薛彬
- 作品数：2 被引量：22H指数：2
- 供职机构：南京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：南京师范大学校科研和教改项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人谷胱甘肽 S-转移酶pi(GSTp)中半胱氨酸对其在细胞氧化应激下功能的影响被引量：4
- 2004年
- 利用PCR定点突变技术构建人GSTp三种半胱氨酸突变体C^(47/101)、C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)。将CSTp 野生型和突变体表达质粒转染293细胞,以CDNB 为底物测定胞内GST 的转移酶活性,结果显示各类突变体均明显抑制了细胞内源性CST 的催化活性,具有显著的负显性(dominant nega-tive)突变体的功能;将CSTp 野生型和突变体与c-Jun、NF-kB 和p53的报告基因载体共转染,通过萤光素酶活性测定发现突变体C^(14/47/101)和C^(14/47/101/169)能明显激活c-Jun 和p21的转录活性;Western印迹分析显示突变体均能上调细胞内p21蛋白的水平,细胞存活率的测定表明GSTp 突变体能增强293细胞对H_2O_2刺激的敏感性;实验结果表明半胱氨酸残基对于维持GSTp 在对抗细胞氧化应激过程中的保护作用至关重要。
- 司马健何兰朱键薛彬邰一琳张双全殷志敏
- 关键词：半胱氨酸定点突变氧化应激
- 基因工程酶法结合酵母能量耦联高效合成L-谷氨酰胺的研究被引量：18
- 2004年
- 通过PCR方法从Bacillussubtilis基因组DNA中扩增出谷氨酰胺合成酶基因 (glnA) ,克隆至表达载体pET2 8b ,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,用IPTG及乳糖诱导表达。SDS PAGE分析表明 ,所表达的谷氨酰胺合成酶 (glutaminesynthetase ,简称GS)为可溶性蛋白 ,约占总菌蛋白的 80 %。利用表达的GS蛋白N端的 6×His Tag对GS进行亲和层析 ,将获得的纯蛋白进行酶活性测定。结果表明 ,纯化的GS合成反应的最适温度为 6 0℃ ,最适pH为 6 5 ,Mn2 + 能明显提高GS的活性和稳定性。工程菌BL2 1(DE3) pET2 8b glnA粗提物中GS的比活是宿主菌本身的 84倍。以谷氨酸、NH4 Cl和ATP为底物的转化实验表明谷氨酸的转化率达 95 %以上。经筛选获得一株高效能量耦联酵母菌株 ,命名为YC0 0 1;通过能量耦联表明 ,该系统对谷氨酸的转化率高达 80 % ,平均谷氨酰胺产量为2 2g L。
- 陈群英陈国安薛彬张显久殷志敏
- 关键词：谷氨酰胺合成酶
