- 体外盐酸处理对酯酶A4的ATPase活性影响被引量：9
- 1998年
- 徐世清陈息林司马杨虎郑必平虞晓华徐俊良甲斐英则
- 关键词：体外盐酸处理酯酶A4ATPASE活性
- 家蚕滞育生物钟蛋白质Ease A4的纯化及其分子结构分析被引量：16
- 1999年
- ＥａｓｅＡ４是家蚕卵的一种滞育生物钟蛋白质．产下后２ｄ的家蚕Ｃ１０８品种滞育性卵，经过丙酮脱脂、８５℃热处理、硫酸铵沉淀和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤层析初步分离，进一步经过Ｓｅｐ－ＰａｋＣ１８脱盐浓缩，ＨＰＬＣ（柱为ＹＭＣ－ＰａｃｋＰｒｏｔｅｉｎ－ＲＰ）分离，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＭＡＬＤＩＭＳ方法鉴定，纯化得到ＥａｓｅＡ４蛋白质．从１０ｇ蚕卵最终得到了１１．８μｇＥａｓｅＡ４．ＥａｓｅＡ４由从Ｈｉｓ到Ｔｙｒ的１５５个氨基酸残基构成，蛋白质部分的分子量为１６６０１．其２２位氨基酸残基Ａｓｎ处有一个Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ糖基化场所，并有糖基结合在该部位，糖基的分子量约为７６０．ＥａｓｅＡ４的６１位和１５０位的两个Ｃｙｓ氨基酸残基之间存在二硫键．糖基和二硫键的存在不仅有利于酶蛋白的分离。
- 徐世清甲斐英则甲斐英则东健一郎徐俊良郑必平
- 关键词：家蚕滞育性卵纯化
- 体外盐酸处理与PIN对酯酶A4活性影响的关系被引量：18
- 1999年
- 从家蚕Ｃ１０８ 品种产下后２ｄ 的滞育性卵纯化酯酶Ａ４ 及其活性抑制多肽ＰＩＮ，体外调查了盐酸处理与ＰＩＮ 对酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性影响的关系。结果表明：盐酸处理不仅迅速消除了ＰＩＮ 对酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性抑制作用；盐酸处理使蚕卵酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性峰提早出现的时间还反映了蚕卵的滞育发育时间。
- 徐世清司马杨虎郑必平虞晓华甲斐英则徐俊良
- 关键词：家蚕滞育性卵盐酸处理酯酶A4
- 盐酸刺激量对家蚕卵酯酶A4活性的影响及其与蚕卵活化的关系被引量：14
- 2000年
- 将产卵后 2 4～ 96h( 2 5℃ )的蚕卵 ,用相同或最佳盐酸刺激量 (浸酸后点青最快、点青卵率最高 )浸酸处理 ,卵龄越大 ,蚕卵点青越迟。蚕卵的点青时间在一定范围内随盐酸刺激量增大而提前 ,超过这一范围 ,则随刺激量增大而延迟。卵龄增大 ,蚕卵酯酶A4和ATPase特征性活性峰出现时间延迟 ;蚕卵经盐酸处理 ,该时间明显提前。产卵后 96h盐酸处理蚕卵 ,酯酶A4的活性峰出现时间随盐酸刺激量增大而提前。随着浸酸卵龄和盐酸刺激量的改变 ,蚕卵酯酶A4的活性峰出现时间与蚕卵点青时间发生一致的变化。盐酸刺激量能够影响蚕卵的活化 (或滞育发育期 )和发育速度。
- 徐世清陈息林司马杨虎郑必平虞晓华甲斐英则徐俊良
- 关键词：家蚕滞育性卵盐酸处理酯酶A4
- 家蚕滞育性卵盐酸孵化理论研究
- 徐世清徐俊良甲斐英则
- 关键词：棉铃虫凝集素分离纯化
- 盐酸处理蚕卵酯酶A4的活性变化及其与滞育性的关系被引量：25
- 1998年
- 从家蚕C108品种蚕卵精制酯酶A4，首次测定了产卵后24～96h浸酸蚕卵酯酶A4的ATPase活性。蚕卵经盐酸处理后在体外5℃1～2d或体外25℃1～3h出现酶活性峰。与低温活化蚕卵比较，产卵后24～96h的浸酸蚕卵，在体外5℃酶活性峰出现时间提早了8．5～22d，在体外25℃提早了3～9h。浸酸后蚕卵迅速解除滞育，滞育发育时间显著缩短。将不同卵龄未浸酸蚕卵与盐酸处理蚕卵酯酶A4的ATPase活性峰出现时间差制成曲线，在体外5℃或25℃的结果几乎都完全与5℃冷藏时蚕卵的滞育发育时间曲线重叠。盐酸处理蚕卵酯酶A4的活性变化与蚕卵活化有高度相关性。
- 徐世清司马杨虎朱江迮玉官张雨青甲斐英则徐俊良
- 关键词：滞育性卵酯酶A4
- 家蚕多肽抑制因子对酯酶A4的ATP酶活性影响被引量：15
- 1999年
- 从产下后２ｄ的家蚕Ｃ１０８品种滞育性卵精制酯酶Ａ４和其多肽抑制因子ＰＩＮ，体外调查了ＰＩＮ对酯酶Ａ４的ＡＴＰ酶活性影响。酯酶Ａ４和ＰＩＮ５℃混合２５～１３ｄ，除去ＰＩＮ后５℃保护，ＡＴＰ酶活性峰都在１２～１４ｄ后出现；２５℃混合时，除去ＰＩＮ后，ＡＴＰ酶活性峰出现时间为混合时间再加１２～１４ｄ。利用ＭＡＬＤＩＭＳ方法，首次检测到纯化的酯酶Ａ４和合成ＰＩＮ的结合体。
- 徐世清郑必平陈息林司马杨虎虞晓华甲斐英则徐俊良
- 关键词：家蚕滞育性卵酯酶A4
- 体外25℃家蚕卵酯酶A4的ATP酶活性变化及其与滞育性的关系被引量：3
- 2000年
- 从家蚕卵纯化出EA4酶蛋白 ,调查了温度对EA4的ATP酶最高活性和其出现时间的影响以及与蚕卵滞育性的关系。EA4的酶活性反应温度为 2 5℃时比 5℃时提高约 1 0倍。从滞育性卵和盐酸处理卵纯化EA4 ,或者用EA4的活性抑制多肽 (PIN)体外处理酶蛋白质 ,2 5℃中EA4的最高活性出现时间比 5℃中显著提早。随纯化时卵龄或PIN处理时间的改变 ,2 5、5℃中EA4的最高活性出现时间以及与蚕卵 5℃冷藏时滞育发育时间有相同趋势的变化。体外 2 5℃和体外 5℃一样 。
- 徐世清藤国琴甲斐英则徐俊良郑必平陈息林司马杨虎
- 关键词：家蚕酯酶A4ATP酶活性
- 家蚕滞育性卵盐酸处理的靶物质被引量：24
- 2001年
- 酯酶A4 (EA4 )是家蚕卵的滞育生物钟蛋白质。从家蚕C10 8品种产下后 4 8h的滞育性卵和盐酸活化处理卵分离纯化出EA4酶蛋白 ,使用合成的EA4活性多肽抑制因子PIN (氨基酸结构 :SIFMTKQHSQDDIIQHPLDYVEQQIHQQKQKLQKQTLN) ,研究了PIN对EA4酶蛋白的作用机制。滞育性卵的EA4酶蛋白和PIN在 2 5℃混合 2 4h后 ,用矩阵辅助激光解吸离子质谱法 ,检测到了二者的结合体 ,该结合体在盐酸处理后消失 ;盐酸活化处理蚕卵的EA4酶蛋白和合成PIN之间没有出现这种结合体。体外 2 5℃ ,滞育性蚕卵EA4的ATPase特征性活性峰在 6 5h后出现 ,而盐酸活化处理蚕卵的EA4在 1 5h后出现活性峰值。盐酸处理可能通过解除PIN对EA4的抑制作用 ,在短时间内激活EA4酶蛋白 ,从而活化滞育性蚕卵。
- 徐世清郑必平司马杨虎甲斐英则徐俊良
- 关键词：家蚕滞育盐酸处理酯酶A4
- 家蚕卵酯酶A4活性抑制多肽PIN与滞育激素的关系初探被引量：2
- 2000年
- 利用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ ＨＲ１０／３０柱，从家蚕滞育性卵分离出滞育生物钟蛋白质酯酶Ａ４的活性抑制多肽（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎ－ｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｎｅｅｄｌｅ，简记ＰＩＮ），将其注射家蚕大造品种非滞育性蛹，结果出现了产滞育性卵的母蛾。利用合成的ＤＨ成份，发现对ＥＡ４的ＡＴＰ酶（ＡＴＰａｓｅ）活性有强烈的抑制性。从分子量分析，ＰＩＮ多肽和ＤＨ多肽十分接近。
- 徐世清司马杨虎陈息林郑必平甲斐英则徐俊良
- 关键词：家蚕卵酯酶A4PIN滞育激素
