缪殿南
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 融合蛋白TETPH、表达载体及其构建方法
- 本发明涉及“融合蛋白TETPH、表达载体及其构建方法”，采用RT-PCR法克隆sTrail基因，经引物延伸法构建sTrail-uPAc-his融合基因并亚克隆至原核表达载体pET-32a中，该表达载体经诱导成功获约38k...
- 熊玮闫国和梁宇佳缪殿南戴晓天孙慧勤
- 文献传递
- 含uPA裂解位点的人sTrail融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化被引量：4
- 2011年
- 目的构建含尿激酶纤溶酶原激活剂(urokinase plasminogen activator,uPA)裂解位点的人可溶性凋亡诱导配体(soluble related apoptosis inducing ligand,sTrail)基因的原核载体,表达并纯化其融合蛋白sTrail-uPA。方法 RT-PCR法克隆sTrail基因后,经引物延伸法构建his-uPA-sTrail融合基因并亚克隆至原核表达载体pET-32a中,诱导其表达蛋白并将其纯化,肠肽酶(enterokinase,EK)切与再次纯化回收该蛋白,Western blot检测其抗原性。结果表达载体经诱导成功获约38×103含载体表达标签(Trx)的融合蛋白,EK酶切该蛋白获约19.5×103的目的蛋白uPA-sTrail。检测表明,该目的蛋白具人Trail抗原性。结论成功克隆uPA-sTrail融合基因并构建至原核表达载体,并获约19.5×103的融合蛋白,且该蛋白具人Trail抗原性。
- 梁宇佳缪殿南闫国和戴晓天熊玮
- 关键词：融合基因融合蛋白抗原性
- 融合蛋白TETPH、表达载体及其构建方法
- 本发明涉及“融合蛋白TETPH、表达载体及其构建方法”，采用RT-PCR法克隆sTrail基因，经引物延伸法构建sTrail-uPAc-his融合基因并亚克隆至原核表达载体pET-32a中，该表达载体经诱导成功获约38k...
- 熊玮闫国和梁宇佳缪殿南戴晓天孙慧勤
- 人sTRAIL基因载体构建及其在真皮干细胞的表达
- 2010年
- 背景:基于肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)可溶性相关凋亡诱导配体(soluble related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)抗瘤的生物特性,克隆sTRAIL基因,构建其真核表达载体,为肿瘤细胞凋亡的实验研究奠定基础。目的:构建真核表达载体pEGFP-N1/sTRAIL,并转染真皮干细胞,以探究sTRAIL基因导入真皮干细胞的表达情况。方法:采用RT-PCR二步法,以人胎盘组织总RNA为模板,扩增sTRAIL的cDNA序列,将其克隆入pMD18-T载体,随后亚克隆入载体pEGFP-N1中,构建其真核瞬时表达载体pEGFP-N1/sTRAIL,以Fugene6转染技术,将sTRAIL基因导入真皮干细胞。倒置显微镜下观测转染后真皮干细胞生长变化及sTRAIL在其中的表达等情况。RT-PCR法对目的基因转染的真皮干细胞进行鉴定。结果与结论:克隆到sTRAIL基因的cDNA序列,成功构建了其真核表达载体,该真核表达载体能携带sTRAIL基因在真皮干细胞中正常表达。倒置显微镜下观测到转染后真皮干细胞生长状态与未转染的真皮干细胞无差异。以经sTRAIL基因转染的真皮干细胞该基因组DNA为模板,用RT-PCR法能扩增到sTRAIL基因cDNA序列。
- 缪殿南梁宇佳闫国和董世武戴晓天熊玮
- 关键词：克隆真核表达载体绿色荧光
