叶戋
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 发文基金：武汉市科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae木聚糖酶基因的克隆、表达和酶学性质分析被引量：3
- 2008年
- 【目的】从棉花黄萎病真菌Verticillium dahliae中克隆木聚糖酶基因,并在毕赤酵母中进行异源表达,研究酶学性质。【方法】通过多序列比对设计简并引物,扩增出真菌V.dahliae木聚糖酶基因片段,再采用基因组步行PCR技术获得全长木聚糖酶基因序列。经BLAST比对并结合GT-AG原则分析,该基因含有一个大小为63bp的内含子,利用DpnI介导的缺失方法对含内含子的全长木聚糖酶基因进行剪接,获得该基因的全长cDNA。将克隆到的cDNA在毕赤酵母GS115进行了表达,重组酶经纯化后进行酶学性质分析。【结果】BLAST比对显示,该cDNA推测的氨基酸序列和已知木聚糖酶的最高一致性为72%。测得该酶最适反应温度为45℃,最适反应pH值为6,在pH5-9维持50%以上的活性,对山毛榉材木聚糖具有最好的水解效果。Mg2+和Ca2+对酶有激活作用,分别提高了33.7%和16.6%,EDTA,β-巯基乙醇和NaN3对酶的活性基本没有影响,Tween-80和DMSO使酶活性提高了28.4%和12.8%。【结论】本文从引起棉花黄萎病的真菌V.dahliae中克隆到的木聚糖酶基因是在GenBank上登录的第一个来自棉花黄萎病真菌的木聚糖酶基因序列。本文所用的克隆方法可以高效的从植物病原真菌和白腐真菌克隆只含一个内含子的11家族的新木聚糖酶基因,避免了摸索原始菌株酶表达诱导条件,检测酶的活性等繁琐的操作。酶学性质分析显示该酶在低聚木糖的制备,面包改良上有潜在的应用价值。
- 张桂敏饶犇叶戋马立新张先恩
- 关键词：木聚糖酶VERTICILLIUM毕赤酵母
- 高通量克隆真菌木质纤维素降解酶基因与表达研究
- 木质纤维素包括纤维素、半纤维素、木质素等,相应的木质纤维素降解酶包括纤维素酶 (内切葡聚糖酶,纤维二糖酶,葡萄糖苷酶等)、半纤维素酶(木聚糖酶、甘露聚糖酶等)、木质素降解酶(漆酶,木质素过氧化物酶,锰依赖过氧化物酶等)。...
- 张桂敏叶戋蔡立涛马立新
- 关键词：大型真菌木质素降解酶高通量
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