汤巧
- 作品数：16 被引量：63H指数：5
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省教育厅科研计划衢州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 三种梅毒螺旋体抗体检测方法的比较分析被引量：8
- 2014年
- 目的比较化学发光法(TP-CLIA)、酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝聚试验(TPPA)对梅毒螺旋体特异性抗体(TP-Ab)检测的意义。方法分别用CLIA、ELISA和TPPA检测患者的1 797份血清样本,收集CLIA/ELISA/TPPA/法检测均阳性但临床未明确诊断的标本及结果不一致标本以重组免疫印迹法(RIBA)最终确认。结果三种方法共筛选69例阳性及可疑血清标本。CLIA/ELISA/TPPA法均阳性标本63例,其中52例有临床明确诊断。另11例3种方法检测均阳性但未明确诊断标本和6例检测结果不一致标本用RIBA确证。CLIA法确认阳性66例,阳性率3.67;ELISA法确认阳性65例,阳性率3.62;TPPA法法确认阳性61例,阳性率3.39;CLIA、ELISA及TPPA法敏感性分别为98.51%、97.02%和91.05%;特异性均为99.88;诊断效率分别99.83%、99.78和99.66%。结论 CLIA法和ELISA法敏感性均高于TPPA法,不管用何种方法检测对于临床诊断不符的标本均应慎重,必要时用RIBA法补充确认,以排除假阳性。
- 魏从芳汤巧
- 关键词：梅毒螺旋体化学发光法酶联免疫吸附试验
- 卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白gpK8．1的抗原性与免疫原性分析被引量：1
- 2007年
- 目的表达并纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白gpK8.1,分析其抗原性和免疫原性。方法异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组大肠杆菌表达KSHV gpK8.1,用KSHV病人阳性血清作为抗体,经ELISA和Western blot检测其抗原性;用纯化的gpK8.1蛋白免疫新西兰兔,观察诱发抗体产生的时间及其效价,并用Western blot检测兔抗gpK8.1多克隆抗体特异性识别重组与天然gpK8.1抗原的能力,评价其免疫原性。结果ELISA和Western blot证实3份KSHV阳性血清均能识别重组gpK8.1蛋白;重组gpK8.1蛋白免疫动物6周后,兔血清多克隆抗体效价达到105。结论高效表达并纯化的gpK8.1蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,为KSHV检测试剂和疫苗研究提供了基础资料。
- 姚水洪卢春张玲汤巧
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒抗原性免疫原性
- 化学发光法和酶联免疫吸附法检测丙型肝炎病毒抗体的比较分析被引量：21
- 2011年
- 目的探讨化学发光法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对丙型肝炎病毒(HCV)抗体的检测意义。方法分别用CLIA法和ELISA法检测2 460例血清样本,收集CLIA/ELISA法检测阳性及可疑血清标本,以重组免疫印迹法(RIBA)最终确认。结果两种方法共筛选57例CLIA/ELISA法检测阳性及可疑血清标本。CLIA法筛选51例阳性,RIBA确证49例,1例可疑标本经确证为阴性;ELISA法筛选52例阳性,RIBA确证47例阳性,有2例可疑标本确证为阳性。CLIA法和ELISA法敏感性分别为100.00%、95.92%;特异性分别为99.92%、99.79%。结论 CLIA法较ELISA法准确、灵敏,应用CLIA法可减少漏检现象。对ELISA法和CLIA法结果S/CO较低的标本均应慎重,必要时用RIBA法补充确证,以排除假阳性。
- 汤巧吴文静夏永祥
- 关键词：化学发光测定法酶联免疫吸附测定
- 与抗原结合的结缔组织肥大细胞促进特异性T细胞反应
- 2014年
- 目的:研究结缔组织肥大细胞(Connective tissue mast cells,CTMCs)通过抗原依赖方式对T细胞反应的影响。方法:从小鼠骨髓细胞用细胞因子诱导培养CTMCs,荧光染料标记的模式抗原鸡卵清蛋白OVA与IgG形成免疫复合物后,与CTMCs共培养,通过流式细胞术观察CTMCs通过抗原抗体复合物摄取抗原的能力,并用CD69和Ki67指标进一步检测其刺激抗原特异性CD4+T淋巴细胞激活和增殖的能力。结果:从小鼠骨髓细胞成功诱导CTMCs。CTMCs能通过其表面的Fcγ受体(FcγRs)结合环境中的抗原抗体复合物,通过IgG有效摄取抗原,其水平高于摄取未与抗体结合的抗原。结合抗原后能以抗原依赖的方式激活CD4+T淋巴细胞并促进其增殖。结论:结缔组织肥大细胞通过其FcγRs和IgG抗体增加摄取抗原的能力,进而直接或间接将抗原递呈给CD4+T淋巴细胞,促进其增殖和活化,在获得性免疫中发挥重要作用。
- 汤巧丁洁
- 关键词：肥大细胞免疫复合物FCΓ受体
- 梅毒螺旋体嵌合抗原的克隆表达及其临床应用被引量：4
- 2005年
- 目的在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体Tp15-17嵌合抗原,用于临床检测梅毒感染。方法利用PCR法从Tp全基因组中分别扩增目的基因Tp15和Tp17,用T4DNA连接酶连接后,克隆进表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-6P-1+Tp15-17,在大肠埃希菌中表达重组Tp嵌合蛋白,重组蛋白经亲和层析柱纯化后包被微孔板,初步建立间接ELISA法检测血清中的抗Tp抗体。结果重组嵌合抗原获得了高效表达,免疫印迹试验显示重组抗原具有很强的抗原性。用重组嵌合抗原建立间接ELISA法,对梅毒螺旋体抗体阳性参比血清及梅毒患者血清的检测符合率100%。结论重组梅毒螺旋体嵌合抗原Tp15-17能够作为梅毒螺旋体诊断性ELISA抗原。
- 汤巧
- 关键词：原核表达酶联免疫吸附试验
- 抑制性消减杂交技术及其在细菌研究中的应用被引量：1
- 2011年
- 近年来,随着PCR技术的出现,涌现了许多基于PCR的分离有差别表达基因的新方法。较常用的有：差异显示PCR（differential display PCR,DDRT-PCR）,代表性差异分析PCR（representational difference analysis PCR,RDA-PCR）,抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH）,
- 夏永祥汤巧
- 关键词：抑制性消减杂交差异基因细菌
- 卡波济肉瘤相关疱疹病毒感染及其检测方法研究进展被引量：1
- 2006年
- 汤巧卢春
- 关键词：卡波济肉瘤疱疹病毒艾滋病
- 卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:对已制备并经初筛的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),经3次克隆选择,筛选出能稳定分泌针对K8.1蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株共9株。采用Westernblot法评价9株杂交瘤细胞培养上清识别原核表达重组K8.1蛋白和原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白的能力。结果:筛选了9株能够稳定分泌抗K8.1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Westernblot法显示,9株单抗均能特异性识别原核表达K8.1/GST融合蛋白和BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白。结论:成功制备了KSHV包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体。
- 姚水洪卢春张玲汤巧曾怡唐桂霞秦娣钱超
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒单克隆抗体酶联免疫吸附试验WESTERNBLOT
- KSHV ORF73C基因原核表达产物的纯化与免疫原性分析被引量：1
- 2004年
- 目的 纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒 (KSHV)潜伏相关核抗原 (LANA)羧基端编码基因ORF73C原核表达蛋白并分析其免疫原性。方法 含重组质粒pGEX 6p 1+ORF73C(pORF73C)的宿主菌BL2 1经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。用glutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化表达产物后 ,以重组 3C蛋白酶对融合蛋白进行解离 ,SDS PAGE对表达及纯化产物进行鉴定。以纯化的ORF73C蛋白免疫小鼠获得抗血清 ,建立ELISA检测其免疫原性。结果 SDS PAGE显示蛋白条带大小分别为 4 90 0 0和 2 30 0 0 ,与预期的ORF73C融合蛋白及ORF73C蛋白分子量大小一致 ;ELISA检测显示 ,抗ORF73C多抗免疫反应性高于未免疫小鼠血清 2倍以上。结论 成功获得了纯化的ORF73C蛋白 ,经ELISA显示其有较强免疫原性。
- 汤巧卢春黄丽钱超曾怡张玲
- 关键词：C蛋白免疫原性纯化核抗原IPTG
- 抗原捕获ELISA检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒的方法建立
- 2008年
- 目的建立检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）的抗原捕获ELISA方法，初步探讨其临床应用的可行性。方法以纯化的抗gpK8．1单克隆抗体（McAb）和多克隆抗体（PcAb）配对作为包被抗体和检测抗体，建立和优化抗原捕获ELISA检测方法，评价其敏感性、特异性和重复性，并初步用于3例已知KSHV阳性血清和257例临床血清样品中抗原的检测。结果包被的McAb浓度为5μg/ml、检测抗体浓度为1．6μg/ml时，P／N值最高，检测的敏感度为31．28ng／ml，且与EB病毒（EBV）、单纯疱疹病毒1型（HSV-1）、单纯疱疹病毒2型（HSV-2）等抗原无交叉反应，特异性高。检测3例KSHV阳性患者血清均为阳性，在257例临床血清样品中，4例捕获到KSHV抗原。结论建立了检测KSHV的抗原捕获ELISA方法，为可能的KSHV检测试剂研制提供重要实验依据。
- 姚水洪汤巧王先芳邱惠萍李胜琴卢春
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒酶联免疫吸附试验
