王静波
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人肌细胞增强因子2C基因慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能。方法以人MEF2C基因序列为模板合成其编码框序列,通过限制性内切酶NotⅠ和NsiⅠ酶切、T4DNA连接酶连接,将MEF2C插入慢病毒载体质粒LV5-GFP,构建人MEF2C基因重组慢病毒质粒载体,转化感受态细菌,筛选阳性克隆,与包装质粒通过脂质体共转染人胚肾细胞系293T,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察感染效率,PCR方法检测MEF2C mRNA的过表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体LV5-MEF2C-GFP,三质粒共转染293T细胞后形成假慢病毒颗粒;浓缩假病毒后测定其滴度为2×109TU/ml;以复感染系数MOI为5感染293T细胞,感染效率在70%以上。PCR证实感染带有目的基因假病毒的293T细胞表达MEF2CmRNA的水平较感染阴性对照病毒的293T细胞表达水平明显升高(t=11.93,P=0.000)。结论成功构建MEF2C慢病毒表达系统,为应用过表达技术探索其在肿瘤发生和发展中的作用奠定了基础。
- 孙兆刚付鹏刘爱华王静波孙新六刘兴田
- 关键词：慢病毒属绿色荧光蛋白质类293T细胞
- 实时FQ-PCR在诊断解脲脲原体感染中的应用研究被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨实时荧光定量聚合酶链反应检测非淋病性尿道炎、宫颈炎等疾病中解脲支原体(Uu)感染的准确性及其在实验室诊断中的应用价值。方法:将临床116例标本分别用实时FQ-PCR检测及常规培养法同时检测,并对两种方法的检测结果进行分析比较。结果:116例临床标本,Uu培养阳性49例,阳性率为42.2%,实时FQ-PCR阳性47例,阳性率为40.5%。Uu培养阳性的49例标本中,实时FQ-PCR法阳性46例,二者诊断符合率为96.6%,经卡方检验两种方法无显著差异(χ2=0.25,P>0.05)。实时FQ-PCR相对于培养法的敏感性为93.9%,特异性为98.5%,两法检测Uu的效率基本相当。结论:实时FQ-PCR法不仅能对标本中DNA模板拷贝数准确定量,而且比常规培养法更简便、快捷,但不能用于判定治愈。
- 亓春花郭辉吕荣菊刘爱华王静波
- 关键词：解脲脲原体实时荧光定量聚合酶链反应
- 人MEF2C基因shRNA慢病毒载体构建及其对Daoy细胞MEF2C mRNA表达的影响
- 2012年
- 目的构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)基因短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,观察其对髓母细胞瘤Daoy细胞MEF2C mRNA表达的影响。方法设计MEF2C基因特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pGLV3/H1/GFP/Puro载体,筛选有效shRNA慢病毒载体,继而在293T细胞中包装成病毒颗粒,将其感染髓母细胞瘤Daoy细胞,Real-time PCR检测MEF2C mRNA。结果构建的MEF2C基因shRNA慢病毒载体测序正确,包装获得的shR-NA慢病毒颗粒感染Daoy细胞后其MEF2C mRNA表达量较阴性对照组下降了81.1%。结论成功构建了MEF2C基因shRNA慢病毒表达载体并包装成慢病毒颗粒,其能够有效抑制MEF2C mRNA的表达。
- 付鹏刘爱华王静波杨宪勇谭业克刘兴田
- 关键词：短发卡RNA慢病毒
