吴亚丽
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省高等学校创新人才培养工程国家农业科技成果转化资金项目河南省科技成果转化计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 真核表达质粒pIRES-ST3GAL Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的初步表达被引量：1
- 2015年
- 构建β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶I(ST3GALI)基因的真核表达载体p IRES-ST3GALI,并诱导使其在大肠杆菌中高效表达。以p GEM-ST3GALI质粒为模板,采用PCR技术特异性扩增ST3GAL I基因,通过酶切和连接,构建真核表达载体p IRESST3GALI。经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转化筛选阳性重组大肠杆菌(DH5α),用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,并用12%SDS-PAGE鉴定。结果表明,重组质粒p IRES-ST3GAL I中的ST3GAL I序列与原鸡的ST3GAL I氨基酸序列同源性98.8%,与猪的同源性达53.5%,与人的同源性达52.6%。β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶I在大肠杆菌中实现了良好的表达。本试验已成功构建了含有β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶I(ST3GAL I)的真核表达载体p IRES-ST3GAL I,为其转染传代细胞建立重组传代细胞系奠定了基础。
- 吴亚丽徐倩武志丹潘梦梦张剑李新生
- 关键词：基因克隆原核表达
- H3N2亚型SIV核蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2015年
- 【目的】克隆和表达H3N2型猪流感病毒(SIV)A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的核蛋白(NP)基因,为制备NP抗体和SIV基因工程疫苗奠定基础。【方法】提取SIV A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的RNA,用RT-PCR扩增NP基因,将其定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体,构建重组表达载体,并将其转化入大肠杆菌Rosetta中表达,用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物,同时考察IPTG不同浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和不同诱导时间(2,4,6,8h)对重组NP蛋白表达量的影响。【结果】克隆到1 512bp的NP基因,与预期的核蛋白基因大小一致,共编码498个氨基酸;构建的重组表达载体在大肠杆菌Rosetta中表达出了分子质量约60ku的重组核蛋白,其主要以包涵体的形式存在。IPTG不同诱导浓度和不同诱导时间对重组NP蛋白表达量的影响均较小。【结论】克隆和表达了H3N2亚型猪流感病毒的核蛋白基因。
- 朱春平李燕吴亚丽常婧竹刘琳高文明李新生
- 关键词：猪流感病毒核蛋白H3N2亚型大肠杆菌
- 适应H_9亚型禽流感病毒增殖的重组R-MDCK细胞系的建立被引量：1
- 2016年
- 克隆鸡ST3GalⅠ基因并将其插入真核表达质粒p IRES中,构建重组质粒p IRES-ST3GalⅠ,鉴定正确的真核表达载体转染MDCK细胞,用G418抗性筛选稳定表达的重组细胞R-MDCK。PCR及RT-PCR鉴定表达阳性的单克隆细胞株。将不同H_9亚型禽流感病毒毒株按相同滴度接种R-MDCK细胞和空白MDCK细胞,通过HA试验和TCID_(50)试验,检测不同H_9亚型禽流感病毒毒株在R-MDCK细胞上的增殖效果。结果发现,所有H_9亚型禽流感病毒毒株在RMDCK细胞HA和TCID_(50)结果均显著高于空白MDCK细胞。ST3GalⅠ基因在第12代R-MDCK细胞中仍能稳定表达,R-MDCK细胞可显著提升H_9亚型低致病性禽流感病毒培养的滴度,可以替代鸡胚用于H_9亚型低致病性禽流感病毒的生产。
- 吴亚丽宋玉慧徐倩潘梦梦张剑武志丹李新生
- 关键词：重组质粒
- 稳定表达ST3GALⅠ基因的R-MDCK细胞株的建立
- 细胞膜表面含糖链的唾液酸(Sialic acid，SA)是流感病毒的受体。唾液酸属于九碳糖分子家族，是构成细胞表面糖缀合物的组成成分，通常位于细胞表面糖蛋白、糖脂分子或其他多糖中糖链的最外侧加帽位置，携带负电荷，对于细胞...
- 吴亚丽
- 关键词：禽流感病毒基因表达MDCK细胞
