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p50PIK基因重组腺病毒的构建及对Hela细胞的影响: 2011年; 目的构建携带P50基因的重组腺病毒载体，观察其感染宫颈癌Hela细胞后对p-AKT（Thr308）的影响。方法以PcDNA3．1-p50PIK质粒为模板，构建带有p50PIK基因的重组腺病毒质粒Ad-p50PIK—GFP，酶切鉴定后经PacI线性化后转染HEK293包装细胞，观察细胞内绿色荧光蛋白（GFP）表达情况，并进行3轮扩增，收获带有目的片段的腺病毒。将重组腺病毒Ad．p50PIK—GFP感染Hela细胞并通过Western blot技术检测其对p-AKT的影响。结果将Ad．p50PIK-GFP经XhoI和KpnI双酶切鉴定和琼脂糖电泳，在1400bp附近有目的条带，送测序结果与GeneBank报道的序列完全一致，表明重组腺病毒Ad—p50PIK—GFP构建成功；然后将其转染HEK293细胞，绿色荧光表明Ad—p50PIK-GFP在HEK293包装细胞中成功表达；用SDS—PAGE电泳方法检测p50对Akt磷酸化的影响，结果表明高表达蛋白p50明显促进AKT的磷酸化（Thr308）。结论成功构建重组腺病毒Ad—p50PIK，p50在宫颈癌Hela细胞株中的过表达可使p-AKT表达升高。; 李进曹小年陈成杨锐胡俊波王晶; 关键词：重组腺病毒 HELA细胞 P-AKT

hSav1在结直肠癌组织中的表达及其意义: 2014年; hSavl（human Salvadorl）是Salvador在人类的同源蛋白,参与了细胞内的许多事件,近年来其在肿瘤发生发展中的作用引起研究者的关注.本研究应用Realtime-PCR、Western blot及免疫组织化学的方法检测hSavl在结直肠癌组织中的表达情况,并探讨其与结直肠癌临床病理特征之间的关系.; 杨锐李小兰王桂华邹声泉胡俊波; 关键词：直肠癌组织肿瘤发生发展临床病理特征同源蛋白 BLOT 结直肠癌

5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂对SW480细胞成瘤性及其Galectin-3表达的影响被引量：3: 2011年; 目的探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合奥沙利铂对SW480细胞成瘤性及其对肿瘤中Galectin-3(半乳糖凝集素-3)表达的影响。方法以人结肠癌SW480细胞建立裸鼠移植瘤模型,实验分5-Fu组,奥沙利铂组,5-Fu+奥沙利铂组和注射等体积生理盐水的对照组。采用免疫组织化学方法检测移植瘤中Galectin-3的表达,以图像信号采集与分析系统进行图像扫描分析。结果 5-Fu组、奥沙利铂组和5-Fu+奥沙利铂组抑瘤率分别为30.53%、34.15%和67.22%;免疫组化显示给药组肿瘤组织中Galectin-3表达明显减弱,Galectin-3在联合用药组肿瘤组织中表达(28.875±7.491)较对照组(281.438±45.639)和单独用药组(157.644±33.721,150.682±25.539)明显减弱,图像灰度值统计分析显示差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 5-Fu和奥沙利铂可抑制肿瘤细胞生长,二者联用抑瘤作用增强。肿瘤的生长体积与Galectin-3的表达具有同向性,提示两者之间可能存在直接或间接的联系。; 支国俊邹游刘韦成杨锐李小兰陶德定龚建平胡俊波严群; 关键词：5-氟尿嘧啶奥沙利铂 SW480细胞半乳糖凝集素-3

地西他滨对人胆管癌CCLP1细胞增殖的影响被引量：1: 2013年; 目的探讨地西他滨（DAC）对人胆管癌CCLP1细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞生长抑制率；应用流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡发生情况；荧光显微镜观察经DAC作用后细胞的自噬现象。体内试验采用裸鼠CCLP1细胞皮下种植瘤模型，观察DAC对瘤体生长的影响。结果DAC对人胆管癌CCLP1细胞的生长抑制作用呈剂量和时间依赖性（P〈0．05）。流式细胞术检测显示，随着药物浓度的增加，CCLP1细胞的细胞周期呈现明显的G2／M阻滞，且凋亡细胞明显增多。荧光显微镜下观察到，经250μmol／LDAC作用CCLP1细胞后，有明显的自噬现象发生。体内试验证明：当DAC腹腔注射剂量为0．8mg／kg时，每周给药6次，总给药时间为2周，对裸鼠CCLP1细胞皮下移植瘤的生长有明显的抑制作用。结论体内、外实验证明，DAC对胆管癌的生长有明显的抑制作用。; 王兵杨锐李红波胡走肖吴越周顺长邹声泉; 关键词：地西他滨胆管肿瘤细胞增殖肿瘤移植

吉西他滨联合奥沙利铂对胆管癌疗效的Meta分析: 2014年; 目的分析吉西他滨＋奥沙利铂治疗进展期胆管癌（BTC）的效果.方法联合应用PubMed、Medline、Embase和谷歌学术搜索,搜索词条为：吉西他滨、奥沙利铂、胆管癌、胆道、胆囊、胆管.凡是应用吉西他滨＋奥沙利铂治疗进展期（不能切除或者转移的）BTC、属于随机对照临床试验的研究均纳入研究范畴.治疗结果的分析包括反应率（RR）,总生存率（OS）,无进展生存时间（PFS）.合并比值比（ORs）、中位生存期的差异以及95%可信区间（CIs）用于治疗结果的判断.结果最初有47篇文献纳入研究,最终三个开放的随机对照试验（两个Ⅱ期,一个Ⅲ期）符合标准并进行Meta分析.其中两个研究比较吉西他滨＋奥沙利铂与单用吉西他滨的效果,另一个研究对吉西他滨＋奥沙利铂或氟尿嘧啶-亚叶酸作比较.研究中纳入的患者总数从54～410例.分析显示联合应用吉西他滨和奥沙利铂的患者可以获得更好的临床效果.RR：OR=2.639,95% CI=1.210～5.757,Z=2.439,P=0.015;中位生存期差异（OS）=3.822个月,95% CI=1.798～5.845个月,Z=3.702,P＆lt;0.001;无进展生存差异（PFS）=3.268个月,95% CI=1.996～4.541个月,Z=5.035,P＆lt;0.001.结论在进展期BTC中,吉西他滨＋奥沙利铂的联合化疗较其他的化疗方案可以提高存活率.; 杨锐李红波王兵邹声泉; 关键词：胆管癌有效性吉西他滨奥沙利铂 META分析

IL-1β、IL-10在大鼠溃疡性结肠炎模型中的表达被引量：3: 2010年; 目的探讨促炎因子IL-1β和抑炎细胞因子IL-10在三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的溃疡性结肠炎(ul-cerative colitis,UC)大鼠模型结肠组织中的表达,探讨其在该模型中的作用和意义。方法将64只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组与UC模型组,每组32只。正常对照组不造模,UC模型组用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溶液灌肠诱导UC模型。观察2组实验大鼠第1、3、7、14天体质量变化、组织病理学改变及结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性。实时荧光定量PCR检测2组大鼠结肠组织细胞因子IL-1β、IL-10 mRNA的表达。结果与正常对照组相比,UC模型组第1、3、7、14天大鼠结肠组织学评分均明显升高(P<0.01),结肠组织MPO活性明显增高(P<0.01),IL-1β,IL-10 mRNA相对于GAPDH的表达量均明显增高(P<0.01)。结论促炎细胞因子IL-1β与抑炎细胞因子IL-10的失衡在TNBS诱导的UC模型大鼠发病中起重要作用。; 李进杨锐邓豫蔡少鑫曹小年李小兰陶德定胡俊波; 关键词：溃疡性结肠炎白细胞介素-1Β 白细胞介素-10 三硝基苯磺酸

穿膜融合多肽TAT-N24对结肠癌细胞增殖的影响被引量：6: 2010年; 目的观察穿膜融合多肽TAT-24对结肠癌细胞增殖的影响。方法观察TAT-N24对HT29细胞内蛋白表达的影响,流式细胞仪检测HT29细胞周期进程,应用BrdU掺入的方法检测TAT-N24对细胞DNA合成的影响,证实TAT-N24的抗肿瘤作用。结果 Western blot结果显示TAT-N24能够有效进入细胞内,TAT-N24处理的细胞内Rb蛋白的表达无显著变化,但可见磷酸化Rb蛋白表达量显著降低。BrdU/PI双掺入法检测细胞DNA合成结果显示,对照组BrdU阳性细胞数占总细胞的比例为(52.2±1.88)%,而TAT-N24组BrdU阳性细胞数占总细胞的比例为(29.9±2.14)%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组HT29细胞中G0/G1期细胞为(55.27±2.48)%,S期和G2/M期细胞数分别为(26.97±0.94)%和(17.76±1.77)%,而TAT-N24组HT29细胞G0/G1期细胞减少到(65.10±1.79)%,S期和G2/M期细胞分别为(18.49±0.68)%和(16.40±1.51)%,较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论融合多肽TAT-24能有效抑制Rb蛋白磷酸化,阻滞结肠癌HT29细胞周期进程,抑制细胞DNA合成。; 王桂华邓豫杨锐曹小年来森艳罗学来李小兰肖徽陶德定童宜欣胡俊波龚建平; 关键词：肿瘤结肠癌 BRDU 磷脂酰肌醇3-激酶

雷公藤甲素及其脂质体对血管生成的抑制作用被引量：10: 2014年; 目的比较雷公藤甲素(TP)及其脂质体(TP-LP)在体内外对血管生成的作用,评价脂质体作为TP纳米载体的可行性。方法采用MTT法测定TP和TP-LP对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响;采用划痕实验、侵袭实验、小管形成实验比较二者对HUVECs迁移、侵袭及成管能力的影响;在体内采用基质胶栓实验比较二者对血管生成的作用;免疫组化检测二者对血管内皮细胞生长因子(VEGF)及血管内皮细胞粘附分子(CD31)的影响。结果 TP和TPLP均时间、剂量依赖性地抑制HUVECs的增殖,TP-LP的抑制作用较TP强(P<0.05);50nmol/L的TP和TP-LP作用24h后,对照组、TP组和TP-LP组的细胞迁移距离分别为(246.33±15.82)、(177.00±14.73)、(111.67±17.56)μm,TP和TP-LP均可抑制HUVECs细胞的迁移(均P<0.05),TP-LP的作用较TP强(P<0.05);同对照组比较,TP和TP-LP均可抑制HUVECs的侵袭(均P<0.05),TP组和TP-LP组侵袭细胞数分别为(30.45±2.99)、(11.60±1.53),TP-LP的作用强于TP(P<0.01)。对照组、TP组和TP-LP组小管数目分别为(54.59±3.75)、(34.51±3.62)、(13.93±2.53),TP和TP-LP可以抑制HUVECs小管的生成(均P<0.05),TP-LP的作用强于TP(P<0.05)。体内基质胶栓实验显示TP-LP抑制血管的形成能力更强(P<0.01);免疫组化检测的结果显示TP和TP-LP通过抑制VEGF的表达而影响肿瘤新生血管的生成,CD31表达下降。结论 TP、TP-LP在体外均能明显抑制HUVECs的增殖、迁移、侵袭和小管形成,在体内均能通过抑制VEGF的表达从而抑制肿瘤新生血管的生成,TP-LP的作用较TP更强大,有望被开发为一种新的抗肿瘤血管生成制剂。; 杨锐李红波王兵邹声泉; 关键词：雷公藤甲素脂质体细胞增殖血管生成

p55PIK上调血管内皮生长因子促进结肠癌细胞血管的生成的作用被引量：3: 2014年; 目的观察p55PIK对结肠癌细胞（HT29）的血管内皮生长因子（VEGF）分泌及其对成瘤的影响,探讨肿瘤中p55PIK与血管生成之间的关系.方法以携带有p55PIK基因的腺病毒感染肿瘤细胞,用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测空白组以及感染空腺病毒和p55PIK腺病毒的肿瘤细胞中VEGF mRNA水平表达差异;用Western blot的方法检测肿瘤细胞VEGF蛋白水平的表达差异;并以感染空腺病毒和感染p55PIK腺病毒的HT29细胞种植裸鼠,观察p55PIK对成瘤性的影响;以移植瘤行免疫组织化学染色,比较p55PIK、VEGF和CD31在组织中表达水平的差异.结果细胞内过表达p55PIK后,VEGF mRNA表达水平较对照组和空腺病毒组增高2.7倍（P＜0.01）,蛋白表达水平也明显增高（P＜0.01）;成瘤性明显增强,移植瘤的生长速度增快,3组肿瘤重量分别为（0.057 ±0.040）、（0.060±0.030）、（0.225 ±0.070） g（P ＜0.01）.过表达p55PIK组的肿瘤组织中VEGF和CD31的表达水平明显增高.结论过表达p55PIK的肿瘤细胞成瘤性的增强可能是通过提高VEGF的表达,从而促进肿瘤血管的生成来实现的.; 杨锐王桂华李小兰邹声泉胡俊波; 关键词：血管内皮生长因子血管生成结肠肿瘤

反式转录激活因子-氨基端24个氨基酸穿膜融合多肽对结直肠癌血管形成的影响被引量：1: 2014年; 目的观察反式转录激活因子-氨基端24个氨基酸（TAT-N24）穿膜融合多肽对结直肠癌血管形成的影响.方法对结直肠癌细胞Lovo过表达p55PIK和/或同时给予p55PIK的特异性抑制剂TAT-N24后,通过Western blot法检测乏氧诱导因子-1α的表达,通过双荧光素酶报告系统检测血管内皮生长因子-A的启动子活性,并用酶联免疫吸附试验检测其蛋白分泌,最后通过体外血管形成实验检测p55PIK及TAT-N24对结直肠癌血管形成的影响.结果过表达p55PIK促进结直肠癌细胞株Lovo中乏氧诱导因子-1α的表达,进而增强血管内皮生长因子-A的启动子活性（p55PIK组比对照组,常氧：9.1±1.1比1.0±0.2,乏氧：14.5 ±1.6比1.0±0.3）,并且促进其在培养基上清中的分泌[p55PIK组比对照组,常氧：（412±23） mg/L比（150±18） mg/L,乏氧：（859±203） mg/L比（233±12） mg/L],而且其条件培养基可促进脐静脉内皮细胞形成血管,而TAT-N24可拮抗上述过程,抑制结直肠癌的血管形成.结论 p55PIK可促进结直肠癌的血管形成,而TAT-N24作为其特异性抑制剂,可抑制结直肠癌的血管形成.; 杨熹李海杰王桂华陈成杨锐龚建平胡俊波; 关键词：结直肠癌血管形成血管内皮生长因子

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杨锐

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