钟义
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：辽宁医学院畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：辽宁省科技厅自然科学基金国家自然科学基金辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 锦州市啮齿动物汉坦病毒分子流行病学特征分析被引量：2
- 2015年
- 目的了解辽宁省锦州市啮齿动物中鼠种构成、带毒率、汉坦病毒（HV）流行情况及病毒分型。方法采用间接免疫荧光法（IFA）检测鼠肺中HV抗原;用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增阳性样品中的部分M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型。结果 2008—2013年锦州市出血热疫区捕鼠1 838只,分属2科4属5种,病毒携带率为4.24%（78/1 838）;各年之间鼠肺带毒率有统计学意义（χ2=13.579,P=0.019,P〈0.05）;部分M片段序列分析表明,11株病毒与汉城病毒（SEOV）核苷酸序列同源性为96.2%-100%,而与汉滩型病毒（HTNV）同源性仅为70.6%-71.2%,系统进化树显示检测阳性的11株SEO起源相同,与Bj HD01株病毒的亲缘关系最近。结论锦州地区HV优势毒株为SEO型,变异较小,基因型别较为稳定,并有明显的地区聚集性。
- 张旭马鸣潇张振田晶孙佩龙周大宇白梅张浩纯钟义
- 关键词：出血热带毒率系统发生分析
- 中蜂囊状幼虫病毒VP1基因的优化表达及其免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 目的原核表达优化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的VP1基因,并分析其免疫原性。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性对野生型CSBV VP1(wt VP1)基因进行优化(opti VP1),将基因wt VP1和opti VP1分别克隆至p GEX-6P-1原核表达系统,构建原核表达质粒p GEX-6P-wt VP1和p GEX-6P-opti VP1,分别转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并对诱导温度、IPTG终浓度及诱导时间进行优化,诱导蛋白经Western blot鉴定;重组蛋白经GSH-琼脂糖凝胶层析纯化;分别用PBS、纯化的GST标签蛋白、纯化的重组蛋白及CSBV纯化病毒免疫小鼠,经间接ELISA法检验各组小鼠的血清抗体效价。结果优化后的VP1基因序列降低了密码子影响指数,提高了密码子适应指数;质粒p GEX-6P-wt VP1和p GEX-6P-opti VP1经鉴定证明构建正确;最佳诱导表达条件为:IPTG终浓度0.8 mmol/L,30℃,220 r/min诱导8 h;诱导表达蛋白占菌体总蛋白百分比由wt VP1菌株(5.49±0.30)%提高至opti VP1菌株(59.7±0.51)%,纯化后纯度可达0.5 mg/ml;兔抗GST标签抗体及兔抗CSBV血清均与优化后的重组蛋白发生特异性反应;重组蛋白组小鼠二免后可产生较高水平抗体,明显高于PBS组和GST标签蛋白组(P<0.05)。结论通过密码子优化实现了CSBV结构基因VP1的高效表达,表达蛋白可诱导小鼠机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性,为探讨CSBV感染的分子发病机制和制备抗CSBV病毒的多克隆抗体奠定了基础。
- 张皓淳宋立先万红霞马鸣潇曲祖乙费东亮钟义
- 关键词：原核表达免疫原性
