高方
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 小鼠EVL基因的克隆和真核表达载体的构建
- 2012年
- 目的:构建小鼠EVL(Ena/VASP like)基因的真核表达载体,为深入研究EVL的功能奠定基础。方法:采用PCR方法,从小鼠cDNA文库中,扩增出1245bp的EVL编码区片段,经电泳、胶回收后连接入pMD-18T载体中,测序鉴定正确。用BamH I和HincII双酶切,定向克隆EVL编码区片段到真核表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切鉴定重组质粒正确后。将重组质粒转染入HELA细胞中,以RT-PCR检测EVL的mRNA的表达,以Western Blot检测EVL蛋白的表达。结果:酶切鉴定结果显示小鼠EVL编码区基因被成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1中;RT-PCR和Western Blot结果以及免疫荧光染色显示Hela细胞中有EVL的mRNA和蛋白的表达。结论:成功获得pcDNA3.1-EVL的真核表达载体,为进一步深入研究EVL蛋白的功能奠定了基础。
- 邹海韩骅高方曹秀丽徐骁
- 关键词：基因克隆真核表达
