丁金凤
- 作品数：46 被引量：116H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院阜外心血管医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学建筑科学更多>>
- 肺动脉高压大鼠血浆肾素—血管紧张素、精氨酸加压素的改变
- 1992年
- 观察心外左向右分流(LRS)、低压性缺氧(HH)及分流附加低压性缺氧(SHH)所致肺动脉高压(PH)大鼠血浆肾素活性(RA)、血管紧张素Ⅰ(AⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AⅡ)浓度及AⅠ转变为AⅡ的比率和精氨酸加压素(AVP)的改变。结果LRS组及SHH大鼠RA呈升高趋势,但与对照组比较无显著差异(P>0.05);HH组无改变。LRS组AⅡ浓度显著高于对照组(P<0.05),AⅠ及AⅡ/AⅠ亦呈升高趋势,但未达显著差异(P>0.05);而HH及SHH组较LRS组降低,尤以HH组为著。LRS大鼠AVP显著升高(P<0.05);其他组也呈升高趋势,但未达统计学显著意义(P>0.05)。本文对体液因素在PH形成中的作用进行了分析。
- 郭建华吴学军郭加强任兵赵秀文丁金凤
- 关键词：肺性高血压精氨酸加压素肾素
- CD/TK单、双自杀基因重组腺病毒的制备及初步应用被引量：1
- 2002年
- 为制备表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase ,CD)和单纯疱疹病毒 1 胸苷激酶(herpessimplexvirustype 1thymidinekinase ,TK)双自杀基因的重组腺病毒载体 ,为再狭窄基因治疗的应用奠定基础 ,首先构建了含单、双自杀基因的腺病毒穿梭载体 ,细菌内同源重组法获得重组腺病毒质粒 .脂质体介导下转染 2 93细胞进行包装并大量扩增得到Ad TK、Ad CD、Ad TK CD、Ad LacZ 4种重组腺病毒 .氯化铯 (CsCl)梯度离心法纯化后利用报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)测定病毒滴度 ,可达 10 9pfu ml .PCR和Western印迹法对外源基因进行鉴定 ,证明单、双自杀基因均已整合入腺病毒基因组并表达 .重组腺病毒感染血管平滑肌细胞后 ,用MTT法比较了单、双自杀基因的杀伤作用 ,发现在感染复数≤ 2 0时 ,双自杀基因对细胞的抑制作用明显高于单基因 .成功地构建腺病毒双自杀基因共表达载体 ,为进一步的体内外实验奠定了基础 .
- 曹慧青赵勇孟宪敏赵秀文刘冬青丁金凤
- 关键词：双基因共表达自杀基因重组腺病毒
- 共表达胞嘧啶脱氨酶和胸苷激酶双自杀基因杀伤大鼠血管平滑肌细胞的机制研究被引量：2
- 2004年
- 目的 :研究共表达胞嘧啶脱氨酶 (CD)和胸苷激酶 (TK)双自杀基因对大鼠血管平滑肌细胞的杀伤机制。方法 :将表达CD和 (或 )TK的单、双自杀基因重组腺病毒载体分为 4组即Ad EF1α CD组、Ad CMV TK组、Ad EF1α CD CMV TK组和Ad lacZ组。感染原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,感染复数为 2 0。给予相应的前体药物 5 氟胞嘧啶和脱氧鸟苷后 ,用四甲基偶氮挫盐微量酶反应比色法 (MTT)和流式细胞术分析细胞死亡率。荧光染料Hoechst 3 3 3 42核染色观察凋亡细胞。琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞基因组脱氧核糖核酸 (DNA)的降解。结果 :血管平滑肌细胞可被重组腺病毒有效感染 ( 70 % )。MTT检测发现Ad EF1α CD CMV TK组双自杀基因及其前体药物 [5 氟胞嘧啶 ( 3 0 μg/ml)和脱氧鸟苷 ( 0 3 μg/ml) ]的细胞毒效应可达 91% ,高于Ad CMV TK组 ( 68% )和Ad EF1α CD组 ( 63 % )单自杀基因组。流式细胞仪分析Ad CMV TK组和Ad EF1α CD CMV TK组的杀伤作用是以细胞毒性坏死和凋亡为主。凋亡细胞荧光染色显示Ad EF1α CD CMV TK组和Ad CMV TK组细胞的凋亡率分别为 11 0 %和 12 0 % ,高于Ad CMV LacZ组 ( 1 2 % )和Ad EF1α CD组 ( 5 0 % )。琼脂糖凝胶电泳发现在Ad CMV TK组和Ad EF1α CD CMV TK组的基因组DNA可?
- 曹慧青孟宪敏刘冬青赵秀文丁金凤
- 关键词：双自杀基因血管平滑肌细胞胸苷激酶胞嘧啶脱氨酶凋亡细胞共表达
- 人尿激酶原cDNA在牛内皮细胞中的表达被引量：1
- 1996年
- 本实验将人的尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）ｃＤＮＡ导人体外培养的胎牛主动脉内皮细胞（ＥＣ），得到了表达该基因的转化细胞，以期覆盖血管内支架或小口径人工血管（＜４ｍｍ）等移植物达到防止血栓形成，提高移植物通畅率的目的。利用磷酸钙盐沉淀法将重组逆转录病毒载体ｐＮ２－ＣＭＶ·ＵＫ导人包装细胞ＰＡ３１７，获得了含有重组逆转录病毒（Ｐｒｏ－ＵＫＲＮＡ序列）的培养上滑。用机械刮取胎牛主动脉内腔面分离ＥＣ，进行常规培养。用重组逆转录病毒感染７代以内的牛ＥＣ，并经Ｇ４ｌ８筛选得到抗性细胞。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明ＰｒｏＵＫｃＤＮＡ已整合进ＥＣ基因组。以鼠抗人的Ｐｒｏ－ＵＫ单克隆抗体为一抗，作细胞免疫组化分析（Ｌ５Ａ８法），抗性细胞胞浆中出现阳性棕色颗粒，对照细胞为阴性结果。溶圈实验测得尿激酶原分泌量约为２３Ｕ／１０６细胞／２４小时。上述结果证明人Ｐｒｏ－ＵＫｃＤＮＡ已整合入牛ＥＣ基因组，表达产物具有免疫活性和纤溶酶原激活作用。
- 康宁玲赵秀文张少雄杨芳丁金凤
- 关键词：内皮细胞血管成形术再狭窄
- DNA解链分析法的原理及应用
- 1998年
- ＤＮＡ解链分析法是测定ＤＮＡ在碱性条件下变性解链后，双链ＤＮＡ含量的方法，它可用于判断ＤＮＡ的损伤程度。运用该技术测定了Ｈ２Ｏ２对ＬＬＣ－ＰＫ１细胞ＤＮＡ的损伤。结果：对照组双链ＤＮＡ的含量为８５．４％，Ｈ２Ｏ２组双链ＤＮＡ的含量为３４．８％；氯离子通道阻断剂ＮＰＰＢ、ＤＰＣ和甘氨酸，可使受损的ＤＮＡ得到保护，双链ＤＮＡ的含量分别是６６．０％、６０．３％、５７．８％。
- 孟宪敏刘玉清赵荣瑞赵荣瑞
- 关键词：DNA损伤过氧化氢
- 降钙素基因相关肽对加压激素的作用被引量：4
- 1990年
- 麻醉大鼠静脉一次注射2μg CGRP可使SBP及DBP分别降低26%和61%。心率增加11%。注射后5分钟,实验组大鼠的PRA、AⅡ、PAC和AVP的血浆浓度均显著高于对照组,而其垂体和下丘脑的AVP含量则低于正常(P<0.05),提示CGRP是一个很强的降压激素,在体内能刺激肾素、醛固酮和加压素的释放。
- 丁金凤罗勇刘冬青赵秀文张琪汤健
- 关键词：降钙素基因相关肽肾素加压素
- 应用酵母双杂交系统筛选与新基因nelin相互作用的蛋白质被引量：3
- 2005年
- 目的 通过筛选能够与新基因nelin的心肌特异表达产物相互作用的蛋白质从而揭示nelin的生物功能。方法 构建表达nelin阅读框全长的诱饵质粒并利用酵母双杂交系统筛选人心脏cDNA文库, 以寻找与nelin蛋白发生相互作用的蛋白质。并利用生物信息学方法对筛选得到的蛋白质进行功能结构域分析。结果 筛选得到3 个蛋白质分别为肌联蛋白 (Titin ) N2B亚型, 细丝蛋白 (Filamin ) C亚型即γ Filamin和α胰蛋白酶抑制物重链前体 (inter alphatrypsin inhibitor heavy chain precursor, ITIH)。对这3种蛋白的C末端结构域进行分析发现Titin和Filamin均含有免疫球蛋白样结构域 (Ig- like domain)。结论 实验结果揭示了新基因nelin很可能表达一个细胞骨架相关蛋白, 它可通过其蛋白质的C末端同Titin和Filamin的免疫球蛋白样结构域发生相互作用而参与细胞骨架网络的形成。
- 王震刘冬青王茵曹慧青丁金凤郭莲军屈伸孟宪敏
- 关键词：新基因蛋白质特异表达酵母双杂交系统相互作用
- 携带反义凝血酶受体和p21双基因共表达腺病毒伴随病毒载体的构建与包装
- 2002年
- 为探讨双基因共表达对再狭窄的防治作用 ,分别构建了含反义凝血酶受体 (ATR)或 /和 p2 1单、双基因及报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)的腺病毒伴随病毒 (AAV)载体 .上述载体经脂质体介导转染BHK 2 1细胞 ,G4 18筛选获得整合有外源基因的细胞株 .克隆形成过程中显示单、双基因转染后细胞增殖受到了不同程度的抑制 ,克隆形成速度减慢 ,细胞形态改变 ,且双基因的作用明显大于单基因 .以绿色荧光出现说明报告基因得到表达后 ,又以DNA印迹证实ATR和p2 1单、双基因已整合于细胞基因组中 ,并维持了凝血酶受体 (TR)基因的反义位置 .半定量RT PCR证实TR基因表达降低 ,p2 1基因表达升高 ,ATR和p2 1(AP)双基因得到了共表达 .以具有可提供复制和包装功能的重组单纯疱疹病毒rHSV rc/ΔU12分别感染载有不同基因的BHK细胞株 ,包装产生重组AAV (rAAV)病毒 ,并经点杂交法测定其滴度 (每毫升病毒液中所含病毒颗粒数 ) .rAAV/AP中ATR与 p2 1的病毒颗粒数分别为 1 0 2× 10 13 /ml和 1 0 8× 10 13 /ml,单基因rAAV/ATR的滴度为 6 5 4× 10 12 /ml,rAAV/P2 1为 1 0 6× 10 13 /ml,为进一步的体内外实验奠定了物质基础 .
- 孟宪敏吴小兵米立国伍志坚赵秀文刘冬青丁金凤
- 关键词：共表达再狭窄
- 764－3对血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：6
- 1996年
- 为寻找新型有效的ＡⅡ拮抗剂，本实验应用细胞计数、￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入、逆转录─聚合酶链反应及放射免疫实验方法，研究了中药单体７６４－３对卒中易感型自发性高血压大鼠（ＳＨＲｓｐ）及其对照（ＷＫＹ大鼠）主动脉平滑肌细胞（ＡｓＭＣ）增殖的影响及其作用机制。结果表明：７６４－３可显著抑制ＡＳＭＣ增殖，并有剂量依赖性。２０ｍｇ／Ｌ的７６４－３可极显著地抑制ＡＳＭＣ上ＡⅡ受体（ＡＴ＿１）的ｍＫＮＡ表达（ＳＨＲｓｐ下降７６．３％，ＷＫＹ大鼠下降６１．６％），并可降低ＳＨＲｓｐＡＳＭＣ内ＡⅡ含量（下降２０％）。推测７６４－３对ＡＳＭＣ增殖的抑制作用可能部分地是由于降低了ＡＴ＿１受体的基固表达引起。比较其对两种大鼠ＡＳＭＣ的抑制效率，发现它对ＳＨＲｓｐ的ＡＳＭＣ的作用更强。
- 张茜丁金凤张琪高润霖
- 关键词：RT-PCR血管平滑肌细胞增殖
- 心力衰竭大鼠心肌细胞增殖与心功能的关系研究被引量：9
- 2006年
- 目的证实成年心力衰竭大鼠心肌细胞存在分化增殖,探讨心肌细胞增殖程度与心功能的相关关系。方法成年SD雄性大鼠分为2组:心肌梗死组(14只,其中心功能代偿8只、失代偿6只),正常对照组(8只)。结扎左冠状动脉前降支形成心肌梗死,建立大鼠心力衰竭模型。1个月后,测血流动力学。心肌组织进行碘化丙啶和α-肌原节肌动蛋白抗体免疫荧光染色,观察心肌细胞有丝分裂相。用增殖细胞核抗原(PCNA)抗体进行免疫组化染色,观察PCNA阳性率。结果(1)成年大鼠左室心肌组织可观察到心肌细胞有丝分裂相。(2)心肌梗死后心功能代偿组PCNA阳性率明显高于对照组(7.2%±1.4%vs2.2%±0.8%,P<0.01),与心功能失代偿组比较差异无统计学意义(3.0%±1.3%vs2.2%±0.8%,P=0.648);心功能代偿组显著高于心功能失代偿组(P<0.01)。(3)心肌梗死组PCNA阳性率与±LVdp/dtmax相关系数分别为0.80(P<0.01)和-0.76(P<0.01)。结论(1)成年心力衰竭大鼠心脏存在心肌细胞增殖;(2)心肌梗死大鼠心肌细胞增殖程度与心脏收缩功能呈正性相关,与舒张功能呈负性相关。
- 李灏何建国刘清华邓大君吴振军郭文元丁金凤程显声
