王瑞宁
- 作品数：28 被引量：11H指数：2
- 供职机构：河南牧业经济学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 一种猪疫苗活性检测提取器
- 本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种猪疫苗活性检测提取器，一种猪疫苗活性检测提取器包括外壳、控制件、控制装置、针管和触发装置，工作人员通过触发装置控制控制件在外壳内部作用移动，控制件两端设有磁力，套装控制件内部的针管一端...
- 赵丽李艳玲彭志峰宋幸辉张晓站王瑞宁
- 文献传递
- 奶牛产栏用卧床填料、床垫及其使用方法
- 本发明属于畜牧养殖技术领域，具体涉及一种奶牛产栏用卧床填料，以重量份计，由以下原料制成：艾粉18～22份、艾灰14～16份、生姜4.5～5.5份、草蒲黄4.5～5.5份、蒲公英4.5～5.5份、连翘4.5～5.5份、益母...
- 李利红李凯吴召运聂芙蓉李向辉侯春彬李慧娟王文佳宋幸辉王瑞宁
- 文献传递
- 猪伪狂犬病病毒gE蛋白的真核表达及其活性鉴定被引量：3
- 2023年
- 为制备猪伪狂犬病病毒(PRV)gE重组蛋白并评估其抗原活性,将优化的PRV gE基因胞外区插入真核表达载体pCMV并在其C端加入Hexa-His标签,构建真核表达质粒pCMV-gE;将重组质粒转染HEK293F细胞,Dot blot鉴定转染细胞中gE重组蛋白的分泌表达;利用镍亲和层析和凝胶过滤层析从转染细胞培养上清中纯化gE表达蛋白;以SDS-PAGE和Western blot鉴定gE重组蛋白,利用PRV阳性血清以ELISA分析gE重组蛋白的抗原活性,通过去糖基化酶PNGase F鉴定其糖基化修饰及其对抗原活性的影响。Dot blot结果显示,gE重组蛋白通过自身信号肽实现在细胞培养上清的分泌表达,其表达量在转染96 h达到峰值。SDS-PAGE和Western blot结果显示,从细胞培养上清中纯化获得gE重组蛋白纯度约为90%,经去糖基化酶PNGase F处理的gE重组蛋白分子质量显著降低。间接ELISA结果显示,gE重组蛋白检测PRV阳性血清的抗体效价为1∶12800;PRV阳性血清对gE蛋白的检出限为31.25 ng/mL,其抗原活性是原核表达的4倍。对临床血清的检测结果显示,基于gE重组蛋白的ELISA与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率为96.5%。综上,在真核细胞中分泌表达了具有高表达量、高纯度、高活性和糖基化修饰的gE重组蛋白,在PRV感染鉴别检测中具有良好的应用潜力。
- 王清龙王瑞宁王瑞宁李青梅李青梅张真真杨苏珍杨苏珍郭军庆
- 关键词：猪伪狂犬病病毒分泌表达抗原活性
- 一种生猪单只转运推车
- 本实用新型公开了一种生猪单只转运推车，包括笼框、门栅和搭板，笼框两端对称安装门栅，门栅下方的笼框底面向外延伸挡台，挡台端部通过销轴安装搭板，门栅包括转动组件、L型卡板和栅板，笼框上侧端部对称设置销轴，销轴上安装转动组件，...
- 王瑞宁彭志锋宋幸辉卢婷婷陈忠杰左利杰
- 猪伪狂犬病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2024年
- 为了开发检测猪伪狂犬病病毒(PRV)的免疫诊断试剂,使用HEK293F细胞表达的gE重组蛋白免疫BALB/c小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法筛选阳性杂交瘤细胞株,以期获得对PRV反应性良好的抗gE重组蛋白单克隆抗体。结果显示,获得2株(2B5和8F7)稳定分泌抗PRV gE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水单克隆抗体的ELISA效价均为1∶1 000000;单克隆抗体亚型鉴定结果表明,2株单克隆抗体的重链均为IgG1亚型,轻链均为Kappa链。单克隆抗体特异性测定结果显示,2株单克隆抗体仅与PRV反应,不与其他常见病毒发生反应;SDS-PAGE结果显示,纯化后的单克隆抗体均在约50 ku和25 ku处有纯度较高的特异性条带;间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,制备的2株单克隆抗体与转染gE质粒的293T细胞发生特异性反应。根据Western blot结果,筛选获得的2株单克隆抗体均在120 ku附近出现特异条带,表明这2株单克隆抗体均能特异性识别PRV。综上,成功制备了2株特异性强、效价高的抗gE蛋白单克隆抗体,为后期PRV诊断试剂盒的制备提供重要的生物材料。
- 王瑞宁王瑞宁李鸽李青梅李青梅李存法杨苏珍
- 关键词：猪伪狂犬病病毒单克隆抗体间接免疫荧光试验
- 猪繁殖障碍性疾病RNA病毒的EvaGreen实时荧光定量PCR引物及其检测方法
- 本发明涉及一种猪繁殖障碍性疾病RNA病毒的EvaGreen实时荧光定量PCR引物，包括以下引物对：PRRSV‑Sense：5‑TTTGTGGTGTATCGTGCCGT‑3；PRRSV‑Antisense：5‑GCACAG...
- 赵丽何金环王瑞宁李艳玲连瑞丽陈忠杰卢婷婷李存法刘永录
- 文献传递
- 猪瘟病毒荧光定量PCR的建立及对病毒体外复制动态的研究被引量：1
- 2019年
- 为了了解猪瘟病毒(CSFV)在PK-15细胞上的增殖规律。根据GenBank中CSFV Shimen毒株的NS5A基因保守区域序列,设计1对特异性引物,以CSFV总RNA为反转录模板,经优化反应条件,建立了基于实时荧光定量PCR技术的CSFV检测方法,并对其进行了敏感性、特异性、重复性试验,结果显示,该方法重复性好、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,并且CSFV的最低检测限为1 TCID_(50)/mL。利用所建立的方法研究CSFV在PK-15细胞上清中的增殖动态,并与TCID_(50)方法绘制的复制动态曲线进行比较。结果显示,两种方法测定的CSFV在PK-15细胞上的复制动态具有一定的平行关系,该方法为研究猪瘟病毒的致病机理及利用体外细胞培养毒生产疫苗提供了试验依据。
- 王瑞宁王瑞宁李存法李存法李青梅张雨杭王丽郭军庆郭军庆
- 关键词：猪瘟病毒荧光定量PCR增殖规律
- 嗜酸乳杆菌的研究进展
- 人类和微生物群之间的共生关系对人类健康发挥了重要的作用,如养分利用、抵抗感染、免疫系统的成熟和宿主的新陈代谢。人们对益生菌的研究兴趣日益浓厚,不但表现在食品和制药行业的研究,益生菌对免疫反应的调节和潜在疾病的预防研究也逐...
- 张春辉徐耀辉王瑞宁匡秀化张卫宪
- 文献传递
- 一种猪细小病毒疫苗研发自控温电磁培养箱
- 本发明公开了一种猪细小病毒疫苗研发自控温电磁培养箱，包括设备箱，所述设备箱的温控层内设有温度控制机构，温度控制机连接有总控制器，总控制器通过温度控制机构能够调节培养层内的温度；所述培养层内设有培养皿座和动力机构，所述培养...
- 吕慧芳董望左利杰彭志锋张刘涛赵丽卢婷婷宋幸辉陈忠杰王瑞宁
- 微生物破壁萃取系统
- 本发明公开了一种微生物破壁萃取系统，包括渗透冲击罐、渗透液罐、清洗罐、冷冻罐、制冷系统、热交换系统、含冰破碎机和泵送机构，渗透冲击罐包括渗透罐体，在所述渗透罐体内底部中心固定有锥形密封罩，锥形密封罩与罐体内壁围成环形腔，...
- 卢婷婷李翠赵丽王文佳吕慧芳李存法连瑞丽王瑞宁
- 文献传递
