刘英鹏
- 作品数：41 被引量：52H指数：5
- 供职机构：华中科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生环境科学与工程文化科学更多>>
- 新生大鼠耳蜗Corti器体外培养及其转基因表达被引量：4
- 2006年
- 目的建立新生大鼠耳蜗Corti器体外培养模型及观察外源基因表达。方法采用出生后1～3天龄大鼠，分离出的耳蜗Corti器组织置入表面覆盖有胶原凝胶的培养皿中，在含有10％DMEM液体培养基中培养．加入携带报告基因的腺病毒悬液，观察外源基因的表达。结果耳蜗Corti器体外培养8小时后，培养组织生长良好，形态结构清晰可辨，在该实验条件下，Corti器形态结构可以维持5天以上，最长达7天，随着培养时间的延长，由于周围组织生长的蔓延，Corti器的结构分界不清楚。腺病毒加入Corti器后12小时即有基因表达，24小时达到高峰，表达时间可持续1周。结论新生大鼠离体内耳组织转基因培养法是内耳Corti器体外培养实验研究的一种可行方法。
- 刘英鹏鄢开胜王建亭龚树生
- 关键词：CORTI器新生大鼠基因转移
- 腺病毒介导bcl-2基因转染对顺铂所致大鼠螺旋神经节细胞损伤的拮抗作用被引量：4
- 2009年
- 目的通过腺病毒（adenovirus，Ad）载体介导bcl-2基因转染体外培养的新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells，SGC），探讨bcl-2蛋白过度表达对顺铂所致SGC损伤的拮抗作用。方法体外培养新生大鼠SGC，携带绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因的腺病毒载体Ad—GFP转染SGC，并行神经丝蛋白（NF200）免疫细胞化学染色鉴定，激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察。携带bcl-2基因的腺病毒载体Ad—bcl-2转染SGC，蛋白质印迹法（WesternBlot）检测bcl-2蛋白表达。设立Ad—bcl-2转染加顺铂组（A组），Ad．GFP转染加顺铂组（B组），顺铂组（C组）和正常对照组（D组），顺铂作用浓度为2ug/ml；NSt3作用48h后，行各组SGC计数，并通过ImageJ软件测量各组SGC轴突长度。结果成功分离并培养新生大鼠SGC。激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察到腺病毒载体可安全高效转染体外培养的SGC。Ad—bcl-2转染3d后，Western Blot检测有外源性人bcl-2基因的高效表达，而Ad—GFP转染组和顺铂组未检测到表达。顺铂作用后。A、B、C组部分SGC细胞突起变短、萎缩，胞体缩小、变圆，甚至浮起。A组SGC数目明显多于B组和C组（P值均〈0．01），但少于D组（P〈0．05）；A组SGC轴突长度明显长于B组和C组，但短于D组（P值均〈0．01）。结论腺病毒能够安全高效地转染体外培养的新生大鼠SGC。bcl-2蛋白过表达对顺铂所致SGC损伤有一定的拮抗作用。
- 王国鹏谢静刘英鹏罗凌惠鲁海涛董继华龚树生
- 关键词：腺病毒科转染螺旋神经节基因BCL-2顺铂
- 重组腺病毒构建及转染培养耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞的实验研究
- 2007年
- 目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒,观察GFP基因在体外培养的新生大鼠耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞的表达。方法通过细菌内同源重组方法构建携带有绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP),观察重组腺病毒转染培养的新生大鼠耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞后,不同时间内绿色荧光蛋白基因的表达情况、表达部位及病毒对培养耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞的影响。结果构建的重组腺病毒经酶切电泳鉴定正确;荧光显微镜下观察腺病毒转染体外培养的新生大鼠耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞后,12 h即开始表达绿色荧光蛋白基因,24 h达到高峰,表达时间可持续1周;倒置显微镜观察转染后的Corti器和螺旋神经节细胞形态结构及生长无明显改变。结论本实验成功构建了携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒,通过该方法构建的腺病毒可以介导绿色荧光蛋白(GFP)基因在体外培养的新生大鼠耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞中表达,但腺病毒本身对体外培养的耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞生长无明显影响,为通过腺病毒进行内耳基因治疗提供了理论依据。
- 刘英鹏龚树生王国鹏李泽文王建亭
- 关键词：腺病毒载体基因转移CORTI器螺旋神经节
- 靶向蛋白激酶CK2α的siRNA抑制喉癌细胞侵袭的实验研究
- 2006年
- 目的构建靶向蛋白激酶CK2α的siRNA真核表达载体,探讨其对人喉癌细胞系HEp-2侵袭的抑制作用。方法采用基因重组技术,构建蛋白激酶CK2α靶向siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2,脂质体转染法转染HEp-2细胞。采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western Blot技术检测转染后HEp-2细胞蛋白激酶CK2αmRNA和蛋白表达,采用Boyden小室法检测转染后HEp-2细胞侵袭力的变化,采用免疫组织化学SP法检测转染后HEp-2细胞MMP2和TIMP2蛋白表达。结果成功构建蛋白激酶CK2α的siRNA真核表达载体psiRNA- hH1neo-CK2;与非特异转染组和空白组比较,转染psiRNA—hH1neo-CK2载体后,HEp-2细胞蛋白激酶CK2αmRNA和蛋白表达明显下降(P<0．01),HEp-2细胞侵袭力明显降低(P<0．01),MMP2／TIMP2比值明显增加(P<0．01)。结论蛋白激酶CK2α靶向siRNA表达载体可以抑制HEp-2细胞蛋白激酶CK2α的表达,抑制HEp-2细胞侵袭力。
- 王建亭龚树生刘英鹏陈广理
- 关键词：喉肿瘤蛋白激酶
- 缝隙连接Cx26和Cx30基因蛋白在哺乳动物耳蜗的细胞及亚细胞表达
- 本研究分为三部分：
第一部分、Cx26和Cx30在耳蜗侧壁中的表达和细胞分布研究
目的：研究缝隙连接Cx26和Cx30在耳蜗侧壁中的表达和细胞分布，同时比较Cx26和Cx30在不同哺乳动物耳蜗中表达的...
- 刘英鹏
- 关键词：细胞分布
- 细菌内同源重组制备重组腺病毒及其初步应用
- 2007年
- 目的通过细菌内同源重组方法构建重组腺病毒。方法质粒pAdTrack酶切线性化后,通过电转化方法转化AdEasier细菌,线性化的腺病毒重组质粒转染293包装细胞后获得重组腺病毒,观察腺病毒感染喉癌细胞Hep-2后的报告基因表达情况及病毒对培养细胞生长的影响。结果构建的重组腺病毒经酶切电泳鉴定正确;扩增的腺病毒转染培养的Hep-2细胞8 h后即开始表达报告基因,48 h后全部细胞均有报告基因表达;该重组的腺病毒对培养Hep-2细胞生长无明显影响。结论通过细菌内同源重组方法构建重组腺病毒,方法简单、成功率高、实验周期短。
- 刘英鹏田蕾王国鹏王建亭李泽文罗凌惠龚树生
- 关键词：腺病毒载体基因转移
- 血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子在喉癌细胞Hep-2中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growth factor,bFGF)在喉癌细胞Hep-2中的表达,及其与喉癌细胞生长、浸润及转移的关系。方法培养Hep-2和正常永生化表皮细胞HaCaT,提取总细胞RNA,应用逆转录聚合酶链反应检测VEGF mRNA和bFGF mRNA在Hep-2和HaCaT细胞中的表达。结果VEGF mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光度值为(0.839±0.063);VEGF mRNA在HaCaT细胞中低表达,平均相对积分吸光度值为(0.305±0.066),差异有极显著性意义(t=14.94,P<0.01)。bFGF mRNA在Hep-2细胞中高表达,平均相对积分吸光度值为(0.792±0.058);bFGF mRNA在HaCaT细胞中低表达,平均相对积分吸光度值为(0.296±0.049),差异有极显著性意义(t=17.54,P<0.01)。结论VEGF及bFGF与喉癌细胞的生长、浸润及转移有密切关系。
- 陈广理龚树生罗凌惠丁娟刘英鹏鄢开胜陈沛
- 关键词：血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子喉癌HEP-2细胞逆转录聚合酶链反应
- DRB对人喉癌Hep-2细胞系中PK-CK2 mRNA表达的影响及其与细胞凋亡的关系
- 2005年
- 目的探讨5,6-二氯-1--βD-呋喃核糖苯并咪唑(DRB)对人喉癌Hep-2细胞系中蛋白激酶CK2(PK-CK2)mRNA表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法不同浓度的DRB作用于人喉癌Hep-2细胞后,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hep-2细胞PK-CK2 mRNA表达水平的变化,采用流式细胞术检测Hep-2细胞凋亡率的变化。结果随着DRB浓度的增加或作用时间的延长,Hep-2细胞PK-CK2 mRNA表达水平呈下降趋势,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),流式细胞术检测二倍体峰前出现凋亡峰,5、10、20、40、80μmmol/L DRB与Hep-2细胞共育2h后的细胞凋亡率分别为0.68%、1.17%、7.25%、10.40%、22.66%。结论DRB可下调Hep-2细胞PK-CK2 mRNA表达水平,诱导细胞凋亡,这些可能是DRB抗癌作用的重要机制之一。
- 王建亭刘英鹏龚树生
- 关键词：喉肿瘤细胞凋亡
- 大鼠胚胎神经干细胞分离培养及基因感染研究被引量：3
- 2007年
- 目的建立基因工程化神经干细胞(neural stemcells,NSCs)以便为治疗感音神经性聋的研究创造条件。方法分离、培养胎鼠海马组织神经干细胞,并用巢蛋白(nestin)免疫荧光组织化学染色鉴定;诱导神经干细胞分化,用神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光组织化学染色鉴定分化细胞。通过细菌内同源重组方法构建携带有报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组腺病毒(Ad-GFP),并将其感染神经干细胞。结果①获得了大量未分化、呈巢状悬浮生长的神经干细胞团,并能分化为神经元和神经胶质细胞,且经传代培养10代后仍具干细胞特性;②97%以上的神经干细胞能被腺病毒感染;③被腺病毒感染的神经干细胞分化为神经元和神经胶质细胞后仍可有效表达GFP报告基因。结论本实验成功构建了携带GFP基因的重组腺病毒。从胚鼠海马组织分离、培养的细胞具有自我更新能力和多潜能分化能力,为中枢神经系统的干细胞,经基因工程化及传代后,仍具干细胞特性,可以作为细胞移植治疗感音神经性聋试验研究的供体细胞。
- 付勇龚树生刘英鹏薛秋红
- 关键词：神经干细胞细胞培养重组腺病毒
- 一种采用富氧燃烧技术的热解气化垃圾焚烧炉
- 本发明公开了一种采用富氧燃烧技术的热解气化垃圾焚烧炉，包括氧气制备单元、氧气注入单元和焚烧炉主体单元；氧气注入单元，与所述氧气制备单元和焚烧炉主体单元连接，其包括增压风机、关断阀和两氧气流量控制装置，每个氧气流量控制装置...
- 张世红廖新杰潘浩刘英鹏邵敬爱王贤华杨海平陈汉平
- 文献传递
