用液体闪烁仪分别检测样品放射性浓度,用WinNonlin软件和非房室模型统计矩法计算药动学参数,并分析[125I]DTLL在体内的分布和排泄。结果DTLL原型药物的曲线下面积(AUC0-∞)为(184±33)h·μg·L-1,半衰期(t1/2)为(3.98±0.75)h,清除率(Cl)为(278±41)mL·h-1·kg-1。[125I]DTLL iv给予大鼠后,广泛分布于全身各组织中,在主要脏器中均未发现蓄积现象;给药后0~168 h,粪便和尿液累积排泄分数分别为(10.4±6.6)%和(82.5±2.6)%,经粪尿总排泄量可达给药剂量的(92.9±7.4)%。结论DTLL iv给予健康Wistar大鼠后可迅速分布于全身,可能不能通过血脑屏障,DTLL主要通过粪尿途径排泄。
- 叶程曹睿宋文凭张玉民樊慧蓉刘鉴峰李亮邵荣光
- 关键词：同位素药动学
- 抗ErbB力达霉素衍生物对胰腺癌细胞的抑制作用
- 目的胰腺癌是当前恶性程度高的难治性恶性肿瘤之一,近30年来其5年生存率未得到明显改变,仅为4-6%,然而目前为止,吉西他滨单药仍作为其治疗的一线用药,且毒副作用明显,因而,高效低毒特异性强的靶向药物,在抗癌药物的发展中占...
- 曹睿邵荣光李亮
- 文献传递
- 双靶向配体化力达霉素DTLL的制备工艺改进和质量标准制定
- 本发明涉及免疫融合蛋白DTLP的和双靶向配体化力达霉素DTLL的制备工艺改进和质量标准制定，主要包括：筛选高产的转化宿主菌株、改变发酵菌体起始密度，缩短诱导后发酵时间等表达条件；改用压力破碎法破碎菌体提取总的可溶性蛋白，...
- 邵荣光李亮叶程曹睿宋文凭李良李毅刘秀均甄永苏赵春燕
- 文献传递
- 双靶向配体化力达霉素DTLL联合吉西他滨在胰腺癌治疗中的应用
- 本发明涉及双靶向配体化力达霉素DTLL的单独用药以及与吉西他滨联合给药在胰腺癌治疗中的应用。体内外研究结果表明，我们制备的DTLL能与其受体特异性亲和，同时对高表达EGFR/HER2的胰腺癌细胞MIA‑paca‑2有特异...
- 李亮邵荣光叶程曹睿宋文凭李良李毅刘秀均甄永苏赵春燕姚红娟
- 文献传递
- 人视网膜母细胞瘤Y79细胞依托泊苷耐药株的建立及其耐药机制初探
- 2017年
- 目的通过构建人视网膜母细胞瘤Y79细胞的依托泊苷耐药株,比较耐药株的药物敏感性和细胞生长情况,观察耐药相关基因及细胞信号通路的变化,从而阐释人视网膜母细胞瘤对依托泊苷的耐药机制。方法以不同浓度梯度的依托泊苷处理Y79细胞,采用浓度递增不间断刺激法构建依托泊苷耐药株,观察耐药株细胞的形态学变化和细胞生长增殖情况以及对依托泊苷细胞毒作用的敏感性;以caspase 3/7酶活性来评估耐药株的细胞凋亡程度,并通过Western blot方法研究与细胞增殖和耐药相关蛋白的表达变化。结果成功构建耐受依托泊苷的人视网膜母细胞瘤耐药株Y79/EDR,最大耐药浓度为500 nmol/L。和亲本细胞相比,耐药细胞具有较强的生长增殖能力,倍增时间缩短14.5 h(P<0.001);且对依托泊苷的敏感性显著下降,耐药指数达29.47。Caspase 3/7活性检测结果显示,给予亲本及耐药细胞不同浓度的依托泊苷后,耐药细胞中caspase 3/7活性明显低于亲本细胞,凋亡减少,且呈药物浓度依赖性。Western blot结果表明,耐药细胞中磷酸化AKT(p-AKT)表达明显高于亲本细胞,提示其p-AKT的活性明显增强,p-AKT促进其下游蛋白MDM2的磷酸化从而抑制p53的磷酸化,而凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值明显降低。多药耐药性蛋白P-糖蛋白(P-gp)的表达下调,Rb1蛋白表达水平无明显变化,提示耐药株Y79/EDR的耐药并不依赖于P-gp而产生,且与Rb1蛋白无关,而可能通过增加肿瘤驱动蛋白AKT的磷酸化,激活其所介导的下游信号通路,增加靶蛋白MDM2的表达,从而抑制抑癌蛋白p53的表达;同时增加抗凋亡蛋白Bcl-2和降低抑凋亡蛋白Bax的表达水平;最终导致细胞通过增殖显著增强和凋亡明显减少而产生耐药。结论成功构建依托泊苷耐药株Y79/EDR,初步结果表明,其耐药细胞株可能通过促进细胞生长与增殖,同时抑制细胞凋亡而导致耐药,这将为深入研究人�
- 宋文凭张诚玥张燕李毅曹睿叶程张琳邵荣光李亮赵军阳
- 关键词：视网膜母细胞瘤依托泊苷
- 双靶向配体化力达霉素DTLL联合吉西他滨在胰腺癌治疗中的应用
- 本发明涉及双靶向配体化力达霉素DTLL的单独用药以及与吉西他滨联合给药在胰腺癌治疗中的应用。体内外研究结果表明，我们制备的DTLL能与其受体特异性亲和，同时对高表达EGFR/HER2的胰腺癌细胞MIA‑paca‑2有特异...
- 李亮邵荣光叶程曹睿宋文凭李良李毅刘秀均甄永苏赵春燕姚红娟
