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曹秀琴

作品数：33 被引量：63H指数：4
供职机构：宁夏医科大学更多>>
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相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

题名
作者

文献类型

  • 29篇期刊文章
  • 4篇专利

领域

  • 29篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 19篇细胞
  • 16篇嗜肺
  • 16篇嗜肺军团菌
  • 10篇巨噬细胞
  • 8篇FCΓ
  • 8篇FCΓR
  • 6篇自噬
  • 5篇蛋白
  • 5篇小鼠
  • 4篇血清
  • 4篇受体
  • 4篇抗体
  • 4篇RAW264...
  • 4篇纯化
  • 3篇原核表达
  • 3篇乳腺
  • 3篇细胞自噬
  • 3篇慢病毒
  • 3篇干细胞
  • 3篇FCΓRII...

机构

  • 33篇宁夏医科大学
  • 8篇教育部
  • 1篇滨州医学院附...
  • 1篇宁夏大学
  • 1篇宁夏回族自治...
  • 1篇解放军534...

作者

  • 33篇曹秀琴
  • 21篇杨志伟
  • 6篇蒲静
  • 6篇孙苗
  • 5篇马文智
  • 4篇俞晓丽
  • 3篇常青
  • 3篇张宁
  • 3篇于佳
  • 3篇王燕蓉
  • 3篇李雪
  • 3篇王琦
  • 3篇裴秀英
  • 3篇刘心蕊
  • 2篇杨延周
  • 2篇马会明
  • 2篇张雷
  • 2篇惠英华
  • 1篇彭晓东
  • 1篇黑常春

传媒

  • 13篇细胞与分子免...
  • 7篇宁夏医科大学...
  • 2篇宁夏医学杂志
  • 2篇河南科技大学...
  • 1篇微生物学报
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇解放军医学杂...
  • 1篇免疫学杂志
  • 1篇山东大学学报...

年份

  • 1篇2025
  • 2篇2023
  • 3篇2022
  • 3篇2021
  • 1篇2020
  • 1篇2019
  • 1篇2018
  • 3篇2017
  • 3篇2016
  • 3篇2015
  • 3篇2014
  • 3篇2013
  • 2篇2012
  • 4篇2011
共 33 条 记 录，以下是 1-10
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嗜肺军团菌重组MOMP蛋白间接ELISA方法的建立及其在血清学诊断中的应用被引量：3
2013年
目的表达及纯化出嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)作为诊断抗原,研究其在嗜肺军团菌感染血清学诊断中的实用价值。方法将已成功构建的重组质粒pET-momp转化到大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中,诱导重组MOMP表达,运用SDS-PAGE和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG、IgM、IgA的ELISA试剂盒筛选出58份阳性血清和32份阴性血清,用纯化的MOMP蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA,同时与R&D公司军团菌的IgG、IgM、IgA ELISA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后用受试者工作特征(ROC)曲线对这2种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及检测结果的一致性,来评价重组MOMP间接ELISA的应用价值。结果成功诱导表达并纯化出相对分子质量(M r)大约为45 000的重组MOMP蛋白。重组MOMP建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与R&D公司的ELISA试剂盒进行比较,IgG抗体灵敏度90.9%,特异度91.7%,一致性Kappa值0.784(P<0.05),ROC曲线下的面积0.913;IgM抗体灵敏度91.4%,特异度90.6%,一致性Kappa值0.809(P<0.05),ROC曲线下的面积为0.910;IgA抗体灵敏度92.1%,特异度88.9%,一致性Kappa值0.793(P<0.05),ROC曲线下的面积0.905。结论成功诱导表达及纯化出重组MOMP蛋白,将其作为诊断抗原所建立的间接ELISA表现出了较好的特异性,灵敏度和一致性,为军团病的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础。
王涛张彩霞曹秀琴杨志伟
关键词：嗜肺军团菌ELISA
小鼠FcγR Ⅱb胞外区重组蛋白的原核表达及对小鼠SLE模型的治疗作用研究
2015年
目的构建小鼠Fcγ receptor Ⅱb（FcγR Ⅱb ）胞外区蛋白原核表达载体pET-FcγRⅡb，诱导表达并纯化，观察其在系统性红斑狼疮（SLE）疾病中的预防与治疗作用。方法PCR扩增获得小鼠FcγR Ⅱb 基因，并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a（＋），构建原核表达重组质粒小鼠pET-FcγR Ⅱb ，经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析正确后，转化大肠杆菌BL21（DE3），IFFG进行诱导蛋白表达，确定最佳诱导条件，经Western blot鉴定正确后，纯化目的蛋白。ELISA法检测纯化蛋白与小鼠血清中免疫复合物的结合能力。将MRL／lpr SLE小鼠预防组（周龄12周左右）和治疗组（周龄19周左右）各40只随机分成蛋白液60μl（4．8μg）、120μl组（9．6μg）、180μl（14．4μg）组以及对照PBS组4组，每组10只，通过尾静脉注射将蛋白液注射进入MRL／lpr SLE小鼠体内，连续注射4周，每周1次。注射完成后，观察1周并收集血清，用ELISA法对预防组与治疗组SLE小鼠的可溶性FcγR Ⅱb的含量以及小鼠抗双链DNA抗体含量进行检测。结果扩增出了小鼠FcγR Ⅱb基因，成功构建原核表达重组质粒小鼠pET—FcγRⅡb，IPTG诱导表达并纯化出重组蛋白。重组蛋白与小鼠血清具有结合力；预防组和治疗组蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别与预防对照组和治疗对照组相比可溶性FcγRⅡb含量增加（P〈0．05），蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）两两比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；小鼠抗双链DNA抗体含量检测结果显示预防组和治疗组蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别与预防和治疗对照组相比，小鼠抗双链DNA抗体含量降低（P〈0．05）；预防和治疗蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别进行两两比较后发现随着蛋白注射剂量的增加，小鼠抗双链DNA抗体含量逐渐降低（P〈0．05）。结论获得重组小鼠FcγR Ⅱb�
雷泽华曹秀琴杨志伟
关键词：SLE
变应性鼻炎IgE高亲和力可溶型Fc段受体1α(sFcε1α)蛋白的制备及血清中相应抗体的检测被引量：2
2016年
目的构建人可溶型Fc段受体1α(s FcεR1α)的原核表达载体,诱导表达并纯化重组FcεR1α胞外区段蛋白,检测其与血清中Ig E的结合力及相应抗体的含量。方法应用巢式PCR技术获得人FcεR1α胞外区段基因,构建原核表达载体p ETs Fcε1α,最佳诱导条件表达出s FcεR1α,采用亚胺二乙酸His标签纯化树脂纯化并进行Western blot法鉴定。ELISA检测人s FcεR1α与血清中Ig E的结合力及血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E及抗FcεR1α自身抗体的含量。结果扩增出人FcεR1α胞外区段基因,大小为600 bp左右。p ET-s FcεR1α经PCR、双酶切、测序鉴定正确。诱导表达、纯化出人s FcεR1α,相对分子质量(Mr)大小约为42 000。Western blot法鉴定为人s FcεR1α。人s FcεR1α可以与人血清中Ig E结合。变应性鼻炎(AR)患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。结论获得人s FcεR1α,s FcεR1α与人血清中Ig E有较强的结合力,AR患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。
邢慧慧邵辉曹秀琴杨志伟
关键词：IG可溶型
嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用被引量：3
2013年
目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG/IgM/IgA的ELISA检测试剂盒筛出40份阳性血清和30份阴性血清,用纯化的MIP蛋白建立间接ELISA,同时与R&D的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后对这两种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性,来评价该方法的应用价值。结果诱导相对分子质量(Mr)大约40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表达并纯化。纯化蛋白建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与国外ELISA试剂盒(R&D)进行比较,IgG抗体的灵敏度88.5%,特异度95.5%,一致性Kappa值0.846(P<0.05),ROC曲线下面积0.927。IgM抗体的灵敏度89.3%,特异度97.6%,一致性Kappa值0.88(P<0.05),ROC曲线下面积0.947。IgA抗体的灵敏度90%,特异度95.2%,一致性Kappa值0.856(P<0.05),ROC曲线下面积0.931。结论成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化,运用MIP作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值。
刘黎曹秀琴杨志伟
关键词：嗜肺军团菌蛋白表达血清学诊断
嗜肺军团菌pip基因原核质粒的构建及其表达
2012年
目的扩增嗜肺军团菌基因pip,构建重组质粒pET-pip并在原核系统中表达。方法采用PCR,从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增出pip基因,将其定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-pip,经限制性内切酶、PCR鉴定及测序分析后,转化BL21,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE进行鉴定。使用His-tag纯化重组蛋白PIP。结果扩增出了嗜肺军团菌726bp的pip基因,构建的原核表达重组质粒pET-pip表达并纯化出了约46kD Trx-PIP的融合蛋白。结论成功构建了嗜肺军团菌pip基因的原核重组质粒,并在大肠杆菌中得到了高效表达。
刘胜泉曹秀琴杨志伟
关键词：嗜肺军团菌纯化
人可溶型FcγRIIb的制备及其功能初步研究被引量：3
2012年
目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb(husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响。方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγRIIb的大肠杆菌BL21,镍琼脂糖磁珠纯化目的蛋白,可溶型FcγRIIb包被ELISA板,ELISA方法检测其与血清中免疫复合物结合能力,免疫磁珠法分选B细胞,分组刺激培养,ELISA检测培养物上清中IgM含量。结果:SLE患者血清中可溶型FcγRIIb浓度低于正常人(P<0.05);诱导表达并纯化获得相对分子质量(Mr)为41 500的重组蛋白;重组可溶型FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,二者孵育后吸光度(A)值随血清中免疫复合物浓度逐渐增高,至受体结合度饱和时达最大;不同刺激条件下B细胞培养10 d,各实验组抗体浓度均高于细胞对照组(P<0.01),SPA组、SPA+husFcγRIIb组抗体浓度无显著差异(P﹥0.05),SPA+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显高于SPA组(P<0.01),SPA+husFcγRIIb+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显低于SPA+IgG型抗人IgM组(P<0.01)、SPA组(P<0.01)和SPA+husFcγRIIb组(P<0.01)。结论:SLE患者血清中可溶性FcγRIIb含量低于正常人,重组人可溶性FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,抑制免疫复合物对B淋巴细胞的激活,减少IgM型抗体的分泌。
张雷曹秀琴杨志伟
关键词：FCΓRIIB可溶性结合力抗体分泌
嗜肺军团菌激活Nrf2-Keap1通路抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞自噬被引量：4
2019年
目的观察嗜肺军团菌(LP)对RAW264.7巨噬细胞自噬流及其自噬相关因子表达水平的影响并探讨其作用机制.方法活的LP和灭活的LP[感染复数(MOI)=10,50,100]分别处理RAW264.7巨噬细胞1、2、3h,通过筛选得出MOI=50,处理2h为其最佳作用条件.用雷帕霉素(RAPA)处理RAW264.7巨噬细胞12 h后,再加入活的和灭活的LP共培养2 h,并设正常对照组、RAPA处理组、活LP组、RAPA处理的活LP组、灭活LP组和RAPA处理的灭活LP组.用携带双荧光标记蛋白基因和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)基因的真核过表达质粒pmCherry-C1-EGFP-LC3B转染巨噬细胞,监测巨噬细胞自噬流的变化;用基因芯片在处理的最佳时间点筛选出LP影响巨噬细胞自噬的相关因子溶酶体/内体膜跨膜蛋白封闭蛋白(CLN3)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)、G蛋白信号传导调节蛋白19(RGSI9)、肿瘤坏死因子(TNF)、组织蛋白酶B(CTSB)、GABAA型受体相关蛋白类似物2(GABARAP12)、P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3);实时荧光定量PCR验证基因芯片结果并检测相关信号通路因子核因子E2相关因子2(Nrf2)、beclin1和Kelch样环氧氯丙烧相关蛋白1(Keapl)的mRNA水平;Western blot法验证基因芯片结果并检测Nrf2、beclinl和Keapl的蛋白水平.结果与对照组相比,活LP组和灭活LP组的自噬流受到抑制;与RAPA处理组相比,活LP组和灭活LP组自噬流受到抑制.基因芯片检测显示活LP组和灭活LP组LC3的表达下调,Pb2的表达上调.实时定量PCR、Western blot验证结果与基因芯片一致.Keap1、beclin1的mRNA和蛋白水平明显下降,Nrf2 mRNA和蛋白的水平明显增加.结论LP可抑制巨噬细胞自噬,可能与激活Nrf2-Keapl信号通路有关.
盛琳琳曹秀琴甄庆洁杨晓辰杨志伟
关键词：巨噬细胞自噬
含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达被引量：2
2014年
目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL,可诱导病毒滴度达105TU/mL,感染性良好。HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关。结论成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达。
刘慧宇曹秀琴杨志伟
降钙素原监测在ICU不同病原菌感染中的临床价值
2016年
目的研究血清降钙素原(PCT)监测重症监护室(ICU)内不同病原菌感染中的临床价值。方法选取2013年8月至2015年12月我院ICU感染患者380例,住院期间监测患者PCT水平,并分离、鉴别其感染菌种。依据受试者工作特征曲线(ROC)分析PCT水平在鉴别不同病原菌感染中的价值。结果 PCT水平及感染菌种阳性率比较,G-菌感染者高于真菌和G+菌感染者(均P<0.01),而真菌与G+菌感染者比较差异无统计学意义(P>0.05)。当血清PCT水平为2.11 ng·mL^(-1)时,曲线下面积(AUC)为0.89,鉴别G-与G+菌感染的灵敏度为82.62%,特异度为80.24%。当PCT水平为5.08 ng·mL^(-1)时,AUC为0.78,鉴别G-与真菌感染的灵敏度为68.16%,特异度为73.78%。结论血清PCT水平在鉴别G-菌与真菌,G-菌与G+菌感染方面具有较高的价值,但对真菌与G+菌的鉴别价值较低。
佳莉娟曹秀琴王琦
关键词：降钙素原重症监护病房
组蛋白去乙酰化酶6调控鞭毛重组蛋白A干扰巨噬细胞自噬
2023年
目的观察组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)调控嗜肺军团菌鞭毛重组蛋白A(rflaA)对小鼠巨噬细胞自噬相关因子表达的影响,分析其可能的作用机制。方法采用支气管肺泡灌洗法提取C57BL/6J与HDAC6-/-C57BL/6J两种小鼠巨噬细胞,用小鼠巨噬细胞表面标记物F4/80鉴定;纯化rflaA,CCK-8法检测其对小鼠巨噬细胞半数抑制浓度(IC50),筛选最佳作用浓度用于后续实验;rflaA分别干预C57BL/6J及HDAC6-/-C57BL/6J小鼠巨噬细胞6、12和24 h,RT-qPCR、Western blot及免疫荧光检测各组自噬相关因子自噬效应蛋白1(Beclin1)、自噬相关蛋白5(ATG5)、自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)、SQSTM1蛋白(P62)的表达水平。结果根据CCK-8结果计算,IC50为0.41μg·μL^(-1),最佳作用浓度为0.041μg·μL^(-1)用于后续实验;RT-qPCR、Western blot、免疫荧光结果显示,rflaA干预C57BL/6J小鼠巨噬细胞后,与0 h相比,6、12、24 h HDAC6的表达水平升高,LC3、ATG5表达水平均降低,P62的表达水平升高,Beclin1的表达水平先降低后升高(P均<0.05);rflaA干预HDAC6-/-C57BL/6J小鼠巨噬细胞后,与0 h相比,6、12、24 h LC3、ATG5、Beclin1表达水平均升高,P62的表达水平降低(P均<0.05);在相同的时间点,与C57BL/6J小鼠巨噬细胞各组相比,HDAC6敲除后各组细胞ATG5、LC3表达水平升高,Beclin1先升高后降低,P62降低(P均<0.05)。结论HDAC6促进rflaA抑制小鼠巨噬细胞自噬,HDAC6可能通过影响微管蛋白乙酰化干扰巨噬细胞自噬。
郑荣慧李攀曹秀琴陈民佳陈海霞杨志伟
关键词：嗜肺军团菌鞭毛蛋白自噬
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