肖文娟
- 作品数：23 被引量：49H指数：5
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程环境科学与工程化学工程更多>>
- 绿色木霉BGL Ⅰ基因在酿酒酵母中的克隆表达及其纤维素乙醇发酵被引量：7
- 2009年
- 采用反转录PCR方法从绿色木霉AS3.3711的总mRNA中获得了编码β-葡萄糖苷酶Ⅰ(BGLⅠ)的基因bgl1。序列测定表明该基因片段长2 235 bp,编码744个氨基酸残基,与里氏木霉的bgl1序列完全相同。将其插入高拷贝数整合型表达载体PScIKP,构建了重组质粒PScIKP-bgl1。线性化后转化工业酿酒酵母AS2.489菌株,利用高浓度G418筛选高抗转化子,经SDS-PAGE蛋白电泳证明获得了能高效稳定分泌表达重组BGLⅠ的转化子。重组BGLⅠ酶能直接水解培养液中的纤维二糖,在84 h测得酶活最大值为0.978 u/mL。重组BGLⅠ酶最佳反应温度为60℃,最适反应pH为4.0～5.0,并且能以纤维二糖为惟一碳源发酵乙醇,发酵90 h能够用重铬酸钾氧化比色法检测到乙醇的体积分数为0.51%。结果表明:成功克隆并在酿酒酵母中表达了一种高活性的β-葡萄糖苷酶,对于工业上直接利用纤维素为惟一碳源发酵生产乙醇的研究有重要意义。
- 刘泽寰唐根云全艳彩龚映雪肖文娟王峻梅
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母乙醇
- Direct fermentation of amorphous cellulose to ethanol by engineered Saccharomyces cerevisiae coexpressing Trichoderma viride EG3 and BGL1
- The direct ethanol fermentation from amorphous cellulose was achieved using an engineered industrial Saccharom...
- 龚映雪李晶博肖文娟林蒋海刘泽寰
- 文献传递
- 一种酿酒酵母多基因表达载体及其构建方法与应用
- 本发明公开一种酿酒酵母多基因表达载体及其构建方法与应用，该表达载体是将酿酒酵母基因组rDNA的1.8kb片段、磷酸甘油激酶启动子和磷酸甘油激酶终止子三个表达元件插入到大肠杆菌－酿酒酵母穿梭表达载体中，并在启动子上游和终止...
- 刘泽寰台艳肖文娟王峻梅
- 文献传递
- 绿色木霉EGⅢ基因的克隆及其在工业酿酒酵母中的整合表达被引量：2
- 2009年
- 通过RT-PCR从绿色木霉AS3.3711中克隆得到EG Ⅲ基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉eg3的同源性为99.6%。将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质粒,线性化后电转化酿酒酵母工业菌株AS2.489,通过SDS-PAGE蛋白电泳、刚果红染色和酶活测定对转化子进行了分析。结果表明:转化子有明显的重组EG Ⅲ表达带,能够产生CMC水解圈,说明eg3基因已在酿酒酵母中获得了正确的分泌表达,表达EG Ⅲ的重组菌产酶高峰出现时间为60 h,最高酶活接近120 U/mL,重组酶EG Ⅲ的最适温度为60℃,最适pH为6.0,转化子的遗传稳定性达到99.17%,实现了绿色木霉eg3基因在工业酿酒酵母中的稳定高效表达。
- 刘泽寰台艳唐根云全艳彩王峻梅肖文娟龚映雪
- 关键词：酿酒酵母绿色木霉
- 酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用被引量：6
- 2010年
- 构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基因稳定共表达.为检验共表达情况,反转录从绿色木霉中获得纤维素酶基因eg3和cbh2,克隆并转化获得重组酵母菌株S.cerevisiae-ec.该重组酵母能降解羧甲基纤维素形成水解圈;用羧甲基纤维素还原糖法和滤纸酶活力法测定酶活力,其最适温度和最适pH值与所表达单酶相似,表明共表达未影响两种酶的生物学特性;且双酶具有协同作用,能更有效降解非结晶纤维素.pScIKP载体能成功用于多个外源基因共表达和产物协同作用的研究,为构建能直接降解纤维素的酿酒酵母菌株,实现纤维素可再生能源的生物利用奠定了基础.
- 龚映雪台艳肖文娟王峻梅唐根云全艳彩刘泽寰
- 关键词：纤维素生物转化绿色木霉内切葡聚糖酶纤维二糖水解酶
- 广东汉族正常人群TLR4基因单核苷酸多态性研究(英文)被引量：1
- 2010年
- 目的:人类Toll样受体4(TLR4)是先天免疫系统中一个重要的病原微生物识别受体。本研究将建立中国汉族正常人群TLR4基因座位的单核苷酸多态性图谱。方法:收集191例健康、无亲缘关系的中国广东汉族人外周血液,通过对TLR4基因的启动子区、3个外显子区以及它们周围的内含子区进行PCR扩增和测序,得到汉族正常人群TLR4基因座位单核苷酸多态性图谱及其频率分布特点。结果:共发现8个单核苷酸多态性位点,其中5个是首次发现的新位点。分布频率最高(0.283)的单核苷酸多态性位点是-1607 C/T。常见于高加索人中的2个非同义突变Asp299Gly和Thr399Ile在汉族人中没有被发现。中性检验显示汉族人群TLR4基因符合中性进化模型。结论:本研究建立了汉族正常人群TLR4基因座位的单核苷酸多态性图谱,发现了一些种族特异性的单核苷酸多态性位点,这些工作将为今后开展汉族人基因多态性与疾病相关性研究以及人群进化研究提供一定的帮助。
- 肖文娟李楠龚映雪王峻梅全艳彩刘泽寰
- 关键词：TOLL样受体4单核苷酸多态性汉族人群
- 一种酿酒酵母多基因表达载体及其构建方法与应用
- 本发明公开一种酿酒酵母多基因表达载体及其构建方法与应用，该表达载体是将酿酒酵母基因组rDNA的1.8kb片段、磷酸甘油激酶启动子和磷酸甘油激酶终止子三个表达元件插入到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体中，并在启动子上游和终止...
- 刘泽寰台艳肖文娟王峻梅
- 文献传递
- 一种高效快速鉴定酵母转化子的酵母菌落PCR方法
- 2013年
- 酵母是一种重要的基因工程宿主菌,但是由于其细胞壁结构复杂牢固,普通的菌落PCR方法的成功率较低。为解决此问题,提供一种快速、简单、高效的酵母菌落PCR方法。该方法先利用溶壁酶溶解酵母细胞壁,然后利用热涨裂解细胞并进行PCR反应。此方法将酵母细胞裂解和PCR在同一个PCR管中完成。试验结果显示此方法能成功扩增目的基因且成功率高。将此方法应用于外源性内切葡聚糖酶(endoglucanase,EG)的酿酒酵母转化子筛选,经与基因组PCR比较,菌落PCR与基因组PCR结果一致。结果证明此方法具有良好的稳定性,适用于酿酒酵母转化子的快速筛选。
- 武可婧吕一鸣李晶博肖文娟龚映雪刘泽寰林蒋海
- 关键词：酿酒酵母菌落PCR转化子阳性克隆
- 广东汉族人群TLR9基因单核苷酸多态性及其单倍型(英文)被引量：1
- 2010年
- 采用PCR扩增和直接测序法对191例健康且无血缘关系的广东汉族人群筛查了TLR9全基因序列,包括调控区、5′非翻译区、第1,2外显子、内含子及3′非翻译区上所有的单核苷酸多态性(SNP)位点.共检出五个SNP位点,分别为调控区的-1 486 T/C和-1 421 C/T、内含子区的+1174 A/G、第2外显子的+1 387 T/C和+2848 G/A,其中-1421 C/T和+1 387 T/C为首次发现的新位点.连锁不平衡分析表明-486 T/C,1174 A/G以及2848 G/A之间存在紧密连锁,并且涵盖了整个基因区域,形成了一个单倍域.在此基础上运用Hhase软件构建了TLR9基因的单倍型,共得到七种单倍型并模拟了它们可能的分布频率.进一步的中性检验表明TLR9基因在广东汉族人群中符合中性进化模式.
- 王峻梅付永贵刘泽寰肖文娟
- 关键词：TOLL样受体9单核苷酸多态性等位基因基因型单倍型
- 酿酒酵母金属硫蛋白成熟肽的高效表达纯化方法
- 本发明公开了酿酒酵母金属硫蛋白成熟肽的高效表达纯化方法。本发明方法是将酿酒酵母金属硫蛋白成熟肽的编码序列通过原核表达质粒pTWIN1转入到大肠杆菌中，构建得到的重组大肠杆菌可以通过IPTG诱导表达可溶性融合蛋白CBD-i...
- 刘泽寰梁晓峰龚映雪肖文娟李晶博
- 文献传递
