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Hyper-IL -6 基因诱导的体内抗肝癌免疫功能 2012年 目的:建立稳定表达Hyper-IL -6 基因的小鼠肝癌细胞株,探讨Hyper-IL -6 用于诱导抗肝癌主动免疫治疗的可行性。方法:用脂质体法将Hyper-IL -6 基因转染小鼠肝癌细胞系MM45T.Li,通过G418筛选获得抗性细胞株,命名为MM45T-HIL -6 ,RT-PCR和ELISA法检测目的基因的表达。同时筛选空载体pEGFP-C1转染的阳性克隆命名为MM45T-mock作为对照。将BALB/c小鼠随机分为3组,于各组小鼠右侧腋部皮下分别接种细胞MM45T.Li、MM45T-mock和MM45T-HIL -6 5×105个/只,体内实验观察MM45T.Li、MM45T-mock及MM45T-HIL -6 的成瘤性,流式细胞仪检测荷瘤小鼠外周血中CD4+,CD8+T淋巴细胞亚群水平。结果:RT-PCR和ELISA检测结果表明,筛选到的小鼠肝癌细胞株MM45T-HIL -6 中存在Hyper-IL -6 的表达,而MM45T.Li和MM45T-mock不表达。体内成瘤实验结果显示,与MM45T.Li、MM45T-mock相比,MM45T-HIL -6 的成瘤性下降;流式细胞分析结果显示,与接种MM45T.Li和MM45T-mock的小鼠相比,接种MM45T-HIL -6 稳定表达HYPER -IL -6 基因的小鼠肝癌细胞株的小鼠外周血中CD4+,CD8+T淋巴细胞水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:转染Hyper-IL -6 基因的小鼠肝癌细胞株能够诱导小鼠抗肝癌主动免疫反应。 郄春花 李顺天 曹武奎 陆伟 梁树人关键词:IL-6 HYPER-IL-6 癌症疫苗 抗肿瘤免疫 稳定表达融合基因Hyper-IL -6 的肝癌细胞克隆株的建立 被引量:1 2012年 Hyper-IL -6 是Fischer等依据白细胞介素6 受体(interleukin 6 receptor,IL -6 R)的结构信息设计的一种“设计细胞因子(designercytokines)”,即将人类IL -6 基因与截短形式的可溶性细胞介素6 受体(soluble interleukin 6 receptor,sIL -6 R)基因通过基因操作共价连接,并在真核细胞进行表达得到的一种具有超高效IL -6 活性的融合蛋白。 郄春花 李顺天 曹武奎 陆伟 梁树人关键词:白细胞介素6 HYPER-IL-6 基因转染 Hyper-IL -6 基因转染的瘤苗诱导的抗小鼠肝癌实验研究 目的建立稳定表达Hyper-IL -6 基因的小鼠肝癌细胞克隆株制备基因瘤苗,探讨Hyper-IL -6 用于诱导抗肝癌主动免疫治疗的可行性。方法用脂质体法将Hyper-IL -6 基因导入小鼠肝癌细胞系MM45 T.Li,通过G4... 郄春花 李顺天 曹武奎 李秀梅 陆伟关键词:外周血 小鼠肝癌细胞 HYPER-IL-6 基因转染 文献传递 Hyper-IL -6 重组慢病毒促肝细胞增殖及对大鼠急性肝衰竭保护作用的实验研究 第一部分Hyper-IL -6 重组慢病毒对肝细胞促增殖及保护作用的研究
目的:观察超级白细胞介素-6 重组慢病毒对人正常肝细胞L-02的促增殖及保护作用。
方法:利用已构建的超级白细胞介素-6 重组慢病... 刘汉屈关键词:慢病毒属 急性肝衰竭 慢病毒 肝再生 文献传递 Hyper-IL -6 重组慢病毒对大鼠急性肝衰竭的保护作用 被引量:1 2010年 目的:探讨重组慢病毒介导的超级白细胞介素6 (Hyper-IL -6 )对大鼠急性肝衰竭的保护作用及机制。方法:45只D-氨基半乳糖急性肝衰竭模型大鼠随机分为3组:FIV-HIL -6 组、FIV-IL -6 组及未感染组,造模前2小时分别给予腹腔注射FIV-HIL -6 、FIV-IL -6 和生理盐水,造模后12、24、48、72小时及7天时进行肝功能、内毒素、肝组织脂质过氧化水平(MDA、SOD)及光镜、电镜检查,并用逆转录PCR检测7天时肝组织目的基因整合状况。另取16 只正常大鼠随机分为2组,分别给予FIV-HIL -6 、FIV(空载体)一次性腹腔注射,观察重组慢病毒对大鼠的毒副作用。结果:FIV-HIL -6 组血清谷丙/草转氨酶(ALT/AST)、总胆红素(TB)、内毒素、MDA值低于FIV-IL -6 组、未感染组,SOD值较高(P<0.05),肝组织病变较轻;重组慢病毒对大鼠无明显毒副作用,大鼠肝脏组织中有目的基因Hyper-IL -6 表达。结论:FIV-HIL -6 成功转染大鼠肝脏组织,Hyper-IL -6 对急性肝衰竭大鼠肝组织有明显的抗炎抗氧化作用,能有效改善大鼠肝功能及肝组织学状况,对急性肝衰竭大鼠具有保护和治疗作用。 刘汉屈 秦波 孙文静 朱其荣 朱艳玲关键词:急性肝衰竭 慢病毒 肝再生 基因治疗 Hyper-IL -6 重组慢病毒的构建及其促肝细胞增殖的研究 目的:构建融合基因超级白介素6 /(Hyper-inerleukin-6 ,HIL -6 /),应用猫免疫缺陷病毒/(feline immunodeficiency virus,FIV/)为基础的慢病毒载体构建重组慢病毒FIV-... 孙文静关键词:HYPER-IL-6 慢病毒 基因表达 HYPER-IL-6 慢病毒 结合珠蛋白 文献传递 网络资源链接 Hyper-IL -6 重组腺病毒的制备 2009年 目的探讨大量制备高滴度重组腺病毒的方法。方法以Pac-I酶切Hyper-IL -6 重组腺病毒(AdHIL -6 )质粒,乙醇沉淀回收DNA,将线性化的AdHIL -6 质粒经脂质体转染293细胞进行病毒的包装扩增,以氯化铯密度梯度离心法纯化重组腺病毒,根据GFP(绿色荧光蛋白)计数法和有限稀释法原理测定病毒滴度及感染293细胞、L02细胞的MOI(Multiplicity of infection,感染复数),并以免疫细胞化学检测感染L02细胞后目的蛋白Hyper-IL -6 的表达。结果收集的病毒液经PCR扩增出目的条带,测得病毒滴度为1.6 ×109pfu/mL,AdHIL -6 感染293细胞、L02细胞的MOI分别是7和54,感染L02细胞后Hyper-IL -6 强阳性表达。结论成功地完成了Hyper-IL -6 重组腺病毒的制备,为后续的腺病毒载体介导的基因治疗奠定了基础。 王传敏 郄春花 秦波关键词:重组腺病毒 293细胞 基因治疗 Hyper-IL -6 融合基因重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达 2009年 目的在扩增出融合基因Hyper-IL -6 的基础上,构建重组腺病毒Ad-HIL -6 。用Ad-HIL -6 感染人肝细胞LO2,观察细胞内Hyper-IL -6 mRNA和蛋白的表达情况。方法将Hyper-IL -6 克隆至穿梭质粒,线性化后与腺病毒骨架质粒在BJ5183细菌内同源重组,构建重组腺病毒质粒。线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞,PCR进一步证实重组腺病毒的存在。RT-PCR检测Ad-HIL -6 感染LO2细胞后Hyper-IL -6 基因的表达情况,Western blot法检测Ad-HIL -6 感染LO2细胞后Hyper-IL -6 的蛋白表达情况。结果酶切及PCR鉴定表明同源重组成功,重组腺病毒质粒转染293细胞后可见绿色荧光,感染293细胞得到大量病毒。重组腺病毒Ad-HIL -6 能在LO2细胞中表达出Hyper-IL -6 基因和蛋白,条带分别为16 00bp和6 0KD左右。结论重组腺病毒AdHIL -6 构建成功,为以后进行基因治疗奠定基础。 蒋奕 秦波 胡腾关键词:HYPER-IL-6 腺病毒 超级白细胞介素-6 重组慢病毒的构建及其对肝细胞的促增殖作用 被引量:1 2009年 目的观察超级白细胞介素-6 重组慢病毒对人正常肝细胞L—02的促增殖作用。方法利用慢病毒表达质粒及其包装系统构建超级白细胞介素-6 重组慢病毒(FIV—Hyper—IL -6 )、IL -6 重组慢病毒(FIV-IL -6 )和空慢病毒载体(FIV),用嘌呤霉素筛选的方法测定其病毒滴度。将人肝细胞L02分为4组:FIV-Hyper—IL -6 组、FIV-IL -6 组、FIV组及未感染组,各组分别感染其相应的重组慢病毒,采用四甲基偶氮唑盐法检测其对L-02细胞生长状态的影响;并用RT—PCR法检测重组慢病毒感染L02细胞后产生的急性时相蛋白结合珠蛋白mRNA表达量的变化。应用方差分析进行统计学分析。结果构建出的各重组慢病毒能成功感染靶细胞,嘌呤霉素筛选法测得的各重组慢病毒的病毒滴度均为10^3pfu/ml。病毒颗粒感染L02细胞后48h,细胞的促增殖作用(4值)FIV—Hyper—IL -6 组为0.6 26 7±0.0256 ,FIV—IL -6 组、FIV组及未感染组分别为0.556 3±0.0112、0.5040±0.0078、0.4790±0.0201,F=41.09,P值均〈0.01,且随着时间的延长,对细胞的促增殖作用有所增加,并于感染后72h达到最高,为0.8000±0.016 6 。FIV—Hyper—IL -6 组细胞结合珠蛋白mRNA吸光度值为0.7030±0.0106 ,FIV—IL -6 组、FIV组及未感染组分别为0.3355±0.0093、0.1143±0.0153、0.1145±0.0076 ,q=57.5007,P值均〈0.01。结论构建的Hyper-IL -6 重组慢病毒能够显著刺激L-02细胞表达结合珠蛋白,对L-02细胞有较强的促增殖作用。 孙文静 秦波 黄涛 黄爱龙关键词:肝细胞 白细胞介素-6 慢病毒属 Hyper-IL -6 重组腺病毒治疗大鼠急性肝衰竭 被引量:1 2008年 目的探讨重组腺病毒介导的超级白细胞介素6 (Hyper-IL -6 )对大鼠急性肝衰竭的治疗作用及机制。方法80只急性肝衰竭模型大鼠随机分为:未感染组、Ad0组、AdIL -6 组、AdHIL -6 组,分别予腹腔注射生理盐水、Ad0、AdIL -6 、AdHIL -6 ,后进行肝功能指标、肝脏病理学及肝细胞原位凋亡检测,并观察增殖细胞核抗原(PCNA)、caspase-3在肝组织中的表达情况及大鼠14d存活率。结果AdHIL -6 组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)含量及凋亡指数明显降低,而肝组织PCNA表达明显增高(P<0.01),肝组织病变减轻,caspase-3表达阳性,14d存活率较高。结论Hyper-IL -6 对急性肝衰竭大鼠有明显的促肝细胞增殖及抗肝细胞凋亡效应,能有效改善肝功能及肝组织学状况,提高肝衰竭大鼠存活率。 王传敏 郄春花 秦波关键词:急性肝衰竭 重组腺病毒 肝再生 基因治疗
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郄春花 作品数:29 被引量:79 H指数:6 供职机构:天津市第二人民医院 研究主题:HYPER-IL-6 基因转染 融合基因 重组腺病毒 基因治疗 陆伟 作品数:219 被引量:857 H指数:16 供职机构:天津医科大学总医院 研究主题:肝癌 肝硬化 超声内镜 FIBROSCAN 肝肿瘤 李顺天 作品数:57 被引量:133 H指数:7 供职机构:天津市第二人民医院 研究主题:严重急性呼吸综合征 HYPER-IL-6 乙型肝炎病毒 抗体 基因转染 曹武奎 作品数:145 被引量:495 H指数:13 供职机构:天津市第二人民医院 研究主题:肝衰竭 肝功能衰竭 重型肝炎 严重急性呼吸综合征 中西医结合治疗 梁树人 作品数:80 被引量:310 H指数:10 供职机构:天津市第二人民医院 研究主题:乙型肝炎病毒 外周血单个核 乙肝病毒 慢性乙型肝炎 慢性丙型肝炎