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黄建芳: 作品数：42 被引量：116H指数：7; 供职机构：暨南大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省教育部产学研结合项目更多>>; 相关领域：医药卫生环境科学与工程轻工技术与工程生物学更多>>

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一种检测N端脑钠肽前体的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用: 本发明公开了一种检测N端脑钠肽前体的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。所述杂交瘤细胞株3A2和4G8保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号分别为CCTCC NO：C201633和CCTCC NO：C201634，及其分泌...; 向军俭黄建芳刘诗琴

凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应被引量：5: 2012年; 目的:质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质。方法:运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白;氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81%～100%;Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带。结论:凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应。; 王彩霞黄建芳向军俭孙一帆吕思郭洁; 关键词：质谱分析甲壳类

凡纳滨对虾新过敏原烯醇化酶的鉴定被引量：2: 2016年; 目的:鉴定凡纳滨对虾分子量为47 kD过敏原的性质。方法:采用丙酮沉淀法提取凡纳滨对虾总蛋白,通过SDS-PAGE、11例虾过敏患者血清IgE的Western blot分析凡纳滨对虾中过敏原组份,运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(Matrix-Assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定凡纳滨对虾47 kD未知过敏原组分。结果:通过SDS-PAGE电泳证明所提取的凡纳滨对虾总蛋白组分完全。Western blot结果显示,凡纳滨对虾至少有14种与阳性血清反应的组分,其中,55%的虾过敏患者Ig E与分子量为47 kD的蛋白分子发生特异性反应,质谱分析结果显示47 kD蛋白为烯醇化酶。结论:烯醇化酶是凡纳滨对虾的一种新的过敏原。; 谈思怡黄建芳孙一帆郭成斌向军俭; 关键词：凡纳滨对虾烯醇化酶质谱 WESTERN BLOT

河虾主要过敏组分的分离、纯化、鉴定及其致敏性分析被引量：10: 2010年; 目的:鉴定河虾中的过敏原组分,对主要过敏原组分进行纯化并分析其致敏性强弱。方法:用磷酸盐缓冲液(PBS)制备河虾蛋白粗提液,将其与11例虾过敏症患者血清IgE进行Westernblot,鉴定各种分子量的河虾过敏原组分;河虾蛋白粗提液用硫酸铵沉淀、G-50凝胶层析和阴离子交换层析等方法纯化其主要过敏原组分,再用虾过敏患者血清IgE进行Westernblot鉴定;并将纯化的相对分子质量(Mr)为21000、36000、800003种主要过敏原组分与虾过敏症患者血清IgE做间接ELISA,以分析其致敏性强弱。结果:West-ernblot结果显示,河虾蛋白粗提液出现9个阳性条带;其中3种主要过敏原组分21000、36000、80000与患者血清的反应率为36.4%,63.6%,45.5%;将这3种Mr的蛋白组分分别做间接ELISA,结果显示21000、36000、80000过敏原组分与11例虾过敏症患者的混合血清IgE结合的吸光值都显著高于河虾蛋白粗提液。结论:河虾中至少存在9个过敏原组分;21000、36000、8000等3种蛋白组分为河虾的主要过敏原组分,其中以36000过敏原组分致敏率和致敏性最强。进一步研究将探明21000、36000、80000等3种河虾过敏原组分的共同抗原表位,以期为明确食物过敏原检测、临床诊断和虾过敏原疫苗设计提供基础。; 黄建芳林婷婷向军俭杨红宇; 关键词：河虾食物过敏

抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用被引量：3: 2015年; 目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白（MYO）单克隆抗体（m Ab）,建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定最佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较。结果共筛选出9株能稳定分泌m Ab的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到（1.0-2.6）×10^6（A450约为1.0时的抗体稀释倍数）。抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体（2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7）,其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用最佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为（25-1000）ng/m L,优于进口试剂盒的线性范围（25-500）ng/m L;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95%（19/20）,阴性检出率为100%（40/40）。结论获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO m Ab,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础。; 杨全利刘诗琴谈思怡邵晨晨黄建芳向军俭; 关键词：细胞融合单克隆抗体 ELISA双抗体夹心法

虾、蟹交叉过敏原的研究被引量：6: 2012年; 目的分析不同虾蟹过敏原组分间的交叉反应,探讨交叉过敏原在虾、蟹等甲壳类过敏食物检测、诊断和疫苗设计中的意义。方法运用20例虾过敏患者血清和制备的凡纳滨对虾主要过敏原-原肌球蛋白的8株单克隆抗体(mAbs),通过Western blot和间接竞争ELISA分析凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹的交叉过敏反应及它们的主要交叉过敏原。结果 Westernblot的结果显示,凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹分别能与85%、85%和75%的虾过敏患者血清IgE特异性反应;间接竞争ELISA的结果显示,3种虾蟹粗提液均可显著抑制虾过敏患者血清IgE与凡纳滨对虾蛋白的结合,最大抑制率分别93%、84%、60%;8株凡纳滨对虾原肌球蛋白的mAbs与日本沼虾和梭子蟹的Western blot和间接竞争ELISA反应中,6株mAbs可与日本沼虾和梭子蟹的相对分子质量为36 000蛋白反应。结论凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹之间存在交叉过敏反应,且具有多个交叉过敏原,其中原肌球蛋白是主要的交叉过敏原。; 王彩霞黄建芳向军俭孙一帆; 关键词：食物过敏甲壳类原肌球蛋白

凡纳滨对虾主要过敏原-原肌球蛋白单克隆抗体的制备及其过敏原表位分析被引量：8: 2012年; 目的制备凡纳滨对虾主要过敏原-原肌球蛋白的单克隆抗体(mAb),运用它们和虾过敏患者血清分析凡纳滨对虾原肌球蛋白的过敏原表位。方法纯化的凡纳滨对虾原肌球蛋白免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和Western blot筛选并建立稳定分泌抗原肌球蛋白抗体的杂交瘤细胞株;腹水型mAbs经硫酸铵沉淀、Protein G亲和层析纯化;叠加ELISA分析mAbs的抗原结合表位;虾过敏患者血清lgE与mAbs的抑制Western blot和间接竞争ELISA分析原肌球蛋白的过敏原表位。结果共筛选出5株mAbs,它们之间叠加ELISA的叠加值均高于40%;其中B5和A5能显著抑制虾过敏患者血清IgE与原肌球蛋白的结合,抑制率分别为58.1%和48.6%,同时也能抑制66.7%和44.3%的血清IgE与虾蛋白粗提液反应。结论成功制备了5株分别结合原肌球蛋白不同抗原表位的单克隆抗体,其中B5和A5能结合其过敏原表位。; 黄建芳王彩霞向军俭吕思黄晟; 关键词：凡纳滨对虾原肌球蛋白单克隆抗体

玉米赤霉烯酮抗独特型单抗的制备及特异性分析被引量：2: 2013年; 目的制备并鉴定玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)抗独特型单抗Ab2β-1D5。方法将ZEN单抗1G4与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合后,以ZEN单抗Fab片段作为包被抗原,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞。经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,制备腹水型单抗,并经Protein G亲和层析柱进行纯化。间接ELISA法检测ZEN抗独特型单抗的抗体效价及特异性;间接竞争ELISA法检测ZEN抗独特型单抗类型、灵敏度及其与ZEN毒素间的相关性。结果共获得6株稳定分泌ZEN抗独特型单抗的杂交瘤细胞株,腹水型抗体效价为1∶1.2×105～1∶2.0×105;6株单抗均为β型抗独特型抗体(Ab2β),其中Ab2β-1D5抗体灵敏度最高,对ZEN的IC50值达10.09 ng/ml,其与ZEN毒素呈线性相关(r=0.990);ZEN抗独特型单抗与莱克多巴胺、重金属铅、铬及虾过敏原单抗均无交叉反应,特异性良好。结论已成功制备玉米赤霉烯酮抗独特型单抗,该抗体与ZEN间存在"内影像"关系,可以替代ZEN毒素标准品,用于建立ZEN的无毒免疫学检测技术。; 贾彦琼黄建芳向军俭邓宁唐勇骆敏儿王宏; 关键词：单克隆抗体抗独特型抗体

人氮端脑钠肽前体(NT-ProBNP)单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立: 目的：获得人氮氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)高亲和力和高特异性的抗体，为建立NT-proBNP的免疫学检测方法奠定基础。方法：为制备针对NT-ProBNP特异表位的高特异性、高亲和力的抗体，运用Discover...; 刘诗琴邵晨晨谈思怡黄建芳郝代玲冯沛然向军俭; 关键词：单克隆抗体

虾过敏C57/BL6小鼠动物模型的建立被引量：4: 2012年; 目的:建立C57/BL6小鼠虾过敏动物模型及其腹腔肥大细胞过敏模型。方法:运用虾蛋白粗提液免疫致敏C57/BL6小鼠,采用Western Blot鉴定致敏小鼠血清中特异性lgE和lgG1抗体;收集小鼠腹腔致敏肥大细胞(PMC),运用虾不同的过敏原组分诱导PMC体外定向释放组胺,HPLC和荧光酶标仪法检测组胺释放水平。结果:Western Blot结果显示致敏小鼠血清IgE和IgG1与相对分子量为36ku的原肌球蛋白反应率分别为57.1%和74.1%,与80ku过敏原的反应率均为42.9%,与21ku过敏原的反应率分别为42.9%和28.6%。HPLC和荧光酶标仪法检测PMC定向释放组胺的结果无显著差异,36ku的原肌球蛋白定向诱导组胺的释放率最高,分别为18.52%和21.59%,80ku和21ku蛋白次之,表明36ku的原肌球蛋白是C57/BL6小鼠的主要虾过敏原,21ku和80ku蛋白是次要过敏原,这与人类虾过敏的状况相一致。结论:C57/BL6小鼠是一种有效的虾过敏动物模型,其腹腔肥大细胞是一种可行的检测和评价食物过敏原的细胞模型。; 黄建芳王彩霞向军俭郭洁吕思; 关键词：食物过敏原动物模型细胞模型组胺

黄建芳

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