[目的]探讨麦洼牦牛转铁蛋白(Transferrin,TF)的结构及生理功能。[方法]采用RT-PCR方法,从麦洼牦牛心脏克隆出TF基因,并运用多种生物信息学软件对其进行核苷酸序列及蛋白质结构分析。[结果]克隆得到的麦洼牦牛TF基因开放阅读框为780 bp,编码259个氨基酸,分子质量为28.33 k Da,理论等电点8.57,不含跨膜区域,存在信号肽序列,二级结构以随机卷曲和α-螺旋为主,无β-折叠,同源建模预测出牦牛TF蛋白与猪血清转铁蛋白有相似的三级结构,同源性可达71.91%。[结论]成功克隆了麦洼牦牛TF基因并分析了其蛋白质结构,为进一步研究TF蛋白功能提供理论基础。
为了明确引起泥鳅患病的病原种类及耐药情况,试验采用形态观察、生理生化试验、16S r DNA基因序列分析及纸片扩散法对病原进行鉴定及耐药性分析。结果表明:该菌为发酵型,革兰阳性球菌,获得的16S r DNA序列长度为1 435 bp;该序列与Gen Bank中表皮葡萄球菌16S r DNA基因序列的相似性达99%,系统进化树上与表皮葡萄球菌亲缘关系最近,从而判定该菌株为表皮葡萄球菌;该菌对复方新诺明、红霉素和氨苄西林等7种药物耐药,对多黏霉素B、诺氟沙星和氧氟沙星等4种药物中度敏感,对头孢曲松、氟苯尼考和利福平等8种药物高度敏感。
采用RT-PCR方法扩增并克隆麦洼牦牛G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling 5,RGS5)基因序列,利用ClustalX 1.83和Mega 5.0软件构建系统进化树,并选用多种生物信息学软件进行序列分析和蛋白结构预测。结果表明,所得麦洼牦牛RGS5基因长度为863bp,包含1个546bp的完整开放阅读框,编码181个氨基酸,GenBank登录号为KJ867514。系统进化树分析发现,麦洼牦牛RGS5氨基酸序列与普通牛亲缘关系最近,其次是山羊和绵羊。RGS5基因编码的蛋白质分子质量为20.94ku,理论等电点(PI)为6.35,它是一种以α-螺旋为主,不含信号肽的非跨膜、不稳定性蛋白。三级结构预测显示,麦洼牦牛与人RGS5蛋白三级结构相似性高达90.51%。以上结果为深入研究RGS蛋白功能积累科学资料。
