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乐果对C2C12细胞内质网应激及成肌分化的影响
2025年
本试验用不同浓度(0、0.3、0.6、0.9 mmol/L)的乐果(DIM)处理C2C12细胞24 h,采用CCK-8检测细胞活力,光镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构,Western-blot检测Bip、PERK/e IF2α通路相关蛋白及成肌分化相关蛋白MyOD、MyOG、My HC的表达水平。结果显示,与0 mmol/L组相比,0.3 mmol/L组的细胞活力、Bip及PERK/e IF2α通路相关蛋白表达水平、成肌分化相关蛋白的蛋白表达水平均无显著差异。随DIM浓度升高,细胞活力极显著降低(P<0.01);细胞形态发生改变,死细胞增多,细胞超微结构受损明显;Bip及PERK/e IF2α通路相关蛋白表达水平显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高;成肌分化相关蛋白的表达水平显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低。添加PERK/e IF2α通路特异性抑制剂GSK2606414与DIM共处理,相关蛋白的表达水平被扭转。结果表明,DIM导致C2C12细胞内质网应激并激活了下游的PERK/e IF2α通路,且该通路介导了DIM致C2C12细胞成肌分化受损的过程。
康国静陈嘉伟邹辉顾建红顾建红卞建春袁燕
关键词:乐果C2C12内质网应激成肌分化
skMLCK基因对成肌细胞C2C12肌纤维组成及信号通路的影响
2025年
旨在研究高、低表达骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(skMLCK)基因对肌纤维组成成分和信号通路关键分子的影响。采用高表达和RNAi技术,获得skMLCK高、低表达稳转成肌细胞C2C12细胞株,提取细胞总RNA和总蛋白质,采用实时定量PCR和Western blot方法检测skMLCK高、低表达后C2C12中skMLCK基因,5种肌纤维组成成分肌球蛋白轻链(MLC)、肌球蛋白重链(MyHC)slow、MyHC 2a、MyHC 2x和MyHC 2b和6种信号通路关键因子肌球蛋白增强因子2C(MEF2C)、钙调蛋白(CaM)、促分裂原活化蛋白激酶p38(MAPKp38)、AMPK激活性蛋白激酶α2(AMPKα2)、RhoA和丝切蛋白2(CFL2)的表达情况。结果:在高、低表达稳转株中信号通路关键分子MAPKp38与skMLCK蛋白和mRNA表达量变化相同;2种肌纤维组成成分(MyHC 2x和MyHC 2b)和3种信号通路关键分子(CFL2、AMPKα2和RhoA)与skMLCK基因mRNA表达量变化相反;2种肌纤维组成成分(MyHC 2x和MyHC 2b)和4种信号通路关键分子(MEF2CCaM、AMPKα2CFL2)与skMLCK蛋白表达量变化相反,其余组分结果均一致;将所有蛋白质表达结果合并进行统计学分析发现,skMLCK基因与信号通路RhoA高度相关。综上,skMLCK基因可能通过改变C2C12细胞中RhoA信号通路来影响肌纤维的组成,skMLCK基因可以抑制CFL2的表达和肌纤维的生长。
李孝涵朱弘焱韩佳琪张尚松田玉民苏玉虹
关键词:肌纤维信号通路
黄芩苷通过调控铁死亡减轻H9c2细胞缺氧复氧损伤及其机制研究
2025年
目的:研究黄芩苷通过铁死亡途径对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及机制。方法:采用Na_(2)S_(2)O_(4)诱导大鼠H9c2心肌细胞铁死亡模型,随后用黄芩苷干预。采用试剂盒检测细胞活力、ROS、线粒体膜电位和Fe^(2+)水平。Western blotting检测细胞PTGS2、NOX2和GPX4蛋白表达水平。PTGS2激动剂BUR1联合黄芩苷干预Na_(2)S_(2)O_(4)诱导的细胞后,试剂盒检测细胞Fe^(2+)水平。结果:80μmol/L以内的黄芩苷对H9c2细胞无毒性。Na_(2)S_(2)O_(4)诱导H9c2细胞铁死亡,表现为细胞ROS和Fe^(2+)水平升高,线粒体膜电位坍塌,GPX4表达明显下降(P<0.05)。黄芩苷干预后,Na_(2)S_(2)O_(4)诱导的细胞ROS和Fe^(2+)水平下降,线粒体膜电位恢复,GPX4表达明显升高(P<0.05),铁死亡进程被逆转。Na_(2)S_(2)O_(4)诱导H9c2细胞后,PTGS2和NOX4表达明显升高(P<0.05),而黄芩苷干预后,Na_(2)S_(2)O_(4)诱导的H9c2心肌细胞PTGS2和NOX4表达明显降低(P<0.05)。黄芩苷与PTGS2和NOX4有很好的结合活性,结合能分别为-10.65和-8.82 kcal/mol。BUR1能够逆转黄芩苷抑制的Fe^(2+)水平。结论:黄芩苷对Na_(2)S_(2)O_(4)诱导H9c2细胞建立的缺氧复氧损伤模型铁死亡具有明确的恢复作用,其机制可能与其抑制PTGS2和NOX4蛋白表达有关。
李家权许锦谭子富方孝俊
关键词:黄芩苷NOX4
骨髓间充质干细胞来源的外泌体抑制地塞米松诱导的C2C12肌管萎缩
2025年
目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMS{2}s)来源的外泌体(exsomes,EXOs)对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导的{2}2{2}12肌管萎缩的影响。方法(1)分离提取培养{2}57BL/6J小鼠BMS{2}s。(2)提取并鉴定BMS{2}s-EXOs。(3){2}2{2}12细胞成肌分化。(4)将肌管细胞分为对照组({2}ontrol,2%马血清培养基培养48 h)、地塞米松组(DEX、浓度为10μmol·L^(-1)的DEX干预肌管48 h)、外泌体组(EXOs、外泌体干预肌管48 h)、外泌体抑制剂组(GW4869、10μmol的GW4869干预BMS{2}s后提取的外泌体干预肌管48 h)。48 h后测量各组肌管直径,{2}{2}K-8法检测各组细胞活力,Western blot检测各组肌肉萎缩及成肌分化相关蛋白的表达量。结果BMS{2}s呈长梭形,BMS{2}s-EXOs在透射电镜下为圆形的双层膜结构,直径约200 nm,且高表达{2}D9、{2}D63和{2}D81。相比于{2}ontrol组,DEX组细胞活性降低(P<0.01),肌管细胞直径减少(P<0.01),atrogin-1(P<0.05)和MuRF-1(P<0.01)的表达明显上调,MYOD(P<0.01)蛋白表达降低;相比于DEX组,BMS{2}s-EXOs组细胞活性升高(P<0.01),肌管细胞直径增加(P<0.01),atrogin-1(P<0.05)和MuRF-1(P<0.01)的表达明显下调,MYOD(P<0.01)蛋白表达升高;相比于BMS{2}s-EXOs组,BMS{2}s-EXOs(GW4869)组细胞活性降低(P<0.05),肌管细胞直径减少(P<0.01),atrogin-1(P<0.05)和MuRF-1(P<0.05)的表达上调,MYOD(P<0.01)蛋白表达降低。结论骨髓间充质干细胞来源的外泌体(BMS{2}s-EXOs)可抑制地塞米松诱导的{2}2{2}12肌管萎缩。
柯义兵丁永宏阿布都克热木·达吾提郭浩然兰志杰王勇平
关键词:外泌体肌管C2C12
白藜芦醇通过激活JAK2/STAT3信号通路抑制缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡
2025年
目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法以H9c2心肌细胞为研究对象,建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2cleaved caspase-3及JAK2/STAT3信号通路蛋白的表达水平;采用JAK2抑制剂AG490研究抑制JAK2/STAT3信号通路对RSV减轻H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响。结果RSV可有效抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡,并促进p-JAK2和p-STAT3蛋白表达,而AG490干预后明显拮抗RSV抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用。结论RSV通过激活JAK2/STAT3信号通路,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。
李金玉黄丹梅张艳美高分飞汪彬
关键词:白藜芦醇H9C2心肌细胞JAK2/STAT3信号通路AG490
富血小板血浆结合周期性机械牵拉对C2C12肌管萎缩的影响及机制探讨
2025年
目的:研究富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)结合周期性机械牵拉对C2C12肌管萎缩的影响及机制。方法:通过蛋白质印记(Western Blot,WB)检测MyoD、MyoG的表达选取最适PRP浓度。随后探究PRP结合周期性机械牵拉(Str)对C2C12细胞的促分化作用;用TNF-α诱导C2C12肌管萎缩,改良吉姆萨染色验证模型;为探究2%PRP结合周期性机械牵拉对C2C12肌管萎缩的作用及机制,将实验分为CON组、TNF-α组、TNF-α+2%PRP组、TNF-α+2%PRP+Str组,并加入抑制剂,检测MuRF-1、Fbx32及Akt、p-Akt、p70、p-p70表达变化。结果:2%PRP组MyoD、MyoG表达含量明显增加;2%PRP+Str组MyoD、MyoG表达含量增加显著;萎缩实验中,改良吉姆萨染色显示,TNF-α组肌管明显萎缩,TNF-α+2%PRP组可改善肌管萎缩现象;TNF-α+2%PRP+Str组MuRF-1、Fbx32表达含量下降;使用抑制剂干预后,PRP结合周期性机械牵拉的抗萎缩作用被抑制。结论:2%PRP结合周期性机械牵拉可促进C2C12细胞分化,改善肌管萎缩,通过Akt/p70信号通路发挥作用。
谢晓婷何永马彦韬王博贾佩玉郑拥军
关键词:富血小板血浆分化肌肉萎缩
乙型肝炎病毒中国流行株B2C2基因型模型的人工构建与siRNA化合物评估
2025年
目的 为评估对中国乙型肝炎病毒(HBV)感染人群具有潜在疗效的siRNA化合物,构建一种针对中国流行株代表性HBV的细胞模型。方法 选择中国大范围流行的1 416条B2 HBV基因组序列和1 636条C2 HBV基因组序列整合构建中国HBV参考基因组。在此基础上构建中国参考HBV体外细胞评价模型,通过考察细胞中HBV DNA和细胞上清液中HBsAg、HBeAg的表达用来评估系统是否构建成功。通过该细胞模型评估得到最优siRNA化合物,进一步在HBV转基因小鼠体内中进行评估。结果 中国HBV参考基因组构建的两个细胞模型的HBV DNA和乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)均能正常表达,B2型表达值分别为50 585 copies/μL、0.55 PEIU/mL、55.88 IU/mL,C2型表达值分别为45 302 copies/μL、35.31 PEIU/mL、56.9 IU/mL。通过该体外细胞模型评估得到的化合物BPR2030以3 mg/kg单次皮下注射到HBV转基因小鼠体内,小鼠血清中HBV DNA、HBsAg、HBeAg的最大抑制活性相比自身基线分别下调1.82(log10 IU/mL)、2.55(log10 IU/mL)、0.95(log10 PEIU/mL),给药后7~35 d对HBV的抑制活性均显著优于阳性参照物(P<0.05)。结论 成功构建了中国HBV流行株代表基因型表达的细胞模型,基于该细胞模型评估后得到的siRNA化合物在转基因小鼠体内表现出对HBV病毒高效的抑制活性,表明该细胞模型稳定可靠,有利于有针对性地开发更适合中国HBV患者的基因类药物。
邹珂珂张静臧超明新黄浩喜
关键词:SIRNAB2C2HBEAG
C2C模式下消费者网络交易评价法律问题研究
2025年
数字经济浪潮下,网络交易受到消费者青睐。由于互联网天然的虚拟性和不对称性,网络交易评价成为消费者购买决策的考量因素。目前学理层面和司法实践越发重视评价的重要价值,寻求数字经济时代下消费者新型权益的法律构建。通过文献研究法和比较分析法,发现目前消费者网络交易评价权缺位,不正当评价行为此起彼伏;司法实践中消费者网络评价往往侵及商家名誉,法官的司法自由裁量权行使偏差大;网络交易平台自身的评价机制失衡,确保消费者评价权益的基础欠缺;需要采用“设权 + 行为规制”的入法路径保障消费者网络评价权益,界定评价规则的行使边界,完善网络交易评价自身机制;优化评价规范及算法模型,落实网络交易平台监管责任,积极引入第三方评价机构。Under the wave of digital economy, online transactions are favored by consumers. Due to the natural virtuality and asymmetry of the Internet, the evaluation of online transactions has become a factor for consumers to consider in their purchase decisions. At present, more and more attention is paid to the important value of evaluation at the academic level and judicial practice, and the legal construction of new consumer rights and interests in the era of digital economy is sought. Through literature research and comparative analysis, it is found that there is a lack of evaluation rights for consumers’ online transactions, and improper evaluation behaviors occur one after another. In judicial practice, consumer online evaluation often infringes on the reputation of merchants, and the exercise of judicial discretion by judges is greatly deviated. The evaluation mechanism of the online trading platform itself is unbalanced, and the basis for ensuring the evaluation rights and interests of consumers is lacking. It is necessary to adopt the legal path of “establishment of rights + behavior regulation” to protect the rights and interests of c
施维维
关键词:C2C模式消费者
SR9009联合吲哚丙酸通过核因子κB信号通路减轻C2C12成肌细胞的炎症反应
2025年
背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成肌细胞时吲哚丙酸、SR9009与核因子κB信号通路的关系。方法:①1μg/mL脂多糖刺激C2C12成肌细胞,RNA转录组测序结合KEGG通路富集分析信号通路。②CCK-8法检测C2C12成肌细胞活性,筛选吲哚丙酸的最佳给药浓度;然后将细胞分为空白对照组、脂多糖(1μg/mL)组、SR9009(10μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸(80μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸+SR9009+脂多糖组,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素6水平,RT-qPCR检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。③siRNA敲减Rev-erbα,RT-qPCR评估敲减效率,检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果与结论:①与空白对照组比较,脂多糖时间依赖性抑制成肌细胞融合形成肌管,白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平升高,细胞上清液中白细胞介素6水平显著升高;KEGG通路分析支持脂多糖刺激激活核因子κB信号通路。②吲哚丙酸浓度>80μmol/L时抑制C2C12成肌细胞活性;吲哚丙酸和SR9009通过抑制核因子κB信号通路发挥抗炎作用,降低白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值低于脂多糖组。SR9009联合吲哚丙酸显著降低脂多糖诱导的炎症,Toll样受体4、CD14、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达水平进一步下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值显著低于吲哚丙酸+脂多糖组和SR9009+脂多糖组。③Rev-erbα随脂多糖刺激时间依赖性升高;siRNA敲减Rev-erbα效率达58%以上,成功敲减Rev-erbα后添加脂多糖,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αm
姬慧慧蒋旭张志敏邢运虹王亮亮李娜宋雨庭罗旭光崔慧林曹锡梅
关键词:脂多糖核因子ΚB信号通路
经膝关节前方正中入路内固定与股骨远端外侧切口术治疗股骨远端C2C3型骨折的临床效果
2025年
目的分析采用经膝关节前方正中入路内固定与股骨远端外侧切口术治疗股骨远端C2C3型骨折患者的临床效果。方法回顾性选取2023年1月至2024年3月期间在江汉大学附属医院(武汉市第六医院)进行手术的40例股骨远端C2C3型骨折患者作为研究对象,按不同手术将其分为对照组(n=17)、研究组(n=23)。对照组患者采用股骨远端外侧切口术,研究组患者采用经膝关节前方正中入路内固定手术。比较两组患者手术期间的各项指标(手时间、术后引流量、术中出血量、术中透视次数),手术前和手术后3、6个月的髋关节功能(Harris评分)、膝关节活动度、膝关节功能[美国特种外科医院(HSS)膝关节评分]、治疗效果和并发症发生情况。结果研究组手术时间为(131.79±15.67)min,长于对照组[(110.52±12.45)min],术后引流量、术中出血量、术中透视次数分别为(79.41±6.46)mL、(215.27±10.78)mL、(10.38±1.37)次,均低于对照组[(90.23±7.96)mL、(300.18±15.67)mL、(13.79±1.51)次],差异均有统计学意义(P<0.05)。手术后3、6个月,两组Harris评分均较手术前升高,且研究组的Harris评分分别为(50.24±4.89)、(73.45±7.11)分,均高于对照组[(42.33±4.24)、(60.13±6.27)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。手术后3、6个月,两组膝关节活动度均较手术前升高,且研究组的膝关节活动度分别为(101.77±9.37)°、(106.96±10.25)°,均高于对照组[(93.45±7.85)°、(96.41±8.23)°],差异均有统计学意义(P<0.05)。手术后3、6个月,两组HSS评分均较手术前升高,且研究组HSS评分分别为(81.24±3.96)、(85.37±4.58)分,均高于对照组[(73.45±3.49)、(76.85±3.64)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。触地时、支撑末期,研究组最大内驱角分别为(3.56±0.37)°、(6.33±0.67)°,均低于对照组[(4.89±0.51)°、(7.46±0.75)°],最大伸膝肌力矩分别为(23.31±5.63)、(18.74±1.96)Nm,均高于对照组[(18.46±4.25)、(15.25±1.78)Nm]
魏为林杰
关键词:股骨远端C型骨折

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