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利用HiTAIL-PCR技术鉴定T-DNA在RNAi-OsRhoGAP2水稻中的插入位点: 2018年; 水稻OsRhoGAP2基因是前期从幼穗cDNA文库中筛选获得的功能未知基因,采用DNA重组技术构建OsRhoGAP2基因RNA干扰载体,并转化水稻。对转基因水稻的表型分析显示,OsRhoGAP2基因RNA干扰水稻株高显著高于对照水稻。采用高效热不对称交错PCR法(Hi TAIL-PCR)对RNAi-OsRhoGAP2转基因水稻T-DNA插入位点的侧翼序列进行分析,利用特异性嵌套引物扩增,结合序列对比分析,发现在4个不同的转基因水稻株系中,TDNA均插入到水稻OsRhoGAP2基因的第5个外显子内,本研究将为后续对该基因的功能鉴定提供重要依据。; 葛慧雯李佳佳王高华闫鑫甜安文静杜京尧石佳彭静静王美娜梁卫红; 关键词：侧翼序列 T-DNA 转基因水稻插入位点

硝普钠及其光解产物对日本晴水稻幼苗生长和5种激素标记基因表达的影响被引量：4: 2017年; 以粳稻品种日本晴水稻为材料,检测硝普钠及其光解产物KNO_2、K_4Fe(CN)_6对幼苗生长的影响,并采用qRT-PCR技术检测了5种植物激素标记基因在经上述处理后在幼苗根中的表达水平.结果表明SNP能够显著抑制水稻幼苗的根长和株高;SNP对根生长的抑制主要是通过其光解产物K4Fe(CN)6实现的.SNP和K_4Fe(CN)_6处理都能够抑制生长素、细胞分裂素、脱落酸和赤霉素4种激素标志基因在水稻根中的表达,但是SNP处理可以抑制一氧化氮标志基因OsNOA1的表达,而K_4Fe(CN)_6则上调该基因的表达.; 梁卫红王高华杜京尧葛慧雯石佳彭静静王美娜; 关键词：硝普钠幼苗植物激素基因表达

CRISPR/Cas9介导的水稻OsRhoGAP2基因的敲除被引量：2: 2020年; OsRhoGAP2是通过酵母双杂交从水稻幼穗组织分离的一种Rho GTP酶激活蛋白质编码基因,其功能尚不明确。为鉴定该基因的功能,本研究采用CRISPR/Cas9技术构建了OsRhoGAP2基因单靶标敲除载体,并转化日本晴水稻。对转基因水稻的筛选以及编辑靶点扩增和测序结果表明,在T0代获得3种杂合突变体,在T1代获得2种纯合突变体,命名为株系1和株系16。2个纯合敲除株系在OsRhoGAP2编辑靶点分别缺失2个和1个碱基,均导致该基因的移码突变并最终造成无义突变。序列分析显示,突变体中预期生成的OsRhoGAP2截短蛋白质丧失了保守的RhoGAP结构域及CRIB基序。抽穗期水稻的叶片扫描电镜观察结果显示,株系1的叶片表皮毛大量缺失;对抽穗期水稻的剑叶进行光合指标测量,发现突变体与野生型在净光合速率与气孔导度上存在显著差异。其中,株系1和株系16的净光合速率分别上升17.79%和7.70%,气孔导度分别上升113.10%和64.50%,提示OsRhoGAP2基因的功能可能涉及这些生物学过程。; 安文静王凯婕刘亚菲刘迪冯连杰王高华黄俊骏刘肖飞王俊杰梁卫红; 关键词：水稻叶片

水稻OsRhoGAP2基因功能的初步鉴定: 水稻OsRhoGAP2是通过酵母双杂交筛选到的与水稻ROP蛋白OsRacD相互作用蛋白的编码基因.本实验室前期研究显示,OsRhoGAP2的在幼穗组织中优势表达;在酵母双杂交系统中,只与激活型OsRacD(G15V-Os...; 葛慧雯李佳佳闫鑫甜王高华安文静杜京尧石佳彭静静王美娜梁卫红; 关键词：水稻亚细胞定位过表达

OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定及外源基因拷贝数的初步分析被引量：1: 2019年; 水稻RhoGDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因.为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化.对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T2代进行筛选和鉴定,采用PCR技术鉴定转基因植株,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测OsRhoGDI2在转基因水稻中的表达水平,结果显示,其中6个株系为过表达转基因植株,OsRhoGDI2表达水平上调1.69~13.35倍.为检测外源基因在转基因水稻中的拷贝数,分别以蔗糖磷酸合成酶基因SPS和潮霉素抗性基因HYG为内参基因和标记基因,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术结合内参基因和标记基因的标准曲线进行分析,结果显示在所检测的6个转基因株系中,外源基因的拷贝数均为1,提示已经获得稳定遗传的OsRhoGDI2过表达转基因水稻,为后续OsRhoGDI2基因的功能研究奠定基础.; 杜京尧尚飞王高华梁卫红; 关键词：转基因水稻拷贝数外源基因

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王高华