宫瑾
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 麦芽糖结合蛋白-微管驱动蛋白11删除型融合基因表达载体的构建及其蛋白表达
- 2013年
- 目的:构建删除型微管驱动蛋白(KIF)11与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白的原核表达载体,并纯化得到高纯度的MBP-删除型KIF11融合蛋白。方法:PCR法从全长的KIF11基因组中扩增KIF11的相关删除型基因并连接到原核表达载体pMal中,此载体包含一个表达MBP的基因,删除型KIF11片段插入后与其融合,筛选和测序鉴定阳性克隆。将重组质粒转化到Rosseta大肠杆菌中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达和亲和层析分离纯化表达产物,对纯化的蛋白进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹杂交(Western blot)鉴定。结果:成功扩增删除型KIF11基因,构建MBP-KIF11-head,-stalk和-tail重组质粒并在Rosseta中诱导表达出MBP-KIF11-head,-stalk,-tail融合蛋白。经SDS-PAGE和Western blot法验证了高纯度纯化的融合蛋白。结论:建立了高效稳定的MBP-KIF11表达体系,为进一步研究KIF11与mRNA调控蛋白锌指结合蛋白1相互作用的区域打下基础。
- 宋婷婷黄振强郑意宫瑾Stanley Lin顾巍
- 在酿酒酵母中表达人血清白蛋白
- 2013年
- 目的:利用酵母表达系统表达人血清白蛋白(HSA)。方法:用PCR方法扩增HSA cDNA,利用限制性内切酶将含HSA片段定向插入酵母表达质粒pYET中构建分泌型重组表达载体pYET-HSA,通过DNA测序确定构建的融合蛋白基因序列的正确性。用重组质粒转化酿酒酵母感受态细胞,在亮氨酸营养缺陷型培养基上筛选含重组质粒的酵母转化子菌落。培养转化子酵母,表达HSA,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)和Western blot检测表达情况。结果:DNA序列分析显示,编码外分泌型HSA的基因构建成功。免疫印迹和SDS-PAGE检测结果显示,pYET-HSA酵母转化子可在非诱导条件下表达分泌型可溶性HSA。结论:在酿酒酵母中成功表达HSA。
- 郑意宫瑾顾巍
- 关键词：酿酒酵母人血清白蛋白WESTERNBLOT
- 乳腺癌转移的分子机制被引量：1
- 2013年
- 乳腺癌是一种容易发生器官转移的女性常见恶性肿瘤。乳腺癌细胞的特异性、转移器官微环境以及二者之间的相互作用是形成乳腺肿瘤转移的重要因素。乳腺癌细胞以及靶点组织所表达的一些细胞因子,使乳腺癌细胞扩散到转移灶器官并形成转移瘤成为可能。本文就乳腺癌转移过程中所涉及到的胞外基底膜结构改变、乳腺癌细胞的迁移行为变化以及转移所需微环境等作一综述。
- 黄振强宫瑾郑意宋婷婷顾巍
- 关键词：乳腺癌分子机制
- 酿酒酵母表达系统的构建与优化
- 酿酒酵母是一种单细胞真核生物,但其具有与高等真核生物相同的许多基因、细胞器和功能。其分泌路径在结构和功能上与哺乳动物分泌系统的许多情况相似,包括蛋白折叠和降解的能力,糖基化和分泌蛋白的能力。酿酒酵母适合于表达科学和商业上...
- 宫瑾
- 关键词：酿酒酵母胰岛素糖尿病蛋白表达
- 文献传递
- 提高酿酒酵母异源蛋白表达及分泌效率的研究进展被引量：1
- 2013年
- 酿酒酵母异源蛋白表达系统已广泛用于人类的生产和生活,特别是在生物制药领域的应用影响显著。如何进一步提高酿酒酵母异源基因的表达效率和分泌具有较高质量的蛋白是目前研究的主要方向。本文就酿酒酵母表达系统的载体构建、分泌蛋白运输及减少分泌蛋白降解等研究进展作一综述。
- 宫瑾黄振强郑意宋婷婷顾巍
- 关键词：酿酒酵母蛋白表达
