杨敏
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国科学院上海应用物理研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生核科学技术理学更多>>
- 基于碎片方法的N-异嘑唑-5-酰胺类HSP90抑制剂的发现
- 分子伴侣HSP90在多种癌症中功能异常,使得HSP90成为癌症治疗中一个很有前途的靶点.我们从基于片段的设计出发,设计合成了一类包含4,5-二芳基异嘑唑母核结构的小分子化合物,并进行了构效关系的研究.这类化合物在荧光...
- 陈丹琦王昕陈奕杨敏何建华王月琴王丽萍耿美玉熊兵沈竞康沈爱军李健石峰WUYAN CHEN任景黄敏刘红椿许叶春
- 关键词：HSP90抑制剂晶体学
- 火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶基因克隆、表达纯化和酶学性质研究
- 2014年
- 【目的】在大肠杆菌中表达火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,纯化得到重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,在此基础上系统研究火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学特征。【方法】构建8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶重组表达质粒,将重组质粒转化Escherichia coli Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达重组蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白;最后利用含8-氧鸟嘌呤损伤的寡核苷酸作为底物,测定8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学性质。【结果】在大肠杆菌中成功诱导表达了重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,经Ni2+亲和纯化后蛋白纯度大于95%。在体外鉴定了重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学性质。结果表明重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶可以切除DNA中的8-氧鸟嘌呤(8-Oxo-G,GO)损伤碱基,并且具有AP裂解酶活性。重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶催化反应的最适pH值和温度分别是pH 8.5和55°C。除Zn2+对火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶促反应有明显的抑制作用外,实验中测定的其它二价离子(Mn2+,Mg2+,Ca2+,Ni2+,Co2+,Cu2+)对其没有明显的影响。离子强度在50-100 mmol/L范围内对其酶促反应影响不大,超过100 mmol/L时有明显的抑制作用。与8-氧鸟嘌呤互补的碱基差异对火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶切除8-氧鸟嘌呤损伤的效率影响不大;但与单链DNA相比,双链DNA是优选底物,切割效率如下:GO/C≈GO/G≈GO/T≈GO/A>GO/-。【结论】在大肠杆菌中成功表达,并Ni2+亲和纯化了火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,生化研究表明制备的重组蛋白具有8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶活性,可能负责切除火球菌基因组DNA中的8-氧鸟嘌呤损伤。
- 周欢杨敏陈亚星刘亚辉孙丽华徐春艳郁峰何建华
- 关键词：碱基切除修复
- 火球菌RecJ蛋白的表达纯化及结晶
- 2013年
- RecJ蛋白是一类在细菌和古菌中高度保守的蛋白,在细胞内参与同源重组、甲基指导的碱基错配修复和碱基切除修复等过程。RecJ蛋白除了可以从单链DNA的5端降解DNA外,还可以从单链RNA的3端降解RNA。为能够从结构上阐明古菌火球菌(Pyrococcus furiosus)RecJ蛋白在细胞内的功能和其对不同底物(RNA/DNA)的降解活性的影响,本实验采用蛋白质晶体学的方法,通过蛋白质的表达纯化,晶体筛选得到了火球菌RecJ蛋白的晶体,并通过结晶条件的初步优化得到了有衍射的晶体。
- 杨敏李敏军周欢陈亚星孙丽华郁峰徐春艳唐琳何建华
- 关键词：X射线衍射
