王俐
- 作品数：32 被引量：66H指数：5
- 供职机构：新乡医学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省教育厅自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用
- 本发明公开了一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。该附着体表达载体上插入有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的分段β...
- 王小引王天云张玺王俐李琴王芳张俊河林艳付笑笑
- 人β-干扰素核基质附着区在CHO细胞中对转基因表达的调控被引量：5
- 2008年
- 背景:核基质附着区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列,不仅可影响邻近内源基因的表达,还能克服转基因沉默,提高外源基因的转录与表达。目的:探讨在CHO细胞中β-干扰素核基质附着区对氯霉素乙酰转移酶转基因表达的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-04在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。材料:CHO细胞株由中国典型培养物保藏中心提供。含氯霉素乙酰转移酶报告基因及G418筛选标记的质粒pCATG载体由本实验室构建。方法:将PCR扩增得到的人β-干扰素核基质附着区分别用SacI/KpnI及BamHI/SalI酶切,连接至用相应内切酶酶切的pCATG载体上,转化E.coliJM109,提取质粒行酶切电泳,将构建好的载体命名为pCAT-MAR,该载体含氯霉素乙酰转移酶报告基因表达盒及两侧的β-干扰素核基质附着区。分别用载体pCATG及pCAT-MAR转化CHO细胞,提取具有G418抗性的细胞株基因组DNA,PCR扩增氯霉素乙酰转移酶基因。主要观察指标:ELISA法分析氯霉素乙酰转移酶报告基因的表达。PCR法检测pCAT-MAR载体是否稳定整合在宿主基因组上。结果:①pCATG转化的CHO细胞共筛选出16个阳性细胞株,pCAT-MAR转化的CHO细胞筛选出17个阳性细胞株。β-干扰素核基质附着区可使氯霉素乙酰转移酶报告基因表达水平提高2.8倍,pCATG转化CHO细胞的变异系数为2.0650,pCAT-MAR转化CHO细胞的变异系数仅为0.8131。②稳定转化的细胞株基因组DNA均扩增出437bp目的片段,证明pCAT-MAR载体已经稳定整合到基因组上。结论:β-干扰素核基质附着区能提高转基因在CHO细胞的表达水平,并且可降低不同转化细胞株之间转基因表达的差异性。
- 昝玉玺王天云张俊河王俐
- 关键词：核基质结合区基因沉默报告基因
- 一种人类及哺乳动物细胞表达载体及其应用
- 本发明提供了一种人类及哺乳动物细胞表达载体及其应用，所述表达载体的核苷酸序列如Seq ID No.1或Seq ID No.2所示，其是以pCAT3-control作为出发载体构建的一种表达载体，本发明的表达载体能够显著提...
- 张俊河王天云董卫华王芳赵春澎柴树洁王小引王俐杨瑞李琴
- 文献传递
- 医学本科分子生物学教学改革探索被引量：8
- 2007年
- 分子生物学是生命医学科学中带头学科之一。随着分子医学时代的到来,医学院校开设分子生物学课程已显得十分必要,如何合理开展医学分子生物学教学课程的教学,是医学院校面临的新的机遇和挑战。从教材内容、教学手段与方法、实验教学、教学考核等诸多方面着手进行了相关的分析与思考。
- 王天云王俐昝玉玺杨保胜
- 关键词：分子生物学教学改革教学方法
- 肾性贫血再认识的哲学启示
- 1997年
- 赵长安王俐石如玲
- 关键词：肾性贫血病理哲学病因
- 鸡胚尿囊膜法筛选具有抑制血管生成作用的中药被引量：3
- 2008年
- 目的筛选具有抑制新生血管生成作用的药物,为肿瘤治疗提供新的药物。方法种蛋随机分为16组,孵育8 d后,将熬制的15种单味中药及0.14 mol.L-1NaCl溶液分别加于鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)表面的载体上。作用4 d后,观察统计CAM上血管生长状况。结果在筛选的15味中药中,牡丹皮和香附子对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成具有明显的抑制作用,与NaCl组相比有显著差异(P<0.05)。结论牡丹皮和香附子能有效抑制新生血管生成。
- 李昕王俐王天云梁盼盼史高峰程亚楠李进芬
- 关键词：血管生成绒毛尿囊膜中药
- 孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织糖原合成酶激酶-3β的影响被引量：4
- 2008年
- 目的探讨孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生鼠皮层和海马糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)水平的影响。方法40只7日龄新生Wistar大鼠随机分成假手术组、缺氧缺血组、孕酮4 mg组、孕酮8 mg组和孕酮16 mg组。假手术组腹腔注射溶剂芝麻油,缺氧缺血组于缺氧前30 min腹腔注射溶剂芝麻油,孕酮组于缺氧前30 min腹腔注射相应剂量的孕酮溶液,建立缺氧缺血脑损伤动物模型。24 h后动物全部处死,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑组织中GSK-3β的含量。结果缺氧缺血组新生鼠皮层和海马组织中GSK-3β水平明显高于假手术组(P<0.01),孕酮4 mg、8 mg、16 mg组皮层和海马组织中GSK-3β水平均明显低于缺氧缺血组(P<0.05)。结论缺氧缺血可升高新生鼠皮层和海马GSK-3β水平,孕酮通过降低新生鼠缺氧缺血时皮层和海马组织中GSK-3β水平发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。
- 王小引王聪睿李东亮王俐郭学鹏
- 关键词：孕酮缺氧缺血性脑损伤新生鼠糖原合成酶激酶-3Β
- 一种定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法
- 本发明公开了一种定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法，本发明的目的是提供一种制备步骤少、反应管少且成本低的定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法。本发明的技术方案是，一种定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法，包...
- 王天云王俐杨瑞昝玉玺秦川井长勤
- 文献传递
- 一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用
- 本发明公开了一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。该附着体表达载体上插入有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的分段β...
- 王小引王天云张玺王俐李琴王芳张俊河林艳付笑笑
- 文献传递
- 构建人csp-B核基质结合区克隆及其介导的反转录载体
- 2010年
- 背景:核基质结合区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列。大量实验表明,核基质结合区可以作为DNA复制的起始点或调控基因的转录,构建核基质结合区表达载体能提高外源基因表达水平,增强外源基因表达的稳定性及提高转化细胞稳定株的频率等。目的:通过克隆人基因组不同的核基质结合区片段,构建核基质结合区介导的包含氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因的反转录病毒载体pLXSN-MAR,以探索核基质结合区对基因表达的影响。方法:开放性实验于2007-01/12在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。自行构建含氯霉素乙酰转移酶报告基因的质粒PLXSN-CAT载体。TaqDNA聚合酶、T4DNA连接酶、DNAMarker、限制性内切酶BamHⅠ、凝胶纯化试剂盒、质粒提取试剂盒均购于大连TaKaRa公司;引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。以人基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应扩增csp-B核基质结合区序列,克隆入反转录载体PLXSN-CAT中,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析鉴定目的基因。结果与结论:聚合酶链反应扩增的特异性片段长度为931bp,以此构建的重组质粒命名为PLXSN-CAT-MAR,经BamHⅠ酶切后显示5.9kb和931bp左右的两条片段,测序结果与Gen-bank中的人csp-B核基质结合区(Genbank序列号M62716)序列一致,证明人核基质结合区片段已成功克隆到了反转录载体PLXSN-CAT中。提示成功构建了PLXSN-CAT-MAR反转录表达载体。
- 昝玉玺王俐张俊河王天云
- 关键词：核基质结合区基因克隆
