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耐亚胺培南铜绿假单胞菌膜孔蛋白OprD2基因突变与耐药分析: 2023年; 目的分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌膜孔蛋白OprD2基因突变与耐药情况。方法收集2019年1月至2021年12月南京市高淳人民医院临床标本中的亚胺培南耐药与敏感的铜绿假单胞菌株共90株,均进行细菌鉴定、药敏试验和实时荧光定量PCR检测,对膜孔蛋白OprD2表达量降低的耐亚胺培南铜绿假单胞菌株进行基因序列检测。分析细菌鉴定、药敏试验结果和标本来源情况,比较耐药组与敏感组OprD2的mRNA表达量,分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌的抗菌药敏感性结果、OprD2基因突变类型。结果90株亚胺培南耐药与敏感铜绿假单胞菌中,仪器法最低抑菌浓度≥8μg/ml、纸片抑菌圈≤15mm共45株,纳为耐药组;仪器法最低抑菌浓度≤2μg/ml、纸片抑菌圈≥19mm共45株,纳入敏感组。90株亚胺培南耐药与敏感铜绿假单胞菌主要分布于呼吸内科(40.00%)、神经内科(33.33%),标本类型主要为痰(41.11%)。耐药组铜绿假单胞菌OprD2基因的mRNA表达量为0.32(0.03,1.23),低于敏感组的0.70(0.06,2.68),差异有统计学意义(P<0.05)。耐亚胺培南铜绿假单胞菌株均对亚胺培南、哌拉西林完全耐药,对头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、美罗培南耐药率较低,对阿米卡星、庆大霉素完全敏感,而无耐药性。45株耐亚胺培南株菌中,检出OprD2基因突变或缺失40株,占比88.89%;其中终止密码提前7株、非中断突变及PCR扩增阴性均5株、移码突变13株。结论OprD2基因突变或缺失,会导致膜孔蛋白OprD2表达量明显下降,促使铜绿假单胞菌对亚胺培南产生耐药。; 万会林诸君孔燕; 关键词：亚胺培南铜绿假单胞菌

2017—2021年临床分离多重耐药铜绿假单胞菌的分布、耐药性变迁及OprD2基因突变分析被引量：2: 2022年; 目的分析攀枝花市某三甲医院近五年多重耐药铜绿假单胞菌(MDR-PA)的临床分布特点、耐药性变化趋势及OprD2基因突变情况。方法收集2017年1月—2021年12月该院细菌室分离的标本,采用微量肉汤法(MIC法)进行药敏实验。采用PCR法扩增OprD2基因,并与GenBank数据库进行Blast比对,采用DNAMAN软件进行基因的多序列比对。结果共检出非重复Pseudomonas aeruginosa(PA) 1495株,其中MDR-PA 172株,平均检出率为11.5%,后四年检出率不断升高;标本来源以痰最多见(73.8%)、病房以ICU最多(30.8%),二者在后三年检出率均逐年升高;神经科检出率逐年上升趋势明显,2021年为50.0%,超过ICU的检出率。MDR-PA对头孢他啶耐药率最高(92.3%),对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为36.8%、26.2%,对环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星5年平均耐药率较低(均<20%),对阿米卡星耐药率最低,仅为5.0%。除对氨基糖苷类药物和亚胺培南的耐药率近几年有所下降外,后三年耐药率呈逐年上升趋势的有哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星和左氧氟沙星。2017—2021年MDR-PA对哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、头孢吡肟、亚胺培南、庆大霉素、妥布霉素的耐药率有显著变化(P<0.001),对其余药物的耐药率无明显变化(P>0.05)。35株MDR-PA的OprD2基因均未缺失,但出现突变。结论临床分离的MDR-PA有逐年升高趋势,应重点监控ICU和神经科的痰标本。MDR-PA对大部分抗生素的耐药性呈上升趋势。MDR-PA的耐药性可能与OprD2基因突变有关。; 吴贤丽祝司霞; 关键词：铜绿假单胞菌耐药性多重耐药性 OPRD2 耐药性变迁基因突变

耐碳青霉烯酶铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2基因型的研究被引量：5: 2021年; 目的分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌携带耐药基因,为临床合理选用抗菌药物提供依据,为降低细菌的耐药性和控制医院感染提供参考依据。方法收集临床标本分离出的耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性;聚合酶链式反应(PCR)检测碳青霉烯类相关基因及外膜蛋白基因OprD2的携带情况。结果 PCR法检测出携带OprD2基因5株(33.3%);携带blaVIM基因4株(26.7%);携带blaOXA-10基因8株(53.3%)。blaGES、blaIMP、blaGIM、blzSIM、blaTEM、blaPER、blaVEB基因均未检出。结论铜绿假单胞菌感染以上呼吸道为主,其耐药性高,应规范临床用药,加强铜绿假单胞菌耐药性监测,有效控制院内感染。; 陈咏君郎华徐芳芫刘姝赵男; 关键词：铜绿假单胞菌耐药性多重耐药

耐亚胺培南铜绿假单胞菌OprD2基因多态性的研究被引量：6: 2020年; 目的探讨临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌膜孔蛋白OprD2基因突变与耐药的关系。方法收集2018年12月—2019年12月分离自成都医学院第一附属医院临床标本中的亚胺培南耐药与敏感的铜绿假单胞菌株各30株,采用VITEK 2全自动细菌药物敏感性鉴定系统结合纸片扩散法进行菌株鉴定和药物敏感性试验,利用实时荧光定量聚合酶链反应法检测亚胺培南耐药组与敏感组OprD2基因的表达量,挑选OprD2基因表达显著下降的耐药株进行编码区的聚合酶链反应扩增测序。结果耐药组OprD2基因的表达量较敏感组显著下降(P=0.048)。与X63152序列比较,11株OprD2表达量显著下降的菌株都存在基因变异,变异率为100%,均发生在编码区,变异位点呈现多样性。其中c.308C→G、c.344A→C、c.379G→C、c.471G→C、c.508T→C、c.553G→C、c.556-558CCG→GGC与c.565-566TG→AC的错义突变引起膜孔蛋白L2、L3茎环结构上的氨基酸改变,将会影响亚胺培南的结合。另外还发现127、169-171、175、177、604、628-630、688、719、785、826、828、842-843、886、901、928-930、934、936、944-945、1039、1041、1274这些位点的碱基突变均引起氨基酸的改变,还检测到c.1114-1115delAT以及其他的无义突变,其中12号菌株发生了OprD2基因的大片段缺失。结论OprD2基因的突变和缺失会引起膜孔蛋白OprD2表达量下降,从而导致铜绿假单胞菌对亚胺培南产生耐药。临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌菌株的OprD2基因变异具有多样性。; 白婷婷王丹范英子杨向贵周琴许颖; 关键词：铜绿假单胞菌亚胺培南耐药机制

ICU多重耐药铜绿假单胞菌oprD2基因缺失的研究: 2019年; 目的探讨ICU多重耐药铜绿假单胞菌(MDRP)外膜孔蛋白oprD2基因的缺失情况。方法通过ICU60株MDRP采用K-B法筛选出对亚胺培南耐药的菌株;采用PCR法检测对亚胺培南耐药的MDRPoprD2基因。结果60株MDRP对亚胺培南耐药有37株,耐药率61.7%(37/60);37株对亚胺培南耐药的MDRP有30株缺失oprD2基因,缺失率81.1%(30/37)。结论ICUMDRP对碳青霉烯类药物耐药严重;细菌外膜孔蛋白oprD2基因缺失导致菌体包膜通透性改变是ICUMDRP耐药机制的主要原因。; 彭咏麟刘立君; 关键词：铜绿假单胞菌多重耐药重症监护室外膜蛋白

应用环介导等温扩增技术检测铜绿假单胞菌OprD2基因的临床研究: 2018年; 目的:评价检测铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2基因缺失的环介导等温扩增技术(LAMP)的应用价值,从而为临床早期诊断耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)以及治疗方案的制定提供参考依据。方法:收集2016年1月至2016年12月上海中医药大学附属第七人民医院临床分离的IRPA,MicroScan WalkAway-96 plus全自动鉴定及药敏系统检测最低抑菌浓度(MIC),应用LAMP法检测OprD2基因的缺失,并与实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法进行比较。结果:50株样本中,DNA A260/280均≧1.72,而DNA浓度均>370 ng/μL,6号和49号样本甚至>2000 ng/μL。LAMP法检测50株IRPA的OprD2基因,结果显示26株阳性,其余24株为阴性,缺失率为48.0%;Real-time PCR法检测结果显示,50株IRPA的OprD2基因阳性和阴性分别为26株、24株,LAMP法检测结果与Real-time PCR法具有一致性。结论:针对靶点OprD2基因设计引物的LAMP法是一种快速、简便且便于临床实验室应用的方法,其检测结果与Real-time PCR法具有高度一致性。; 李志兰蒋秀娣陈佩宏别立翰郭乃华; 关键词：铜绿假单胞菌 REAL-TIME PCR LAMP

加味银翘散对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2干预作用被引量：2: 2017年; 目的研究加味银翘散对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2的干预作用。方法分别用加味银翘散原液、亚胺培南和加味银翘散原液+亚胺培南作用于铜绿假单胞菌,检测各组药物作用前后最低抑菌浓度值对亚胺培南耐药性的变化;利用荧光定量逆转录PCR检测外膜蛋白OprD2基因表达量的变化。结果 7株铜绿假单胞菌经加味银翘散原液+亚胺培南联合作用后,亚胺培南最低抑菌浓度值比药物单纯作用时均降低,下降幅度最大的达16倍;除PAE4、PAB5、PAC6三株菌株经药物作用后OprD2基因表达量变化均增加,差异均有统计学意义(P<0.05);PAA2、PAA9、PAE7、PAH3四株菌OprD2基因表达量变化均为0,差异均无统计学意义。结论亚胺培南和加味银翘散联合作用能降低铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性;PAA2、PAA9、PAE7、PAH3四株菌对亚胺培南耐药不是由OprD2数量减引少起的,可能存在其他的耐药机制;PAE4、PAB5和PAC6经药作物用后,亚胺培南最低抑菌浓度值降低,外膜通透性均增加,说明该三株菌对亚胺培南耐药是由OprD2数量减少引起的。; 林冬玲伍彬宁王琳荆张伟铮陈茶; 关键词：铜绿假单胞菌加味银翘散 OPRD2 最低抑菌浓度

重庆某三甲医院2014-2016年铜绿假单胞菌耐药表型及金属酶、外膜孔蛋白耐药基因型分析被引量：12: 2017年; 目的检测亚胺培南耐药铜绿假单胞菌金属酶基因分布和外膜孔蛋白OprD2基因缺失情况,了解铜绿假单胞菌的耐药状况。方法收集第三军医大学大坪医院野战外科研究所2014-2016年临床分离的非重复铜绿假单胞菌1 887株,VITEK-MS质谱仪进行菌株鉴定,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)法测定其对10种常用抗菌药物的敏感性,利用WHONET5.6软件对药敏资料进行统计分析,同时采用亚胺培南-EDTA纸片法筛选金属酶表型阳性的菌株,用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)测铜绿假单胞菌金属β-内酰酶(metallo-β-lactamase,MBL)相关基因(IMP、VIM、SPM、GIM、SIM、NDM)和外膜孔蛋白OprD2基因的情况。结果 3年中铜绿假单胞菌每年的分离数量分别为756株(9.4%)、579株(9.5%)和552株(10.7%),主要来自ICU病房和呼吸内科病房,标本类型以痰液为主;2014-2016年分离出的铜绿假单胞菌对妥布霉素、庆大霉素的耐药率逐年下降,其耐药率分别从2014年的11.3%、13.2%下降至2016年的7.8%、9.0%,对左旋氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率呈上升趋势,其耐药率从2014年的10.7%、9.2%上升至2016年的23.5%、11.6%。从基因型分布情况来看,269株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中MBL基因阳性51株(18.9%),外膜孔蛋白OprD2缺失158株(58.7%);51株产酶菌株中VIM型阳性29株,SPM型阳性22株,未检测出其他基因型。结论铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率较高;产MBL和外膜孔蛋白OprD2基因缺失是引起铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。; 李进胡韦维张峰领陈鸣邓少丽鲁卫平; 关键词：铜绿假单胞菌金属酶

铜绿假单胞菌对抗菌药物敏感率的变化趋势及耐碳青霉烯菌外膜通道蛋白OprD2基因检测被引量：10: 2016年; 目的:了解贵阳市某三甲医院2011年1月至2014年12月铜绿假单胞菌的临床感染分布及对常用抗生素的耐药情况,为临床合理使用抗生素提供参考并探究耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药性和外膜通道蛋白Opr D2的关系。方法:采用WHONET 5.6软件对4年间铜绿假单胞菌的标本来源、感染科室及耐药情况进行回顾性分析。收集2011-2015年临床分离的非重复耐亚胺培南铜绿假单胞菌共148株,PCR扩增外膜通道蛋白基因Opr D2。结果:(1)耐药结果显示:4年间,铜绿假单胞菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率最高,对阿米卡星的耐药率最低。4年共分离出铜绿假单胞菌2 125株,以呼吸道标本、分泌物标本及尿液标本为主,其中呼吸道标本在铜绿假单胞菌的分离率最高。临床感染科室主要集中在外科、内科以及ICU,其中ICU分离株耐药率高于其他科室。(2)PCR结果显示:148株标本中,有98株菌株Opr D2缺失,缺失率为66%。结论:该院铜绿假单胞菌耐药率较高,ICU病房高于普通病房。该院铜绿假单胞菌耐药率虽然有逐年下降的趋势,但是其耐药情况依旧很严峻。外膜通道蛋白Opr D2基因的缺失可能是该院耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药的主要耐药机制之一。; 程新谷俊莹刘宝钟筑宁; 关键词：铜绿假单胞菌耐药性

基于耐药基因OPRD2探讨铜绿假单胞菌的临床感染特性被引量：5: 2015年; 目的探讨2014年首都医科大学附属北京中医医院铜绿假单胞菌临床感染的分布情况,并分析其耐药特点。方法分离2014年全院感染病例的送检标本15 620例,留存铜绿假单胞菌,以最小抑菌浓度(MIC)法检测其对20种抗生素的敏感性,并对全耐药的铜绿假单胞菌进行耐药基因外膜蛋白D2(OPRD2)的检测。结果本研究分离非重复病原菌5075株,铜绿假单胞菌332株(6.54%)。标本来源以痰液为主,主要发生在疮疡外科、呼吸科和重症监护病房。分离的铜绿假单胞菌对阿米卡星最敏感;对头孢唑啉耐药率最高。对20种抗生素均耐药9株铜绿假单胞菌其OPRD2耐药基因并非全部缺失。结论临床感染铜绿假单胞菌比例大,范围广。加强对铜绿假单胞菌感染及耐药性的监测,尤其相关耐药基因的检测,可为临床合理治疗提供依据。; 丁军颖桂红洪燕英安世栋丁雪菲卢幼然刘清泉; 关键词：耐药基因铜绿假单胞菌

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