陈谋通
- 作品数：7 被引量：26H指数：2
- 供职机构：华南理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 带组氨酸标签的癌蛋白SET真核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2009年
- 目的为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建了癌蛋白SET和His标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1(+)/SET-His。方法从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增SET-His基因并进行双酶切,序列纯化后定向克隆至pcDNA3.1/zeo(+)载体,阳性克隆载体进行双酶切和测序鉴定,阳性克隆载体瞬时转染入L-02肝细胞,利用Western blotting检测SET-His融合蛋白的表达。结果利用RT-PCR从L-02细胞总RNA中成功克隆出SET基因,经双酶切和测序鉴定证实pcDNA3.1(+)/SET-His真核表达载体构建成功。经Western blotting验证表明,SET-His融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。结论该结果为研究SET蛋白相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机理奠定了基础。
- 陈谋通刘建军杨汝德何浩伟蒋英芝贺连华
- 关键词：三氯乙烯组氨酸标签
- 三氯乙烯致L-02肝细胞毒性后SET与其它蛋白质相互作用研究
- 三氯乙烯(Trichloroethylene，TCE)是工业上广泛应用的一种有机溶剂，主要用作金属表面脱脂剂、黏合剂、润滑剂、冷冻剂等。TCE主要通过呼吸道吸入和皮肤吸收进入人体产生职业性危害，吸收后主要蓄积于肝脏、脑、...
- 陈谋通
- 关键词：三氯乙烯蛋白质半数抑制浓度串联亲和纯化呼吸道吸入肿瘤生成
- 文献传递
- 蛋白质相互作用的研究方法被引量：16
- 2009年
- 随着基因组测序工程数量的增加,未知功能蛋白质测序工作也呈现指数式增长。生物学进程主要是由蛋白质执行和控制的,因此,阐明未知或已知蛋白质的生物学功能和从细胞水平上确定细胞机制,已成为蛋白质组学研究的主要目标。目前,随着酵母[1]、果蝇[2]、线虫[3]相互作用图谱的相继完成,蛋白质相互作用研究方法也不断发展和完善。综述了当前研究蛋白质相互作用的主要技术方法,包括酵母双杂交技术,GSTpull-down技术,免疫共沉淀技术和串联亲和纯化技术等多种研究方法,分析了各种技术方法的优缺点以及各种方法的改进,在试验中可根据不同的要求和目的选择适宜的方法。
- 陈谋通刘建军
- 关键词：蛋白质相互作用酵母双杂交
- 新抗菌靶点分选酶基因(srtA)在两种原核载体中的克隆表达被引量：6
- 2009年
- 【目的】革兰氏阳性菌的表面蛋白在病原菌致病性方面具有重要作用,表面蛋白锚定到细胞壁过程的关键酶—分选酶成为抗感染的新靶点。【方法】本文利用GenBank中的分选酶A基因(srtA)序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得618bp的DNA片段。按照常规分子克隆操作成功构建两种原核表达载体pet22-srtA和pTRX-srtA,转入大肠杆菌感受态BL21(DE3)中,在1mmol/LIPTG诱导下进行表达。利用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定和分析,【结果】结果显示:(1)重组载体pet22-srtA和pTRX-srtA分别表达出相对分子量为约45kDa和39kDa的外源蛋白;【结论】(2)分子伴侣硫氧还蛋白(Trx)有利于分选酶A基因的可溶性表达。该实验为后续的分选酶酶学性质研究特别是抑制剂筛选研究奠定良好基础。
- 罗立新江彬强陈谋通
- 关键词：原核表达金黄色葡萄球菌抗菌
- 带His标签的癌蛋白SET真核表达载体的构建
- 目的为了研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建了癌蛋白SET和His标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1(+)/SET-His。方法从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩...
- 陈谋通刘建军黄海燕何浩伟蒋英芝邢秀梅
- 关键词：组氨酸标签融合蛋白蛋白磷酸酶2A
- 文献传递
- 带TAP标签的癌蛋白SET真核载体的构建及其表达被引量：1
- 2009年
- 背景与目的:为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建带串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1/SET-TAP。材料与方法:从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增SET基因,从质粒中扩增得到TAP基因,采用重叠PCR法将基因SET与TAP连接成SET-TAP,双酶切后纯化序列定向克隆至pcDNA3.1/zeo(+)并转化E.coli DH5α,取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,重组质粒瞬时转染L-02肝细胞进行表达,Real Ti me-PCR和Western blotting检测融合蛋白的表达。结果:经双酶切和DNA测序鉴定,证实pcDNA3.1/SET-TAP真核表达载体构建成功,将该载体转染L-02细胞后,融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。结论:该结果为研究SET在三氯乙烯致肝细胞毒性的蛋白质相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机制奠定了基础。
- 周丽陈谋通刘建军房师松黄海燕袁建辉徐新云
- 关键词：三氯乙烯重叠PCR串联亲和纯化
- 食源性单核细胞增生李斯特菌遗传多样性分析和群体感应研究
- 单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是可细胞内增殖的兼性厌氧革兰氏阳性食源性致病菌，可引起败血症，脑膜炎等严重李斯特菌病，致死率达到20~30%，被世界卫生组织定义为四大食源性病原菌之一。...
- 陈谋通
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌污染调查生物膜
- 文献传递
