张钰
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金吉林省应用基础研究项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 二硫键稳定的抗HIV-1 gp41单链抗体的构建及原核表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建二硫键稳定的抗HIV-1 gp41单链抗体(dsFv)基因原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,构建含二硫键稳定的抗HIV-1 gp41单链抗体突变基因质粒pUC57-d41,BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,定向插入pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE、Western blot鉴定表达产物。对目的蛋白进行纯化和复性,并进行抗原结合活性及相对稳定性检测。结果重组载体pET-d41经酶切鉴定,证实构建正确。表达产物相对分子质量约为28000,与理论预期值完全相符。目的蛋白最高表达量可占菌体总蛋白的45.48%。经Ni-NTA亲和层析法纯化并复性后,蛋白纯度达95%以上,抗HIV-1 gp41 dsFv具有抗原结合活性,稳定性优于scFv。结论已成功构建了二硫键稳定的抗HIV-1 gp41单链抗体(dsFv)基因原核表达载体,并获得表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 佟敬山李昌金宁一于源华刘玉生于芳胡宁宁李霄张钰
- 关键词：人免疫缺陷病毒GP41单链抗体原核表达稳定性
- 基于SFVRNA复制子核酸疫苗pIRSFV-HN的构建及其体内外抑瘤作用被引量：4
- 2008年
- 目的:构建基于塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN,并探讨其体内外的抑瘤作用。方法:基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因构建核酸疫苗pIRSFV-HN,pIRSFV-HN转染人结肠癌细胞HCT-116,以Western blotting检测转染后HCT-116细胞HN的表达水平,以AO/EB双荧光染色检测肿瘤细胞的凋亡,以MTT法检测疫苗对HCT-116细胞增殖的抑制。构建C57BL/6小鼠右后肢皮下荷H22腹水瘤细胞模型,瘤体内注射pIRSFV-HN(共3次),检测该小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平和特异性CTL活性。结果:成功构建基于SFV RNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN。结肠癌细胞HCT-116被疫苗转染后可有效表达HN蛋白,对照细胞则无表达;转染后HCT-116细胞出现凋亡的征象;该细胞的增殖受到明显抑制,最大抑制率达55.34%。移植瘤体内注射疫苗后,荷瘤小鼠血清IL-2、IFN-γ水平显著升高(P<0.05),其CTL活性也显著升高(P<0.01)。结论:基于SFVRNA复制子和新城疫病毒HN基因的核酸疫苗pIRSFV-HN在体外可有效地抑制肿瘤细胞;在体内可促使免疫趋向Th1优势,提高其抑瘤免疫水平。
- 张钰金宁一李霄朱继红陈漉刘立明李昌佟敬山李群陈勇志
- 关键词：新城疫病毒核酸疫苗抑瘤作用细胞毒性T淋巴细胞
- 蛋白质复性研究进展
- 蛋白质复性是一个过程,存在中间阶段,此阶段的各种相互作用力决定了蛋白质能否复性。蛋白质复性要求有一定的条件,如pH、温度、离子强度、蛋白质浓度等。另外多种添加剂能促进蛋白质复性,其中包括表面活性剂、低浓度变性剂、分子伴侣...
- 李群夏咸柱郝淑美王承宇王化磊孙培录张钰
- 关键词：影响因素
- 文献传递
- RNA干扰技术的研究进展
- RNA干扰(RNAi)是一种在进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,是一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGS)。RNA干扰(RNAi)广泛存在于真菌、植物和动物中。RNA干扰技术是近年来迅速发展起来的高效、特...
- 佟敬山金宁一李昌胡宁宁李霄张钰李群
- 关键词：RNA干扰RNAI技术
- 文献传递
- Apoptin对宫颈癌Hela细胞的抑制效应被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨Apoptin基因对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用和作用方式。方法:应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin和载体质粒pVAX1分别体外转染Hela细胞,作为重组质粒pVAX1-Apoptin组和载体质粒pVAX1组,同时设空白细胞对照组。应用Western blotting检测Apoptin基因在Hela细胞中的表达;运用噻唑兰(MTT)分析法检测重组质粒对Hela肿瘤细胞的抑制作用;罗丹明123和DCFA染色测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)和活性氧水平变化;底物染色反应检测caspase-3活性。结果:pVAX1-Apoptin组转染48h后,Hela细胞的抑制率为69.28%,明显高于对照组(0.74%)和pVAX1组(10.11%)(P<0.01)。与对照组比较,pVAX1-Apoptin组线粒体ΔΨm下降(P<0.01),细胞内活性氧水平升高(P<0.05),caspase-3活性增强(P<0.01)。结论:Apoptin可通过诱导Hela细胞凋亡,进而特异性杀伤Hela肿瘤细胞。
- 朱继红崔满华李霄孙丽丽张钰陈漉刘立明张振民金宁一
- 关键词：宫颈肿瘤细胞凋亡抑瘤作用
- SFV RNA复制子介导的Apoptin基因对人结肠癌细胞HCT-116抑制作用研究
- 目的:探讨SFVRNA复制子介导的Apoptin基因对人结肠癌细胞HCT-116的抑制作用。方法:将SFVRNA复制子介导的含有Apoptin基因的重组质粒pIRSFV-Apoptin转染HCT-116,通过AO/EB染...
- 张钰金宁一李霄李昌佟敬山李群朱继红金毅
- 文献传递
- 腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用
- 腺病毒载体是近年来被广泛应用的基因运载工具,它具有宿主细胞广泛、导入效率高、繁殖滴度高、不整合及相对安全等特点,在肿瘤基因治疗中发挥越来越大的作用。本文介绍了腺病毒载体的分子生物学特点和构建方法以及它在肿瘤基因治疗中的应...
- 张钰金宁一李霄李昌佟敬山李群
- 关键词：腺病毒载体肿瘤基因治疗
- 文献传递
- 含SFV RNA复制子的核酸疫苗的构建及实验免疫研究
- 本研究构建了两种含塞姆利基森林病毒(semliki forest virus，SFV)RNA复制子的核酸疫苗pIRSFV-HN和pIRSFV-Apoptin，限制性酶切鉴定正确。采用RT-PCR、Westernblott...
- 张钰
- 关键词：核酸疫苗外源基因基因治疗恶性肿瘤
- 文献传递
