- 变形链球菌反应调控蛋白ComE结合序列的初步筛选被引量：1
- 2010年
- 目的:从变形链球菌基因组中筛选反应调控蛋白ComE结合的核酸序列。方法:⑴提取变形链球菌UA159基因组,进行超声剪切处理。以基因组片段为模板,用随机引物进行延伸,切胶纯化和PCR扩增后获得基因组文库。⑵应用基因组SELEX技术,以ComE蛋白为靶物质,与变形链球菌基因组文库共同孵育,循环筛选8轮。筛选产物TA克隆后送去测序,测序结果进行生物信息学分析。⑶将分析得到的2个序列分别克隆入pFW5-luc载体中,然后分别重组到变形链球菌UA159野生株和comE突变株的基因组中,采用RT-PCR的方法检测luc片段的表达。结果:⑴获得了变形链球菌UA159的基因组文库,片段范围约为100～300bp。⑵随机挑取54个克隆送去测序,经生物信息学分析和RT-PCR初步验证,最终获得1个ComE蛋白可能的结合序列。结论:采用基因组SELEX技术,筛选反应调控蛋白ComE可能的结合序列,并进行了初步验证,为后续进行变形链球菌反应调控蛋白ComE调控机制的研究奠定了基础。
- 彭磊吴丹黄博刘筱娣郭丽宏
- 关键词：变形链球菌
