施桥发
- 作品数：46 被引量：135H指数：8
- 供职机构：南昌大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省卫生厅科技计划项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 信号肽重组mBD2在宫颈癌细胞中的稳定表达及活性测定被引量：3
- 2007年
- 目的探讨鼠重组beta防御素2(rmBD2)对SiHa细胞增殖的影响。方法采用脂质体转染法将真核表达质粒pcDNA3.1(+)/rmBD2转染SiHa细胞系,G418筛选出稳定表达细胞克隆。分别采用间接免疫荧光染色、RT-PCR方法检测稳定转染细胞中rmBD2蛋白和rmBD2 mRNA表达,并采用MTT法对稳定转染细胞株进行细胞增殖能力的测定。结果采用100μg/mL的G418浓度筛选质粒转染的SiHa细胞20d,得到了rmBD2稳定表达细胞株SiHa/rmBD2及转染pcDNA3.1(+)空质粒的对照细胞SiHa/K。免疫荧光染色显示SiHa/rmBD2细胞质中均有目的蛋白的表达,转染效率为100%。提取稳定转染4、6、8、10周SiHa/rmBD2细胞总RNA,RT-PCR反应扩增得到220bp左右的目的片段,而SiHa/K及SiHa细胞未见目的蛋白表达。细胞生长曲线显示SiHa/rmBD2细胞的生长速度低于SiHa/K及SiHa细胞(P<0.05)。结论本研究成功筛选了稳定表达rmBD2的细胞株SiHa/rmBD2,并采用间接免疫荧光染色、RT-PCR证实了rmBD2蛋白和rmBD2 mRNA的稳定表达,细胞增殖实验表明rmBD2可以明显抑制肿瘤细胞的增殖,为进一步研究rmBD2的抗肿瘤作用奠定了细胞学基础。
- 魏晓丽李明远李虹施桥发李婉宜蒋忠华
- 关键词：免疫荧光RT-PCR细胞生长曲线
- 一种细胞培养用负压自净废液缸
- 本实用新型涉及废液收集技术领域，公开了一种细胞培养用负压自净废液缸，包括分离缸和废液缸，所述废液缸设置在分离缸的底部，所述分离缸包括缸体，所述缸体的内底部开设有排水口，所述排水口的内部设置有过滤网，所述缸体的内侧壁设置有...
- 李鑫辰唐森施桥发闵卫平
- HPV16 E5蛋白原核表达、鉴定及真核表达稳定株的筛选被引量：2
- 2006年
- 目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经 BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,转染JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG 对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Westem blotting检测目标蛋白表达情况。将BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切 pET32(+)／E5质粒后取得的E5全基因片段转入pcDNA3．1(+)空质粒,构建pcDNA3．1(+)／E5真核表达质粒并对NIH3T3 细胞进行转染,最后用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR鉴定细胞内HPV16 E5基因表达情况。结果成功构建了原核表达质粒pET32／E5,在1 mmol／L IPTG、28℃诱导条件下BL21(DE3)菌体中HPV16E5-TRX融合蛋白占菌体总蛋白的10％左右。真核表达质粒pcDNA3．1(+)／E5在成功转染NIH3T3细胞后于250μg/ml G418浓度时筛选21 d得到了E5基因稳定表达株,RT-PCR产物测序得到了HPV16 E5基因全序列。结论成功构建了pET32／E5原核和 pcDNA3．1(+)／E5真核表达质粒,HPV16E5蛋白在大肠杆菌和NIH3T3细胞中的稳定表达,这些结果为进一步深入研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用奠定了坚实基础。
- 施桥发魏晓丽李虹王保宁张卫东蒋忠华曹康李明远
- 关键词：HPV16原核表达SDS-PAGE免疫印迹RT-PCR
- 1610例HPV患者亚型感染调查分析被引量：10
- 2014年
- 目的了解人类乳头状瘤病毒(HPV)感染亚型在人群中的分布情况。方法采用PCR-反向点杂交法对本院就诊者HPV基因分型检测。结果在1610例样本中,检测出就诊人群HPV阳性率28.82%,女性阳性率29.14%、男性阳性率24%;在HPV感染类型中,高危型占构成比的71.02%,其中女性占70.38%,男性占0.64%;低危型占构成比的15.28%,其中女性占10.82%,男性占4.46%;常见型构成比占13.68%,其中女性占13.37%、男性占0.31%。在多重感染中,就诊者或女性都主要以高危亚型为主、占43.33%,而男性主要以低危亚型为主、占5.00%,并以25岁以下人群HPV感染阳性率最高、占40.38%。结论在HPV感染人群中,单一感染或多重感染都以高危型最常见;在多重感染(双重感染为主)中,人群或女性都以高危型常见,男性以低危型多见,而以25岁以下人群最多见,主要由高危亚型构成的混合感染。
- 张志勇曾文兴胡有长何媛施桥发王美珍
- 关键词：HPVPCR-反向点杂交
- VEGF在子宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义
- 张丽霞施桥发唐萍
- 文献传递
- O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶在子宫颈癌中的表达及临床意义被引量：1
- 2014年
- 目的探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在子宫颈癌组织中表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色方法检测子宫颈癌组织中MGMT的表达。结果 60例子宫颈癌组织中MGMT的阳性表达率为93.33%,显著高于14例对照正常宫颈组织中阳性率42.8%,(P<0.05);子宫颈癌患者中,Ⅰ期与Ⅱ期的MGMT阳性率分别为100%、95.83%,显著高于Ⅲ-Ⅳ期的阳性率62.5%(P<0.01)。结论 MGMT的表达水平与宫颈组织癌变发展的进程相关,其在宫颈癌组织的高表达可为宫颈癌的诊断提供重要依据。
- 张志勇邓荣春周爱群施桥发
- 关键词：子宫颈癌免疫组织化学染色
- HPV-16E4原核表达系统的建立和表达特性研究被引量：2
- 2006年
- 目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16)E4基因(E4),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性。方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增E4完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4)。经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Westernblot鉴定。结果克隆到完整E4基因为342bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%。在28℃和37℃,0.1mmol/L的IPTG诱导18h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Westernblot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His)。结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础。
- 王保宁施桥发李虹张卫东庄永华杨靖蒋忠华李明远
- 关键词：HPV-16原核表达
- HPV16 E7蛋白免疫学特性研究及其单克隆抗体制备
- 目的
HPV16是引起子宫颈癌等疾病的重要原因。在子宫颈癌患者中，90％以上的患者存在HPV感染，其中60％以上为HPV16感染。在HPV16感染的子宫颈癌细胞中，HPV16 E7蛋白存在持...
- 施桥发
- 关键词：人乳头瘤病毒16型免疫印迹单克隆抗体反转录PCR
- 文献传递
- 风湿性关节炎的自身抗体免疫学指标检测及应用进展被引量：11
- 2013年
- 类风湿性关节炎的诊断涉及临床表现、X线改变和实验室自身抗体免疫学相关检测指标等,而自身抗体临床实际中应用的主要有类风湿性因子(RF)、抗核周因子抗体(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗RA33抗体、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(抗MCV抗体)、葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体、抗核抗体(ANA)等一些自身抗体。笔者就这些指标做一综述。
- 何媛施桥发
- 关键词：抗RA33抗体
- 间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗大鼠肝损伤的研究
- 2010年
- 目的：研究小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）和单个核细胞（MNCs）在四氯化碳（CCl4）诱导性大鼠肝损伤治疗中的作用。方法：无菌条件下取雄性Balb/c小鼠骨髓分离MNCs,培养纯化及流式细胞仪筛选获得MSCs;采用CCl4制作雌性Wistar大鼠肝损伤模型,随机分为MSCs移植组、MNCs移植组和肝损伤对照组。2个细胞移植组分别在CCl4损伤后立即经尾静脉注入小鼠MSCs或MNCs,各组分别于移植细胞输入前即刻（T0）、输入后第1（T1）、7（T2）、14（T3）、28（T4）、42（T5）天断尾取血检测丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）。6周后处死大鼠,比较肝脏质量指数,肝病理学切片检测肝损伤程度,PCR检测小鼠Sry基因片段植入大鼠肝脏的情况。结果：MSCsCD44、CD90均表达阳性,而CD45表达阴性;2个细胞移植组在T1~4时点ALT和AST浓度差异有统计学意义（P〈0.05）;与肝损伤对照组比较,MSCs移植组ALT和AST浓度在T1~4时点均降低;MSCs移植组肝损伤修复程度明显好于MNCs移植组和肝损伤对照组;仅MSCs移植组肝内有小鼠Y染色体阳性细胞存在。结论：体外分离培养及扩增的小鼠MSCs可植入到CCl4诱导性肝损伤大鼠的肝组织中,并改善CCl4导致的肝损伤。
- 王福财刘玉琳傅颖媛施桥发
- 关键词：间质干细胞肝疾病
