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毕华: 作品数：107 被引量：161H指数：7; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划科技人员服务企业行动项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程理学更多>>

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重组人脑利钠肽活性参考品制备及动脉条法生物学活性标定被引量：2: 2012年; 目的:建立重组人脑利钠肽(rhBNP)活性参考品,用于rhBNP生物学活性测定。方法:优化冻干配方,分装冻干rhBNP原液并检测分装精度,拉丝封口后,按中国药典2010年版三部方法,检测无菌检查、pH、水分、外观。用兔动脉条法由2个实验室协作标定其生物学活性。用热加速法对该批rhBNP参考品的稳定性做了初步评价。结果:分装冻干,拉丝封口等工艺制得rhBNP参考品458支,经测定分装精度小于1%,水分为0.6%,生物学活性经2个实验室共计10次标定,均值为107 RU.支-1,95%的可信范围为97～118 RU.支-1,经热动力学分析,该rhBNP参考品活性降低1%,需要10年以上的时间,说明稳定性较好,其他检测项目均符合标准品一般制备要求。结论:冻干人脑利钠肽活性参考品符合中国药典关于标准品制备要求,可用于rhBNP生物学活性测定。; 史新昌丁有学毕华李响刘兰韩春梅饶春明; 关键词：重组人脑利钠肽

重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质控方法和质量标准的建立被引量：3: 2014年; 目的建立注射用重组葡激酶(staphylokinase,SAK)-水蛭素(hirudin,HV)融合蛋白(SFH)的质控方法和质量标准。方法采用纤维蛋白平板溶圈(fibrin agarose plate assay,FAPA)法测定SFH的溶栓比活性,纤维蛋白凝块溶解法测定SFH的抗凝比活性;还原型SDS-PAGE测定SFH的相对分子质量;非还原SDS-PAGE和反相高效液相色谱(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定SFH的纯度;胰酶裂解后采用RP-HPLC法分析SFH的肽图;其他各项指标的检测按《中国药典》三部(2010版)规定进行。结果用建立的方法对SFH原液和成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求。结论建立的质控方法和质量标准能够保证产品安全、有效、质量可控,可用于注射用SFH产品的常规检定。; 丁有学韩春梅李响毕华史新昌饶春明

罗米司亭中聚山梨酯80含量高效液相色谱-电喷雾检测器检测方法的建立、验证及初步应用: 2024年; 目的建立重组蛋白药物罗米司亭中聚山梨酯80含量高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)-电雾式检测器(charged aerosol detector,CAD)检测方法,并对方法进行验证及初步应用,以期为重组蛋白药物制剂的质量控制提供参考。方法通过对流动相的筛选以及方法洗脱梯度和CAD参数的优化建立聚山梨酯80含量的HPLC-CAD方法,并对方法的专属性、重复性、准确性进行验证,确定方法的检测限、定量限和线性范围。采用建立的方法检测2批次罗米司亭样品中的聚山梨酯80含量。结果方法优化后的色谱条件如下:色谱柱为Acclaim Surfactant Plus(150 mm×4.6 mm,3μm);流动相A为含0.1%甲酸的水溶液,流动相B为含0.1%甲酸的异丙醇;洗脱梯度为0 min 80%A,1.8 min 80%A,2.0 min 66.5%A,3.0 min 66.5%A,3.5 min 0%A,8.5 min 0%A,9.0 min 80%A,15.0 min 80%A;流速为0.6 mL/min;进样量为10μL;柱温为25℃;CAD雾化温度为50℃,幂律函数值(power function value,PFV)为1.25。该方法样品基质和空白溶液中无其他色谱峰干扰;检测低(10 mg/L)、中(50 mg/L)、高(80 mg/L)浓度聚山梨酯80峰面积的RSD分别为4.32%、1.97%和3.46%,平均加标回收率分别为95.7%、99.0%和98.9%;聚山梨酯80在浓度5.0~100.0 mg/L范围内具有良好的线性关系(R^(2)=1.0000),方法的检测限和定量限分别为1.0和2.0 mg/L。采用建立的方法检测2批次罗米司亭样品中聚山梨酯80含量分别为33.20和32.28 mg/L。结论建立的罗米司亭中聚山梨酯80含量HPLC-CAD检测方法灵敏度高,专属性、重复性、准确性良好,可用于重组蛋白药物质量控制过程中聚山梨酯80含量的检测。; 郭莹李响毕华裴德宁李学普秦玺陶磊史新昌杨靖清周勇; 关键词：高效液相色谱法聚山梨酯80

血管内皮生长因子抑制剂结合活性试验两种结果分析方法比较: 2019年; 目的:对血管内皮生长因子抑制剂(VEGF Trap)结合活性试验两种结果分析方法进行比较,以考察两者的差异。方法:采用固定剂量的VEGF与系列稀释的VEGF Trap处理之后,检测未结合的VEGF的量,分别以未结合的VEGF量对VEGF Trap浓度梯度和未结合的VEGF检测板的OD值对VEGF Trap浓度梯度进行四参数方程拟合,两种方法计算该产品的结合活性。结果:两种方法均满足试验有效性条件,且血管内皮生长因子抑制剂供试品和标准品的半数抑制浓度(IC50)均分别为3.68和3.6pmoL·L-1,供试品的结合活性为102%。结论:证明了两种分析方法得到的结果完全一致。为同类产品结合活性计算方法的选择提供借鉴。; 毕华李永红范文红陶磊裴德宁丁有学饶春明; 关键词：血管内皮生长因子抑制剂结合活性半数抑制浓度

CHO细胞DNA国家标准品的研制: 目的：建立CHO细胞DNA残留量定量测定用国家标准品。　　方法：使用QIAGEN Genomictip 500/G以及基因组DNA纯化试剂制备了CHO细胞基因组DNA作为标准品原料，通过紫外分光光度法和电泳进行纯度和含量...; 王兰高凯范文红毕华付志浩李永红饶春明; 关键词：国家标准品紫外分光光度法定量PCR法

恩度敏感细胞株的构建及其在恩度测活中的应用: 本发明公开了恩度敏感细胞株的构建及其在恩度测活中的应用，本发明提供了一种构建Endostatin敏感细胞株的方法、一种检测Endostatin活性的方法以及UTS2在构建Endostatin敏感细胞株中的应用。本发明提供...; 秦玺李山虎安怡方周勇裴德宁李响史新昌丁有学毕华于雷黄芳朱留强王军志

重组人源化兔抗VEGF单克隆抗体质控方法与质量标准研究被引量：7: 2012年; 目的:建立重组人源化兔抗VEGF单抗的质控方法和质量标准。方法:利用HUVEC细胞增殖抑制试验测定重组人源化兔抗VEGF单抗的生物学活性;SDS-PAGE和SEC-HPLC测定纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;实时定量PCR检测CHO宿主DNA残留量;采用ELISA法分别测定VEGF结合力、残留ProA含量和残留菌体蛋白含量;水平等电聚焦电泳法测定等电点;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人源化兔抗VEGF单抗的原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》、《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。; 毕华范文红韩春梅李响王兰丁有学陶磊裴德宁高凯饶春明; 关键词：生物学活性结合活性纯度分析

重组人干扰素-γ与参考品圆二色谱图对比分析: 目的:通过对比重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)供试品与 rhIFN-γ参考品和重组人干扰素-α2a(rhIFN-αL2a)参考品圆二色谱图形比较,进而验证他们的结构是否一致。方法:分别独立处理 rhIFN-γ供试品和 ...; 史新昌饶春明毕华裴德宁李永红王军志; 关键词：圆二色谱; 文献传递

重组链激酶活性测定中图片上溶酶圈直径测量方法: 目的：研究建立在图片上测量重组链激酶溶解圈直径的方法。方法：用自制circular_regression 软件测量了一次试验结果。通过测量标准图片上同心圆的直径来评价软件所得数据的准确性和线性。通过在不同人员，在不同天里...; 史新昌丁有学陶蕾毕华徐康为饶春明王军志; 关键词：重组链激酶

重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒GM-CSF的质量研究: 目的：研究建立肿瘤溶瘤基因治疗产品——重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒GM-CSF的检测方法与质控标准。方法：采用限制性内切酶酶切与PCR法结合，对重组病毒载体携带的GM-CSF基因、以及ICP 34.5、ICP6、ICP47...; 高凯付志浩陶磊毕华袁力勇李永红饶春明; 关键词：基因治疗

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