叶欢
- 作品数：57 被引量：75H指数：4
- 供职机构：中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 解冻温度和冷冻保护剂对中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存效果的影响
- 2024年
- 中华鲟(Acipenser sinensis)是我国一级重点保护水生动物,其精原干细胞等种质资源冷冻保护技术尚不完善。本研究在前期建立的匙吻鲟(Polyodon spathula)精原干细胞冷冻保存液配方基础上,研究解冻温度、抗氧化剂和抗冻蛋白对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,以期建立高效的中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存方法。研究结果表明,实验设置的解冻温度(20、25、30和40℃)中25℃组冷冻保存效果最佳:解冻后细胞数目为(3.86±0.51)×10^(5),细胞存活率可达(96.36±0.53)%;比较不同浓度组(500、1000和1500 mg/L)的谷胱甘肽、抗坏血酸和α-生育酚等3种抗氧化剂对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,结果显示,冷冻保存液中添加1000 mg/Lα-生育酚的实验组,解冻后得到的细胞数目最多(7.64±0.34)×10^(5),显著高于其他抗氧化剂添加组,细胞存活率可达(92.82±0.72)%;通过比较不同浓度(0.1、1.0和10μg/mL)的两种类型抗冻蛋白(AFPI和AFPIII)对中华鲟精原干细胞的冷冻保存效果,发现添加了1.0μg/mL AFPI的实验组解冻效果最好,解冻后得到的细胞数目为(6.85±0.19)×10^(5),显著高于其他实验组,细胞存活率为(86.89±0.73)%。综上所述,中华鲟精原干细胞冷冻保存的最佳解冻温度为25℃,1000 mg/Lα-生育酚作为抗氧化剂,和1.0μg/mL AFPI作为抗冻蛋白对其冷冻保存效果最佳。
- 舒雪密叶欢仲嘉张鸣罗江刘源杜浩
- 关键词：中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存解冻温度抗冻蛋白
- 一种vasa基因及鉴定引物组和在鉴定草鱼和赤眼鳟生殖细胞中的应用
- 本发明公开了一种vasa基因及鉴定引物组和在鉴定草鱼和赤眼鳟生殖细胞中的应用，属于鱼类生殖细胞鉴定技术领域。本发明提供了草鱼和赤眼鳟vasa基因的cDNA全长序列，设计得到相应的探针引物，原位杂交结果表明vasa基因表达...
- 黄玲叶欢岳华梅李创举阮瑞
- 黄鳝csf1r基因的克隆及时空表达特征分析
- 2024年
- 【目的】克隆黄鳝csf1r基因,并对其时空表达特性进行分析,为探明csf1r基因在黄鳝不同体色形成中的作用奠定基础。【方法】采用RACEs(Rapid-amplification of cDNA ends)技术从黄鳝皮肤cDNAs中克隆得到csf1r基因的全长cDNA序列,对其编码蛋白进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测csf1r基因在黄鳝不同组织、不同发育时期胚胎或个体及3种体色黄鳝(黄黑斑鳝、碎花斑鳝和隐花斑鳝)皮肤和肾脏中的相对表达量,分析该基因的表达特征。测定3种体色黄鳝肝脏中的碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)。【结果】黄鳝csf1r cDNA序列全长为4430 bp(GenBank收录号:OP589303),其编码区长度为2937 bp,编码978个氨基酸,存在免疫球蛋白结构域和蛋白激酶催化结构域2个保守结构域。荧光定量PCR结果表明,csf1r基因在黄鳝脑、精巢、卵巢、肠、心脏、肾脏、肝脏、肌肉、皮肤和脾脏等组织中均有表达,在脾脏和心脏中表达量较高,其次是肾脏、皮肤和肌肉,卵巢中表达量最低;csf1r在胚胎眼晶体形成期开始大量表达,显微观察发现该时期胚胎的躯干上开始有色素颗粒出现。在3种体色黄鳝皮肤和肾脏中,csf1r基因在黄黑斑鳝的皮肤中表达量最低,而在其肾脏中表达量最高。3种体色黄鳝肝脏氧化应激指标测定结果发现,黄黑斑鳝肝脏中的碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力比其他2种体色黄鳝高,但是差异未达显著水平。【结论】csf1r基因可能不仅参与了黄鳝体色的形成,还与黄鳝非特异性免疫相关。
- 仲旭晴阮瑞李勇智岳华梅叶欢李忠李创举
- 关键词：黄鳝体色
- 一种区分受体黄颡鱼和三种供体鲿科鱼类生殖细胞的引物组和应用
- 本发明公开了一种区分受体黄颡鱼和三种供体鲿科鱼类生殖细胞的引物组和应用，属于鱼类生殖细胞鉴定技术领域，本发明特异性引物包括如下中的至少一种：SEQ ID NO.5和SEQ ID No.6所示受体黄颡鱼特异性引物序列；SE...
- 叶欢岳华梅黄玲李创举阮瑞
- 野生与养殖鳙的脂质类生物标志物及应用
- 本申请涉及鳙判定或确证技术领域，具体涉及野生与养殖鳙的脂质类生物标志物及应用。该生物标志物包括羟酸苯丙氨酸、25‑羟基胆固醇、链甾醇、蜕皮激素、胆固醇、鞘脂(d18:1/20:1)、甘油三油酸酯、1‑硬脂酰‑sn‑甘油、...
- 张辉张浪段辛斌叶欢周顺万朝阳姬雯雅李罗新
- 达氏鲟实时荧光定量PCR内参基因的筛选被引量：11
- 2020年
- 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是基因表达研究的常用方法,筛选达氏鲟(Acipenserdabryanus)稳定表达的内参基因,是保证该物种基因表达qRT-PCR分析结果准确性的基础。本研究选取了达氏鲟β肌动蛋白(β-actin)、延伸因子1α(EF-1α)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白L8 (RPL8)、18S核糖体RNA (18S rRNA)、琥珀酸脱氢酶复合物A亚基(SDHA)和α微管蛋白(α-tubulin)共7个常用内参基因作为候选基因,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder 4个软件分析这7个候选基因在达氏鲟成鱼不同组织和不同发育时期胚胎及性腺的表达稳定性。结果表明, 7个候选内参基因的定量PCR引物均可获得特异性扩增产物和理想的扩增效率。在成鱼不同组织中,候选内参基因稳定性由高到低的顺序为EF-1α>β-actin>SDHA>RPL8>18SrRNA>α-tubulin>GAPDH;在不同发育时期胚胎中,候选内参基因稳定性由高到低的顺序为EF-1α>β-actin>SDHA>α-tubulin>18S rRNA> GAPDH>RPL8;在不同发育时期精巢中,候选内参基因稳定性由高到低的顺序为EF-1α>RPL8>β-actin>SDHA>18SrRNA>α-tubulin>GAPDH;在不同发育时期卵巢中,候选内参基因稳定性由高到低的顺序为RPL8>EF-1α>SDHA>β-actin=α-tubulin>18S rRNA>GAPDH。因此,达氏鲟成鱼不同组织、不同发育时期胚胎和精巢最稳定表达内参基因是EF-1α,而不同发育卵巢最稳定表达的内参基因是RPL8。本研究旨在为今后达氏鲟不同组织、不同发育时期胚胎及性腺的基因表达差异研究提供理论基础。
- 武梦斌叶欢岳华梅阮瑞杜浩周从利向浩李创举
- 关键词：达氏鲟荧光定量PCR内参基因稳定性
- 埋植雌二醇对养殖中华鲟雌性幼鱼血清生理指标的影响被引量：3
- 2012年
- 用硅橡胶作载体,将剂量30 mg/kg的雌二醇(estradiol)埋植入人工养殖11龄、平均体重46.00 kg的雌性中华鲟(Acipenser sinensis)的背部肌肉内。埋植前及埋植后的第30、120、200天从尾部取血,测定血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯、总胆固醇、血糖和卵黄蛋白原的含量。结果显示,与对照组相比,除血糖含量无显著变化外,实验组鱼血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯、总胆固醇和卵黄蛋白原的含量显著升高。此结果为进一步探索外源物质促进中华鲟卵巢发育的可能途径奠定前期基础。
- 刘涛陈细华李创举叶欢李罗新沈丽刘永涛
- 关键词：雌二醇中华鲟血清生理指标
- 兴国红鲤AR基因的鉴定及MT暴露对幼鱼肝中AR和vtg表达的影响
- 2016年
- 实验克隆了兴国红鲤(Cyprinus carpio var singuonensis)雄激素受体(androgen receptor,AR)基因的全长c DNA序列和卵黄蛋白原(vitellogenin,vtg)基因的部分c DNA序列,并对雌性个体组织及甲基睾丸酮(Methyltestosterone,MT)暴露下幼鱼肝胰腺(以下简称:肝)中AR和vtg的表达进行检测。兴国红鲤AR基因c DNA全长3 229 bp,包括104 bp的5'非编码区(untranslation region,UTR)、编码846个氨基酸的2 541 bp开放阅读框(open reading frame,ORF)和485 bp 3'UTR。氨基酸序列同源性分析表明,兴国红鲤AR与其他鲤科鱼类AR的同源性较高。组织表达特征研究表明,AR在雌性个体的肝、卵巢、中肾、肌肉和端脑中有表达,其中肝中的表达量最高;vtg主要在肝、端脑和鳃中表达。兴国红鲤幼鱼在50μg/L的MT中暴露4周后,采用qRT-PCR检测了肝中AR和vtg的表达情况。在处理第1、2周,AR的表达受到一定的抑制,而在第3、4周其表达量升高,但其表达无显著性变化;而vtg的表达量在第3、4周均有极显著的升高。
- 李创举宋明月岳华梅阮瑞叶欢杨晓鸽
- 关键词：MT实时定量PCR卵黄蛋白原
- 中华鲟piwil1基因的克隆表达特征研究被引量：5
- 2016年
- Piwi是鱼类配子发生和性腺发育的重要调控因子。本研究从中华鲟(Acipenser sinensis)性腺中克隆得到了piwi基因的全长c DNA序列,该序列长3 393 bp,开放阅读框为2 583 bp,编码860个氨基酸。氨基酸序列多重对比发现,该序列具有PAZ和PIWI保守结构域,与其他鱼类piwil具有较高同源性;系统进化分析显示,中华鲟piwil聚于piwil1分支;因此,所得序列为piwi-like 1基因,命名为Aspiwil1。荧光定量PCR研究表明,Aspiwil1为母源表达,且其表达量随着胚胎发育逐渐降低;Aspiwil1在性腺中大量表达,在脑组织中也有较低水平的表达。性腺组织切片RNA原位杂交结果表明,Aspiwil1仅在生殖细胞表达,且其杂交信号随着卵子发生逐渐增强、精子发生逐渐减弱。本研究为中华鲟配子发生过程中Aspiwil1的功能研究提供了基础。
- 李创举杨晓鸽岳华梅叶欢危起伟
- 关键词：PIWI克隆原位杂交
- 一种dnd基因及鉴定引物组和在鉴定草鱼和赤眼鳟生殖细胞中的应用
- 本发明公开了一种<I>dnd</I>基因及鉴定引物组和在鉴定草鱼和赤眼鳟生殖细胞中的应用，属于鱼类生殖细胞鉴定技术领域。本发明提供了草鱼和赤眼鳟<I>dnd</I>基因完整的cDNA序列，经过比对cDNA序列获得特异性引...
- 黄玲叶欢岳华梅李创举阮瑞
