黄用豪
- 作品数：48 被引量：47H指数：4
- 供职机构：海南医学院更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 小鼠VCAM-1真核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2007年
- 目的:构建小鼠血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真核表达质粒,了解该质粒是否能在真核细胞中有效表达。方法:以小鼠胚肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染CHO细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质。结果:成功扩增了小鼠VCAM-1全长基因cDNA,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,West-ern Blot方法证实该质粒能在CHO真核细胞中正确表达目的蛋白。结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的真核表达质粒载体,为进一步研究VCAM-1的新功能和免疫治疗奠定了基础。
- 谭光宏宿静梅黄风迎王华黄用豪林映莹
- 关键词：血管细胞粘附分子-1真核表达质粒基因工程
- FITC标记葡聚糖粘附定量测定肿瘤组织血管密度被引量：3
- 2007年
- 目的:测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标。方法:用endolgin疫苗免疫小鼠后,在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型,2周后将FITC-dextran注射入小鼠体内,然后手术完整摘取肿瘤组织和藻酸盐颗粒,取部分肿瘤组织进行免疫组化检测血管密度的同时,将其他组织和藻酸盐颗粒匀桨并离心,取上清检测荧光强度,分析二者之间是否存在直线相关关系。结果:免疫组化和肉眼观察显示2种测定方法均有明显的血管生成效应,用FITC-dextran粘附测定肿瘤组织血管相对密度和藻酸盐包被试验均能较好地量化测定抗血管生成效果,直线相关分析表示二者的疫苗免疫实验组FITC-dextran的测定值之间呈明显的正性相关关系(r=0.962,P<0.01)。结论:和藻酸盐包被试验相比,FITC-dextran测定肿瘤组织血管相对密度是一种简单有效的量化测定肿瘤组织血管生成水平的方法。
- 谭光宏黄风迎王华黄用豪林映莹黎岳南
- 关键词：肿瘤血管动物模型
- 具有体内DC特性的多功能Fc融合蛋白靶向抗肝癌作用研究
- 张晓钿郑少江黄凌黄用豪田树红李红海陈艳刘思汝
- 该研究将具有肿瘤靶向(FGFR1)、抗肿瘤血管生成(FGFR1)、清除免疫抑制作用(PD1)、促进免疫效应(MIP3a)以及增强抗原提呈作用(鼠源抗体Fc段)综合在一起构建核苷酸序列，从而编码得到一种具有特异性抗肿瘤作用...
- 关键词：
- 关键词：肝癌免疫治疗肿瘤治疗
- 一株银杏内生真菌菌株的抑菌活性成分研究被引量：8
- 2010年
- 从银杏叶柄分离筛选到具抗菌活性的内生真菌Colletotrichum.SP NTB-2菌株,利用硅胶柱色谱、制备高效液相色谱等方法在其发酵产物中分离到抗枯草芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌等具有广谱抑菌活性的化合物,经MS、NMR等波谱数据确认该活性成分为芹菜素-8-C-葡萄糖苷(apigenin-8-C-β-D-glucopyranoside),该化合物首次从真菌中分离得到。
- 周松林陈双林谭光宏王华黄用豪陈凡
- 关键词：内生真菌银杏
- 一种可以诱导肿瘤免疫反应的海藻酸盐微颗粒的制备方法
- 本发明提供一种可以诱导肿瘤免疫反应的海藻酸盐微颗粒的制备方法，利用基因工程技术，构建MIP-3α真核表达质粒并转化肿瘤细胞，通过筛选获得稳定表达MIP-3α的肿瘤细胞。同时培养大肠杆菌并溶于海藻酸盐溶液中，经高温高压消毒...
- 谭光宏黄风迎黎岳南郭峻丽黄用豪王华
- 文献传递
- 伯氏疟原虫抗原基因高效植物表达载体的构建
- 2010年
- 目的构建果实特异启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei merozoitesurface protein4/5)基因的植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础。方法分别以提取的番茄和伯氏疟原虫Anka株的基因组DNA为模板,扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),并通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOE)PCR将二者拼接,拼接后的序列为EM,并合成霍乱毒素B亚基基因CTB,共同构建重组质粒pCAMBIA1302-EM-CTB,电击法转化根癌农杆菌GV3103。结果重组质粒经酶切鉴定证明已成功转化。结论实验成功构建了以番茄果实特异启动子驱动PbMSP4/5基因、以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体。
- 王华谭光宏黄风迎黄用豪周松林赵焕阁林映莹
- 关键词：疟疾CTB
- 小鼠CTLA4-Fc融合基因真核表达载体的构建及表达
- 2020年
- 目的构建小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Fc融合基因(CTLA4-Fc)的真核表达质粒,并检测其在293T细胞中的表达,为后续在小鼠体内研究CTLA4-Fc抗肿瘤作用机制奠定基础。方法Gene Runner软件设计并合成互为搭桥、互为模板的CTLA4融合基因引物,利用重叠PCR方法扩增获得CTLA4基因片段,与pcDNA3.1(+)/Fc(Mouse IgG2a)质粒同时进行双酶切,连接合成CTLA4-Fc融合基因表达质粒;菌落PCR扩增、双酶切以及测序鉴定后,在293T细胞中瞬时转染表达融合基因的质粒,ELISA法检测其在293T细胞内的蛋白表达含量。结果成功构建CTLA4-Fc融合基因。经菌落PCR和双酶切,琼脂糖电泳检测到CTLA4-Fc片段长度为1200 bp,CTLA4片段长度为568 bp DNA。将阳性重组克隆菌落挑于液体LB培养基中扩大培养并将菌液送公司测序,测序结果证实DNA序列与GenBank同源性为100%。通过ELISA方法能够检测到CTLA4-Fc质粒在293T细胞中的表达。结论CTLA4-Fc融合基因正确克隆入pcDNA3.1(+)/Fc(Mouse IgG2a)质粒中,该质粒能够在293T细胞中表达。本研究利用重叠PCR技术扩增获得CTLA4基因序列,能够快速获得目的基因扩增产物,提高了实验的成功率。
- 何志惠刘思汝谢盼盼黄用豪林岷格
- 关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4FC融合蛋白真核表达质粒
- 弓形虫ROP18基因原核表达载体的构建及表达被引量：10
- 2013年
- 目的采用PCR方法从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增弓形虫ROP18基因,构建原核表达载体pET-ROP18,并检测融合蛋白ROP18的免疫反应原性。方法采用PCR技术扩增弓形虫ROP18基因,将其插入原核表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒pET-ROP18,PCR和双酶切鉴定正确的重组质粒pET-ROP18转入大肠埃希菌BL21中,在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达融合蛋白,诱导产物裂解后进行SDS-PAGE电泳,观察重组蛋白的诱导表达情况,Western blot分析重组蛋白的反应原性。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出约1.6kb的ROP18基因片段。将其定向插入原核表达载体pET-28a,构建原核表达质粒pET-ROP18,经PCR和双酶切鉴定后测序,显示重组质粒包含ROP18蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP18抗原蛋白。重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达分子质量单位约63ku的融合蛋白,以37℃1mmol/L IPTG诱导4h表达量最大。Western blot分析重组蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别。结论成功构建了原核表达载pET-ROP18,重组蛋白ROP18具有免疫反应原性。
- 赵焕阁韦祎黄用豪梁丽娟林映莹谭光宏
- 关键词：弓形虫原核表达
- 血管内皮生长因子和组织因子融合蛋白靶向诱导肿瘤新生血管栓塞的实验研究
- 谭光宏黄风迎王华黄用豪夏立平
- 该研究利用肿瘤新生血管特异表达血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体(可以特异性地和VEGF结合)这一特性，用基因工程技术将VEGF和血液凝固级联反应关键启动因子-组织因子(TF)的基因通过软接头连接成一个融合基因，在埃希...
- 关键词：
- 关键词：细胞生长因子融合蛋白肿瘤治疗
- 打破免疫耐受生物治疗肿瘤和哮喘研究
- 谭光宏黄风迎蒋洁王华黄用豪赵焕阁周松林林映莹郑少江
- 该项目属于免疫生物治疗领域。免疫系统对肿瘤细胞抗原分子和哮喘炎症分子呈免疫耐受状态。打破免疫系统对这些治疗靶分子的免疫耐受就可治疗肿瘤和哮喘。主要内容和结果：利用Ag43细菌表面展示技术制备Ag43嵌合重组蛋白疫苗打破治...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤治疗哮喘免疫生物治疗
