孙永科
- 作品数：60 被引量：219H指数：9
- 供职机构：云南农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金高层次科技人才培引工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 一步法RT-PCR同时检测CSFV和PRRSV方法的建立及应用被引量：1
- 2011年
- 猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害云南养猪业的传染病,为了建立一种能快速诊断猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的方法,根据NCBI上已发表的猪瘟病毒(CSFV)保守基因Erns和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因M基因的核苷酸序列,利用Oligo 6.0设计了2对特异性引物,经过PCR反应条件优化后,建立了CSFV和PRRSV一步法RT-PCR的检测方法。对云南部分地区猪高热病病料检测的结果表明,本方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,为云南猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的快速检测提供了重要的技术支持。
- 李圣郑欢莉李红炳孔令富张晓敏钏有科孙永科杨玉艾
- 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法RT-PCR
- 非典型性型猪瘟病毒云南株的分离鉴定及其E0/E2基因序列分析被引量：4
- 2009年
- 从云南10个地州13个大型猪场采集到的17份样品中分离得到5株猪瘟病毒。经测序鉴定昆明、玉溪、曲靖地区分离株的核苷酸序列99.99%同源,大理和宝山地区的核苷酸序列99.99%同源,5株分离毒均属于基因二群。5株分离毒在PK-15细胞上的平均毒价约为2×106TCID50/mL,应用荧光抗体染色可以检测到CSFV。通过RT-PCR扩增猪瘟病毒约1 200bp和700bp的E2和E0蛋白全部抗原编码区序列,并将其分别克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,5株分离株的E0和E2基因片段为697bp和1 173bp,与猪瘟病毒Shimen株的核苷酸同源性仅为95.4%和96.6%、82.5%和84.3%,与C-株的核苷酸同源性分别为94.1%和95.2%、83.3%和85.4%。动物试验结果表明,分离的2株猪瘟野毒不能引起典型的猪瘟症状,但是能持续带毒。
- 孙永科杨玉艾孔令富毕保良冷春永冷思明
- 关键词：猪瘟病毒
- 新发人畜共患传染病的防控策略
- 2011年
- 当今传染病总的形势是：经典的微生物引起的传染病尚未得到很好的控制，一些过去已经基本控制的病原性微生物却重新抬头，同时新的病原性微生物不断被发现，新的传染病以年均1种的速度不断发生。
- 杨玉艾江波孙永科
- 关键词：人畜共患传染病防控策略微生物病原性
- 非典型性猪瘟病毒云南株/石门株嵌合病毒的构建和拯救被引量：2
- 2012年
- 为研究猪瘟病毒(CSFV)云南株(YN株)突变位点在致非典型性猪瘟中的作用,本研究在CSFV石门株全长感染性克隆的基础上,利用分子克隆技术,将CSFV YN株的1 510位～1 532位、2 471位～2 658位、3 152位～3 176位和11 785位～11 816位突变位点基因序列替换CSFV石门株的相应基因序列,构建出嵌合的CSFV感染性克隆质粒pAC-SM-YN。全基因测序鉴定后,体外转录得到病毒RNA,经脂质体转染PK-15细胞方法拯救出了嵌合病毒vSM-YN。经直接荧光染色、对突变位点RT-PCR以及ELISA检测表明拯救嵌合病毒vSM-YN传代稳定。本研究为研究CSFV结构蛋白、病毒致病机理、新型疫苗,尤其是非典型猪瘟的致病机理奠定了基础。
- 孙永科孔令富张晓敏郑欢莉林明星陈海婷杨玉艾
- 关键词：猪瘟感染性克隆嵌合病毒
- 表达传染性支气管炎病毒S1基因重组禽痘病毒的构建
- 将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681-IBVS1。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与...
- 田占成孙永科王云峰智海东刘胜旺王玫童光志
- 关键词：传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒
- 文献传递
- 云南一株猪瘟流行毒株的分离鉴定
- 2010年
- 猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的猪的一种高度接触性传染病，其流行广、传染性强、致死率高，所以国际兽疫局将之列为A类传染病。我国从20世纪50年代起广泛应用猪瘟兔化弱毒疫苗预防注射，基本上控制了猪瘟的流行。近年来，猪瘟的流行特点发生了很大的变化，多以非典型性、慢性及隐性形式出现，
- 杨玉艾杨亮宇初晓辉毕保良吴翱邱春富孙永科
- 关键词：猪瘟病毒流行毒株猪瘟兔化弱毒疫苗接触性传染病VIRUS
- 普洱茶对原代小鼠肝细胞的毒性初探被引量：1
- 2010年
- 以小鼠原代肝细胞为模型,研究不同浓度普洱茶对小鼠原代肝细胞增殖率的影响、细胞凋亡及其细胞超微结构的变化,综合评价普洱茶对肝细胞的毒性作用,建立普洱茶细胞水平的安全性评价方法。实验结果表明:受试物普洱熟茶与普洱生茶IC50分别为6830、6459μg/mL,表明其对肝细胞毒性极小或无;细胞凋亡和电镜超微结构观察后显示,当茶样浓度在1/16IC50～IC50浓度范围时,未见诱导小鼠肝细胞发生凋亡;茶样浓度达到IC50时,也未见对小鼠肝细胞内部结构发生有意义的病理损伤。因此,普洱生茶和熟茶对小鼠肝细胞的毒性极小或无,细胞毒理学研究表明饮用普洱茶是安全的。
- 李红霞孙永科李艳艳徐昆龙
- 关键词：普洱茶细胞毒性
- 浅谈当前基层动物产地检疫工作存在的问题与对策被引量：8
- 2017年
- 产地检疫工作是动物检疫工作的源头和基本保障,关系到一个地区畜牧业健康发展、人民群众身体健康的一项基础工作,是保证畜禽及畜产品能够进入正常贸易流通市场的重要环节,也是整个检疫工作的重中之重,又是一项复杂的社会系统工程。本文笔者对当前基层动物检疫工作中存在的问题进行了分析,并针对这些问题提出了一些措施,对提高基层动物检疫工作、确保畜产品质量安全和公共卫生安全有着重大的意义。
- 农布恩主朱云佳孙永科
- 关键词：动物产地检疫
- 表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的免疫效力研究
- 传染性支气管炎(IB)是鸡的主要呼吸道疾病之一,给养鸡业造成了巨大的损失。弱毒活疫苗和灭活油佐剂疫苗的应用对该病的控制发挥了十分重要的作用,但随着养鸡规模的日益扩大,病毒变异株和引起不同病变类型和组织嗜性的毒株不断出现,...
- 王云峰孙永科田占成智海东刘胜旺王玫童光志
- 文献传递
- 表达传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的构建被引量：5
- 2006年
- 将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IBVS1蛋白的重组鸡痘病毒rFPV-IBVS1。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选且进一步纯化14代。S1基因的PCR检测表明,获得的含传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒能够稳定遗传,间接免疫荧光和Westernblot等试验证实该重组病毒在CEF内真实地表达了分子量约为90Ku的具有免疫学活性的IBVS1糖蛋白。
- 田占成孙永科王云峰智海东刘胜旺王玫童光志
- 关键词：传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒S1基因
