郑金海
- 作品数：7 被引量：8H指数：1
- 供职机构：新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 温州市瓯海地区汉坦病毒的分子流行病学调查
- 2009年
- 目的研究温州市瓯海地区宿主携带汉坦病毒的状况和型别。方法经间接免疫荧光（IFA）试验初筛为阳性的鼠肺标本，用巢式RT—PCR扩增阳性标本中汉坦病毒的S基因片段上的目的核苷酸序列（620～999nt），并以ClustalX（1．831和Phylip3．63构建系统进化树进行分型和分子进化分析。结果温州市瓯海地区共捕获啮齿动物148只，5份鼠肺标本中汉坦病毒抗原阳性，其中褐家鼠3只，黄胸鼠2只，病毒携带率为3．38％，与汉坦病毒分型标准比较，均属于SEOV型。结论瓯海地区褐家鼠和黄胸鼠携带S1和S3亚型汉坦病毒，显示出汉坦病毒的多样性。
- 段正秀谭有将熊海萍陈化新张永振郑金海
- 关键词：汉坦病毒系统发生分析基因分型
- 捻转血矛线虫Hc38保守结构域所在基因片段的真核表达载体构建被引量：1
- 2009年
- 根据捻转血矛线虫Hc38基因产物(登录号AY749124)保守结构域所在核酸序列设计1对引物,该引物包含Kozak序列、HindⅢ酶切位点、XbaⅠ酶切位点。以含有捻转血矛线虫Hc38基因保守结构域片段的pMD19-T为模板,经PCR扩增获得Hc38基因保守结构域片段,用HindⅢ、XbaⅠ双酶切该片段,回收后将此基因片段克隆至相同酶切回收后的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,获得重组质粒pcD-NA3.1-Hc38。经酶切分析、序列测定和PCR鉴定,证实了重组质粒的正确性。
- 郑金海段正秀荣光薄新文李娜何立雄
- 关键词：捻转血矛线虫真核表达载体KOZAK序列
- 捻转血矛线虫虫卵的大量分离纯化被引量：5
- 2008年
- 笔者采用虫体取卵和孵化后感染性幼虫直接在培养瓶瓶盖内收集的方法,获得了大量纯净单一的感染性幼虫,并且感染绵羊成功。再对感染绵羊直肠采粪收集虫卵,就可收集到大量纯种单一虫卵,进行三期幼虫的大量孵化。该试验解决了在寄生性线虫分子生物学研究中需要大量单一虫种的纯化分离问题。
- 荣光赵军明郑金海王新华薄新文钟发刚罗盘琪任耀军
- 关键词：捻转血矛线虫虫卵分离纯化
- RNAi技术及其在寄生虫研究中的应用被引量：1
- 2008年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种新兴的基因阻断技术,它通过双链RNA分子的介导,特异性降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默,该技术自1998年首次报道以来已取得了重大研究进展。本文就RNAi的作用机制、特点及其在寄生虫基因功能研究、寄生虫疫苗及抗寄生虫药物有效靶点的筛选等方面作一综述。
- 荣光赵军明王新华薄新文郑金海陈护亚
- 关键词：RNA干扰基因沉默寄生虫
- 捻转血矛线虫Hc38基因保守结构域所在片段的克隆及原核表达
- 2009年
- 参照捻转血矛线虫Hc38基因核酸序列(登录号:AY749124)的保守结构域设计1对引物,采用RT-PCR方法从绵羊捻转血矛线虫雌性成虫中扩增出约429 bp的cDNA序列,将其克隆到pMD19-T中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。与AY749124序列同源性为99%。进一步将克隆基因与原核表达载体pPRO EX HTa构建重组表达载体,经IPTG诱导,能在DH5a细菌中表达了相对分子质量约17 000的融合蛋白。经Western blot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与捻转血矛线虫阳性血清发生特异性反应。
- 赵军明荣光郑金海王新华薄新文刘志强黄新罗盘棋任耀军
- 关键词：捻转血矛线虫基因克隆原核表达
- 捻转血矛线虫Hc38基因真核载体构建及绵羊免疫保护性试验
- 捻转血矛线虫是毛圆科血矛属消化道线虫，感染牛、绵羊、山羊及其他反刍动物，引起动物贫血及贫血综合症，严重的可致动物大批死亡，特别是羔羊，给畜牧业生产带来巨大经济损失。目前，主要采用化学药物治疗该病，但药物残留严重，加之抗药...
- 郑金海
- 关键词：家畜养殖寄生虫病捻转血矛线虫基因表达
- 文献传递
- 捻转血矛线虫Hc38基因DNA疫苗对绵羊免疫保护性效果评价被引量：1
- 2009年
- 为了研究基因疫苗对绵羊的免疫保护效果,本研究构建了捻转血矛线虫(H.contortus)Hc38基因DNA疫苗。将H.contortus Hc38基因保守结构域克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,免疫鼠8d后用RT-PCR检测到该疫苗在鼠肌肉组织中进行了转录。将纯化的DNA疫苗免疫绵羊后,用western blot和ELISA方法检测疫苗在绵羊体内的翻译和诱导IgG的产生。二免后2周用10000条H.contortus第3期幼虫攻击实验动物,检测绵羊粪便虫卵排出、成虫数量等免疫保护性指标。该H.contortus Hc38 DNA疫苗与对照组比较,免疫组绵羊排出虫卵减少66.6%、成虫减少33.1%。特别值得注意的是免疫组的静脉注射方式产生抗体最高,相应羊的虫卵数和成虫数低。本实验证明Hc38基因DNA疫苗对绵羊虫卵及成虫发育具有明显的抑制作用。
- 郑金海段正秀赵军明薄新文钟发刚张慧
- 关键词：绵羊捻转血矛线虫PCDNA3.1DNA疫苗
