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UGT1A1基因野生型和Q239X突变型在cos--7细胞中的表达及功能研究: 目的:探讨尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(uridine diphosphate glucuronyltransferase1A1，UGT1A1)基因野生型和Q239X突变型在非洲绿猴肾细胞(cos-7细胞)中的表达及...; 羊希; 关键词：病理学蛋白表达 COS-7细胞慢病毒载体; 文献传递

牛整合素β1亚基在COS-7细胞中的真核表达: 2016年; 整合素是由18种α亚基和8种β亚基在细胞表面形成的异型二聚体。研究发现,整合素β1亚基是粘附分子家族主要成员,对多种细胞的存活、扩增、迁移有重要作用。本研究通过设计针对牛整合素β1亚基的特异性引物,将其克隆到真核表达载体pEYFP-C1上,构建p EYFP-C1-β1重组表达质粒,经PCR和酶切鉴定符合试验预期的阳性重组质粒与脂质体按照1:1.5比例共转染COS-7细胞,48 h后可见阳性重组质粒共转染COS-7细胞出现荧光信号。结果表明,本研究成功构建出具有生物学活性的牛整合素β1亚基,为研究牛整合素β1亚基的生物学功能奠定基础。; 李敏湘; 关键词：真核表达

香烟提取物对COS-7细胞表面血栓调节蛋白荧光表达的影响: 2015年; 目的:探讨香烟提取物(CSE)是否对非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7)表面血栓调节蛋白(TM)荧光蛋白表达的影响。方法:成功构建TM-绿色荧光蛋白(GFP)质粒后,使其转染至COS-7细胞,用制备好的5%CSE孵育(5%CSE组);将无血清最低必需培养基(MEM,单纯培养基)加入一定体积的PBS进行同步培养作为对照组;采用流式细胞仪计数方法检测不同时间点COS-7表面TM荧光蛋白表达量的变化。结果:与对照组比较,5%CSE在1h、6h对COS-7表面TM荧光蛋白表达没有明显变化[1h:(134.99±18.41)比(146.61±12.06),6h(116.89±27.28)比(123.89±39.24),P均>0.05]。结论:5%香烟提取物对非洲绿猴肾成纤维细胞表面血栓调节蛋白荧光表达没有影响。; 魏玉杰刘惠亮李屹赖斌; 关键词：血栓调节蛋白 COS细胞绿色荧光蛋白质类

稳定敲低MYH10基因细胞株的建立被引量：2: 2015年; 目的构建稳定敲低MYH10基因的COS-7细胞株。方法在293TX细胞中进行病毒的包装,用获得的高效价慢病毒感染COS-7细胞,通过免疫印迹和荧光显微镜,检测病毒感染后COS-7细胞MYH10蛋白表达的变化。结果在构建的两种重组质粒中,MYH10-lentiviral shRNA-2在转染后表现出明显的干扰作用,感染后能明显下调COS-7细胞的MYH10蛋白表达。结论病毒感染的COS-7细胞可明显抑制COS-7细胞内源MYH10的表达,说明了稳定敲低MYH10基因的COS-7细胞株的建立,为进一步研究MYH10在相关疾病中的功能奠定了基础。; 周晨辰陆琤张鹏飞张硌; 关键词：慢病毒感染

恒河猴P21基因在COS-7细胞中沉默位点的验证: 2015年; 目的在细胞水平筛选恒河猴P21基因的有效沉默靶点。方法检测COS-7中P21基因的表达水平;设计shRNA并构建P21-RNA干扰慢病毒载体FUGW-TDT-P21shRNA转染COS-7细胞,通过real-time PCR检测沉默效率,并以Western blot在蛋白水平进行验证。结果筛选到四个有效的靶位,分别位于P21 mRNA的541-561、542-562、215-239、624-648 bp。四个靶位点在mRNA水平的沉默效率分别为(91.82±3.21)%、(82.47±2.48)%、(81.31±2.69)%和(87.35±4.59)%。相应的蛋白表达量为(11.97±0.70)%、(20.22±0.65)%、(23.21±0.63)%和(14.42±0.86)%。结论在细胞水平筛选得到四个有效的P21基因沉默靶点,可用于恒河猴基因沉默研究。; 李雨函苏静芬张晨石亮刘云波; 关键词：基因沉默 P21基因恒河猴

尼罗罗非鱼3种Siglecslike融合蛋白在COS-7细胞中的表达及其结合活性的初步研究: 2015年; 为获得尼罗罗非鱼Siglecs like融合蛋白,开展相关Siglecs like蛋白的功能研究,深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的3个含Siglecs like ORF的克隆质粒,PCR扩增获得Siglec-1、Siglec-4b和Siglec-14 like的膜外段序列,插入真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc中,双酶切、测序鉴定后转染COS-7细胞。q PCR、Western-blot对目的蛋白的表达进行检测;亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯化效率。ELISA检测融合蛋白与GBS的结合活性。测序结果显示,成功构建3个融合蛋白真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc-Siglecs like/Ex。检测结果显示,转染细胞中3个Siglecs/Ex-Fc融合蛋白在mRNA和蛋白水平都有高效表达,且过柱后的融合蛋白具有较高纯度;3个融合蛋白与罗非鱼源GBS的结合活性较对照组均有显著差异。研究表明,利用真核表达系统成功制备了具有较高纯度的尼罗罗非鱼3种Siglecs融合蛋白,且均有与GBS的结合活性。; 魏远征董浚键卢迈新孙成飞田园园叶星; 关键词：尼罗罗非鱼真核表达结合活性

人BCRP高效稳定表达COS-7细胞系的建立及其药物外排活性鉴定: 2014年; 目的建立乳腺癌耐药蛋白BCRP高效稳定表达COS-7细胞系,为相关药物的药物转运及其耐药性研究奠定基础。方法采用RT-PCR技术从MCF-7/ADR乳腺癌细胞中扩增出乳腺癌耐药蛋白基因BCRP的cDNA序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),获重组质粒pcDNA3.1(+)-BCRP,将重组质粒pcDNA3.1(+)-BCRP转染COS-7细胞,经G418筛选后获得抗性细胞克隆。运用基因组PCR、SDSPAGE鉴定抗性细胞中外源BCRP基因的整合及表达,并以BCRP底物mitoxantrone对鉴定阳性的细胞克隆进行转运活性验证。结果成功克隆BCRP的cDNA并构建真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)-BCRP。转染COS-7细胞后获得抗性克隆10个,PCR鉴定阳性有4个,其中2个克隆能高效表达BCRP蛋白。经活性验证,2个高表达的细胞克隆中有一个能显著高效外排BCRP底物mitoxantrone,显示良好的生物活性功能。结论成功建立一株BCRP高效稳定表达的COS-7细胞系,且具有特异性生物活性,可用于BCRP相关药物转运及耐药性研究。; 张辉贾英王珍玉邓继峰王海峰戴仁科黄黎珍; 关键词：乳腺癌耐药蛋白药物转运 COS-7

Dodecylamine Derivative of Hydroxocobalamin Acts as a Potent Inhibitor of Cobalamin-Dependent Methionine Synthase in Mammalian Cultured COS-7 Cells被引量：1: 2014年; We evaluated whether the dodecylamine derivative of hydroxocobalamin acts as a potent inhibitor of cobalamin-dependent enzymes in an African green monkey kidney cell, COS-7. When the dodecylamine derivative (1.0 μmol/L) did not show any cytotoxicity in the cultured cells, the derivative could not affect methylmalonyl-CoA mutase (holo-enzyme) activity, but significantly inhibit methionine synthase (holo-enzyme) activity in the cell homogenates of COS-7 grown in 1.0 μmol/L hydroxocobalamin-supplemented medium. An immunoblot analysis indicated that the dodecylamine derivative could not decrease the protein level of methionine synthase, but significantly inhibit the enzyme activity.; Tomohiro BitoMariko YasuiToshio IwakiYukinori YabutaTsuyoshi IchiyanagiRyoichi YamajiYoshihisa NakanoHiroshi InuiFumio Watanabe; 关键词：DODECYLAMINE DERIVATIVE COBALAMIN COS-7

稳定表达人BCRP的转基因COS-7细胞系的建立研究: 肿瘤已成为严重危害人类健康和生命的高发病，其治疗手段主要包括化疗、手术、放疗及生物治疗等。其中，药物治疗在治疗肿瘤过程中具有举足轻重的地位。近年来，不断出现的新的抗肿瘤药物和靶向药物为肿瘤患者带来了新的希望。然而，耐药一...; 张辉; 关键词：乳腺癌耐药蛋白多药耐药性 COS-7 米托蒽醌; 文献传递

小鼠miR-214真核表达载体的构建及其鉴定: 2013年; 目的构建小鼠miR-214的pcDNA3.1(+/-)真核表达载体并在COS-7细胞中转染检测其表达。方法小鼠基因组DNA扩增得到miR-214序列,将酶切后的miR-214克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+/-),重组pcDNA3.1(+/-)-miR-214经过酶切和测序鉴定后转染COS-7细胞并应用萤光定量PCR法检测miR-214表达水平。结果小鼠miR-214真核表达载体序列分析完全正确;转染COS-7细胞后miR-214的表达水平可增加1.41倍。结论成功构建了pcDNA3.1(+/-)-miR-214真核表达载体并能在真核细胞中进行表达,为进一步进行miR-214的功能研究提供了实验基础。; 施冰Les ElzenaarRalphvan OortYigal Pinto; 关键词：微RNAS 真核细胞 COS细胞小鼠

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