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王鸿
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- 所属机构:重庆医科大学附属第一医院
- 所在地区:重庆市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
- 李文桂

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- 目的:动态观察多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照。结果:疫苗接种组的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后4~8周、2~8周、2~8周和6~10周升高,分别在免疫后6、6、4~6和8周达最高水平。结论:多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗在免疫早期(2~8周)即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应。
- 李文桂王鸿朱佑明
- 关键词:多房棘球绦虫重组BCG-EM14-3-3疫苗细胞因子
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- 王鸿李文桂
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- 2006年
- 目的构建多房棘球绦虫重组质粒pBCG-Em14-3-3,并转化BCG进行表达。方法超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Em14-3-3抗原编码基因;将该扩增产物定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG,构建重组质粒pBCG-Em14-3-3;电穿孔法转化BCG,构建多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3。免疫印迹分析pBCG-Em14-3-3的表达产物。结果RT-PCR成功扩增出779bp的Em14-3-3抗原编码基因;双酶切证实Em14-3-3抗原编码基因成功插入pBCG中;PCR证实rBCG-Em14-3-3构建成功;免疫印迹分析发现pBCG-Em14-3-3的表达产物在相对分子质量(Mr)约为27×103处有明显的目的蛋白表达条带,且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别。结论成功构建了多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3。
- 李文桂王鸿朱佑明
- 关键词:多房棘球绦虫BCG
- 多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗的构建及鉴定被引量:15
- 2006年
- 目的构建和鉴定多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗。方法超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Em14-3-3的cDNA,将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG的人结核分枝杆菌热休克蛋白(HSP)70启动子下游构建重组质粒pBCG-Em14-3-3,用电穿孔法将该质粒导入BCG构建多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗。将该疫苗接种到含12μg/ml HgCl2的罗氏培养基筛选培养3周。结果重组pBCG-Em14-3-3质粒经酶切证实构建成功,rBCG-Em14-3-3疫苗能在含12μg/ml HgCl2的罗氏培养基上生长繁殖。结论成功构建多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗,为泡球蚴病的防治提供了一种新方法。
- 王鸿李文桂
- 关键词:多房棘球绦虫重组BCG-EM14-3-3疫苗
- 多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾T细胞亚群的动态观察被引量:4
- 2007年
- 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾T细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设PBS对照。结果疫苗接种组小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群分别在免疫后2~12周和2~18周开始升高,分别在免疫后6和10周达最高水平,百分比分别为32.0%±1.6%和8.4%±0.8%。结论CD4+和CD8+T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用。
- 李文桂王鸿朱佑明
- 关键词:多房棘球绦虫重组BCG-EM14-3-3疫苗
- 多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察被引量:4
- 2008年
- 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种免疫Balb/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16周和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照。结果疫苗接种组的脾CD4+和CD8+T细胞亚群分别在免疫后2~10周和2~18周升高,分别在免疫后4周和10周达最高水平。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可诱导小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群的增殖。
- 李文桂朱佑明王鸿
- 关键词:多房棘球绦虫脾细胞亚群
- 多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗抑制小鼠脾细胞的凋亡被引量:8
- 2007年
- 目的:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠并以Em原头节攻击后探讨以上疫苗对小鼠脾细胞凋亡的变化.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫Balb/c鼠8wk后,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染18wk杀鼠取脾并分离脾细胞,流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于感染对照组.结论:泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞凋亡,而多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗可在一定程度上抑制感染鼠脾细胞的凋亡.
- 李文桂王鸿朱佑明
- 关键词:多房棘球绦虫重组BCG-EM14-3-3疫苗
- 多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞因子的变化被引量:7
- 2007年
- 目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫后再以Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠后8周,用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染。感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,并收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;皮下注射组的TNF-α水平高于鼻腔内接种组。结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗可诱导小鼠产生Th1型细胞应答,抵抗Em原头节的攻击感染。疫苗皮下注射途径优于鼻腔内接种。
- 李文桂王鸿朱佑明
- 关键词:多房棘球绦虫细胞因子
- 多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗构建及其表达效率被引量:28
- 2006年
- 目的 构建多房棘球绦虫(Em)重组卡介苗(BCG—EmⅡ/3)疫苗,分析EmⅡ/3分子在该疫苗中的表达效率。方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增EmⅡ/3的抗原编码基因;将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG,构建重组质粒pBCG—EmⅡ/3;电穿孔法转化BCG,构建多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗。免疫印迹分析重组BCG-EmⅡ/3疫苗的表达产物。结果 RT-PCR成功扩增出1680bp的EmⅡ/3抗原编码基因;双酶切证实EmⅡ/3抗原编码基因成功插入pBCG中;PCR证实rBCG—EmⅡ/3疫苗构建成功;免疫印迹分析发现重组BCG—EmⅡ/3疫苗的表达产物在相对分子质量(Mr)约为65×10^3处有明显的目的蛋白表达条带,且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别。结论 成功构建了多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ/3疫苗,为疫苗的开发和利用打下了坚实的理论基础。
- 李文桂王鸿朱佑明
- 关键词:多房棘球绦虫
- 多房棘球绦虫混合重组BCG—EmⅡ/3和BCG-Em14—3—3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的动态观察被引量:3
- 2009年
- 目的动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG—EmⅡ/3和BCG—Em14—3—3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化。方法12~14周龄、体质量20~25g的雌性Balb/c小鼠40只,鼻腔内接种上述疫苗,在0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周按体质量随机剖杀4只小鼠,经眼球取血,常规酶联免疫吸附试验法测定血清中IgG及其亚类和IgE水平。结果Balb/c小鼠的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后第2~18周升高,并分别在免疫后第10、4和4周达到最高水平,其值分别为0.095±0.033、0.022±0.001和0.023±0.003,与0周(0.030±0.013、0.012.4-0.004和0.013±0.004)比较,差异有统计学意义(q值分别为2.95、4.87和2.81,P〈0.05或〈0.01);血清IgG1、IgG3和IgE水平均在免疫后2~18周降低,并分别在免疫后4、2和6周达较低水平,其值分别为0.03±1.004、0.136±0.002和0.114±0.002,与0周(0.192±0.007、0.175±0.013和0.024±0.003)比较,差异有统计学意义(q值分别为5.16、4.93和5.32,P〈0.05或〈0.01)。结论多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG--Em14—3—3疫苗在免疫早期即可诱导小鼠产生辅助性T细胞(TH)Ⅰ型保护性免疫反应。
- 李文桂王鸿朱佑明杨梅
- 关键词:受体受体IGE