- 麦芽糖结合蛋白-微管驱动蛋白11删除型融合基因表达载体的构建及其蛋白表达
- 2013年
- 目的:构建删除型微管驱动蛋白(KIF)11与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白的原核表达载体,并纯化得到高纯度的MBP-删除型KIF11融合蛋白。方法:PCR法从全长的KIF11基因组中扩增KIF11的相关删除型基因并连接到原核表达载体pMal中,此载体包含一个表达MBP的基因,删除型KIF11片段插入后与其融合,筛选和测序鉴定阳性克隆。将重组质粒转化到Rosseta大肠杆菌中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达和亲和层析分离纯化表达产物,对纯化的蛋白进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹杂交(Western blot)鉴定。结果:成功扩增删除型KIF11基因,构建MBP-KIF11-head,-stalk和-tail重组质粒并在Rosseta中诱导表达出MBP-KIF11-head,-stalk,-tail融合蛋白。经SDS-PAGE和Western blot法验证了高纯度纯化的融合蛋白。结论:建立了高效稳定的MBP-KIF11表达体系,为进一步研究KIF11与mRNA调控蛋白锌指结合蛋白1相互作用的区域打下基础。
- 宋婷婷黄振强郑意宫瑾Stanley Lin顾巍
- 在酿酒酵母中表达人血清白蛋白
- 2013年
- 目的:利用酵母表达系统表达人血清白蛋白(HSA)。方法:用PCR方法扩增HSA cDNA,利用限制性内切酶将含HSA片段定向插入酵母表达质粒pYET中构建分泌型重组表达载体pYET-HSA,通过DNA测序确定构建的融合蛋白基因序列的正确性。用重组质粒转化酿酒酵母感受态细胞,在亮氨酸营养缺陷型培养基上筛选含重组质粒的酵母转化子菌落。培养转化子酵母,表达HSA,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)和Western blot检测表达情况。结果:DNA序列分析显示,编码外分泌型HSA的基因构建成功。免疫印迹和SDS-PAGE检测结果显示,pYET-HSA酵母转化子可在非诱导条件下表达分泌型可溶性HSA。结论:在酿酒酵母中成功表达HSA。
- 郑意宫瑾顾巍
- 关键词：酿酒酵母人血清白蛋白WESTERNBLOT
- KIF11结构域在真核细胞的表达及其对细胞增殖的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:研究不同KIF11蛋白结构域对细胞增殖的影响,并检测对人HEK293T细胞增殖的抑制效果。方法:PCR扩增全长KIF11编码的mRNA,将含有HA抗原表位的KIF11-motor、-tail等结构域克隆到真核表达载体中。观察这些结构域在HEK293T中的表达和对细胞增殖的影响。结果:表达载体转染后,KIF11-motor、-tail能在细胞内有效表达,且都能抑制细胞增殖。结论:KIF11-tail抑制细胞增殖的能力比KIF11-motor更有效。
- 郑桂玉黄振强顾巍林立
- 关键词：基因克隆和表达细胞增殖
- 乳腺癌转移的分子机制被引量：1
- 2013年
- 乳腺癌是一种容易发生器官转移的女性常见恶性肿瘤。乳腺癌细胞的特异性、转移器官微环境以及二者之间的相互作用是形成乳腺肿瘤转移的重要因素。乳腺癌细胞以及靶点组织所表达的一些细胞因子,使乳腺癌细胞扩散到转移灶器官并形成转移瘤成为可能。本文就乳腺癌转移过程中所涉及到的胞外基底膜结构改变、乳腺癌细胞的迁移行为变化以及转移所需微环境等作一综述。
- 黄振强宫瑾郑意宋婷婷顾巍
- 关键词：乳腺癌分子机制
- 胰岛素前体基因克隆及其原核表达载体的构建被引量：1
- 2014年
- 目的:构建胰岛素前体基因的原核表达载体。方法:以重叠PCR方法扩增获得胰岛素前体基因片段,并将片段克隆入zero pCR4 Blunt-TOPO载体内,获得胰岛素前体中间载体;随后将胰岛素前体克隆到Pet23表达载体中。结果:双酶切鉴定结果显示,成功构建了胰岛素前体基因的原核表达载体。结论:本实验成功构建了胰岛素前体基因的原核表达载体,为后续实现大规模的实验室表达和胰岛素的工业化生产奠定了坚实的基础。
- 李德玲张前军顾巍
- 关键词：胰岛素PCR扩增原核表达
- 基础生物学实验室的科学化管理被引量：1
- 2014年
- 通过科学化管理,力求提高基础生物学实验室学生的团队意识与科研热情,使他们加深对科研的理解与认识,积极投身于科研探索与创新活动中去,最终不断提高科研人员和学生的个人科研能力,为国家培养更多优秀人才和更高质量的科研成果。
- 李德玲顾巍
- 关键词：教学管理
- 提高酿酒酵母异源蛋白表达及分泌效率的研究进展被引量：1
- 2013年
- 酿酒酵母异源蛋白表达系统已广泛用于人类的生产和生活,特别是在生物制药领域的应用影响显著。如何进一步提高酿酒酵母异源基因的表达效率和分泌具有较高质量的蛋白是目前研究的主要方向。本文就酿酒酵母表达系统的载体构建、分泌蛋白运输及减少分泌蛋白降解等研究进展作一综述。
- 宫瑾黄振强郑意宋婷婷顾巍
- 关键词：酿酒酵母蛋白表达
- IMP1对人乳腺癌细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的观察胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白1(IMP1)的表达对人乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法取对数生长期的人乳腺癌细胞株MDA231-IMP1-GFP和MDA231-GFP细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成相同浓度的细胞悬液,加入培养板中分别培养24、48、72 h后,采用细胞计数板计数法及MTT检测法进行计数及比较。结果 IMP1的表达对细胞形态没有影响。在不同时间点,细胞计数板计数法及MTT法均显示,MDA231-IMP1-GFP细胞的增殖率低于MDA231-GFP(P均<0.01)。结论 IMP1的表达对人乳腺癌细胞MDA231的增殖具有抑制作用。
- 陈少英黄振强顾巍
- 关键词：乳腺癌细胞增殖
- KH34基因荧光表达质粒的构建
- 2014年
- 目的构建KH34基因的荧光表达质粒。方法应用分子生物学手段将KH34基因克隆入phage-UBC-flag-cherry载体,构建KH34的荧光表达质粒,并以该质粒转染293T细胞,荧光显微镜下观察该质粒在细胞内的定位。结果成功构建了KH34的荧光表达质粒,并成功转染293T细胞。结论本实验成功构建了KH34的荧光表达质粒,转染后的293T细胞也具有明显的红色荧光,为后续分析KH34对细胞的功能影响奠定了基础。
- 李德玲刘欣顾巍
- 关键词：荧光质粒构建荧光显微镜
- 芽殖酵母ASH1 mRNA的定位机制
- 2014年
- mRNA定位是一种基因转录后水平的重要调控机制,对细胞的生理活动和分化发育都有着极其重要的作用。在芽殖酵母有丝分裂中,ASH1 mRNA在子细胞芽尖因不对称定位表达抑制了子细胞交配类型的转换。本综述介绍了芽殖酵母ASH1 mRNA定位的分子机制。
- 张前军李德玲顾巍
- 关键词：MRNA酵母转录后调控
