陈长征
- 作品数：14 被引量：55H指数：4
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 利用金属离子(Fe^(3+))配体层析亲和筛选蛋白激酶识别的底物序列
- 1997年
- 将cAMP依赖的蛋白激酶(cAPK)识别的特征底物序列与噬菌体外膜蛋白g^3p融合,展示于线状噬菌体fd的表面,构建了cAPK底物(PKS)噬菌体.噬菌体体外磷酸化标记结果表明,PKS噬菌体上分子量约为60ku的蛋白可被明显磷酸化标记,与PKS-g^3p融合蛋白的分子量一致.利用金属离子(Fe^(3+))配体树脂亲和筛选经cAPK磷酸化标记的Phage display随机15肽库,4轮筛选后挑取单克隆进行DNA序列测定,确定展示于噬菌体表面的多肽序列.结果表明,在所挑选的14个克隆中有5个克隆具有典型的cAPK磷酸化序列特征(R)RXS/T.对这些噬菌体的体外磷酸化标记实验结果显示,其中有(R)RXS/T序列特征的噬菌体可在分子量约60ku处被特征性磷酸化标记,与PKS噬菌体的磷酸化标记特征一致;其他有一些不具备(R)RXS/T序列特征的噬菌体也可被特征性磷酸化.
- 陈长征夏其昌李伯良王应睐
- 关键词：蛋白激酶
- 利用重组噬菌体诱导表达的大肠杆菌表达系统
- 1996年
- 将编码噬菌体T7RNA聚合酶的基因克隆至噬菌体M13mp18RF DNA中,置于lac启动子的控制之下,得到了可表达T7RNA聚合酶的重组噬菌体M13HEP。利用该噬菌体感染含T7启动子表达质粒的宿主菌以提供T7RNA聚合酶,可以诱导T7启动子控制下的外源基因的表达。该噬菌体诱导表达系统已成功地表达了多种外源基因,特别是一些表达产物对宿主菌有毒性的基因。同时,通过细菌接合将F＇因子从大肠杆菌XL1-blue转至大肠杆菌HMS174,构建了新的大肠杆菌菌株HMS174F＇,使得T7表达质粒构建、表达及单链制备可以在同一菌株中完成,得到了一个完整的T7表达系统。
- 陈长征黄华杨新颖夏其昌李伯良王应睐
- 关键词：噬菌体T7启动子大肠杆菌
- 一种新的测定蛋白激酶活性的方法──毛细管电泳测定蛋白激酶A的活性被引量：3
- 1994年
- 建立了以毛细管电泳为基础的测定蛋白激酶Ａ活性的新方法，可作为激酶测活的通用方法．此法基于底物及其磷酸化产物很容易在毛细管电泳中分开，且酶活力可用积分值计算，同时又发展了连续进样技术，能在一次电泳中同时进行１０个以上的酶活性测定，新方法操作简单，灵敏度和精确性均优于常规的同位素法．
- 万谦陈长征李伯良夏其昌
- 关键词：毛细管电泳蛋白激酶活性
- 小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α的重组表达研究被引量：3
- 1996年
- 将小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶（ｃＡＰＫ）催化亚基α（ｍＣα）分别以成熟、麦芽糖结合蛋白（ＭＢＰ）融合以及Ｎ端连续六个组氨酸（Ｈｉｓ_６）融合的形式在大肠杆菌中得到了高效表达，且成熟及融合的重组ｍＣα均有明显的蛋白激酶活性，表明蛋白激酶催化核心结构具有相对的独立性。其中Ｈｉｓ_６－ｍＣα可利用金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和层析（Ⅰ－ＭＡＣ）一步纯化，所得融合蛋白可通过Ｈｉｓ_６亲合手臂（Ｔａｇ）固相化于金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和树脂上，为进一步利用ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ多肽库筛选ｃＡＰＫ识别的底物序列和专一性抑制剂打下了基础。
- 陈长征范均许正平夏其昌李伯良王应睐
- 关键词：蛋白激酶环腺苷酸
- 蛋白质N端豆蔻酰化修饰的基因工程表达偶联加工系统
- 1996年
- 对酵母ＮＭＴ基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究，进而构建了复制子为ｐ１５Ａ并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒ｐＫＺＭＴ，将其与表达质粒ｐＣＺｍＣα１共转化进大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｆ′，进行双质粒表达偶联加工修饰研究，其中ｐＣＺｍＣα１表达底物蛋白小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶催化亚基α（ＰＫＡｍＣα）。ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，双质粒表达系统中，ＰＫＡｍＣα都得到了稳定的高表达，尤其在２３℃低温诱导表达时，表达产物的可溶性部分明显增多；而酵母ＮＭＴ被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。［３Ｈ］ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ标记测定及放射自显影的结果显示，在大肠杆菌中表达的重组ＰＫＡｍＣα被豆蔻酰化修饰。
- 段治军陈长征杨新颖李伯良王德宝
