魏海婷
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 鸡β防御素2在毕赤酵母中的组成型表达及其发酵条件的优化被引量：3
- 2015年
- 合成鸡β防御素2(AvBD2)成熟肽基因,构建重组质粒pGHK-AvBD2;将其电转化至毕赤酵母GS115;Tricine-SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物,琼脂扩散法测定产物的抑菌活性,并测定产物的溶血活性;响应面法优化接种量、装液量和发酵温度。Tricine-SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,在5.8ku位置出现目的蛋白质条带;抑菌活性检测表明,表达产物对粪肠球菌(ATCC29212)、大肠杆菌(CMCC44102)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和巴氏杆菌具有明显的抑菌活性;发酵产物在500mg/L时的溶血活性仅2.17%。由建立的响应面模型得到重组酵母最佳发酵条件为:接种量528mg/100mL、装液量8.43%、发酵温度27.8℃,产物蛋白浓度较优化前提高20%。本研究实现了AvBD2在毕赤酵母中的组成型表达,表达产物有较好的抗菌活性,为AvBD2作为新型饲料添加剂的应用奠定了基础。
- 魏海婷祁克宗王尔群吕小龙涂健周秀红刘红梅
- 关键词：巴斯德毕赤酵母组成型表达响应面法优化
- AvBD2在毕赤酵母中的组成型表达及其发酵条件优化
- 鸡β-防御素2(Chicken beta-defensins2，AvBD2)是一个富含半胱氨酸阳离子的小分子多肽，其成熟肽由39个氨基酸残基组成，在鸡的消化道组织中广泛表达，且抗菌谱广、抗菌活性较强，对鸡的先天性免疫和获...
- 魏海婷
- 关键词：Β-防御素毕赤酵母组成型表达活性分析发酵优化
- 鸡β-防御素2在大肠杆菌中的串联表达及抗菌活性分析被引量：4
- 2016年
- 利用基因串联技术表达鸡β-防御素2(AvBD2)重组蛋白,分析其生物结构活性以及蛋白表达量变化。构建了重组串联表达载体p ET-28a-AvBD2op-AvBD2,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达融合蛋白,经镍柱纯化后进行Western-blot检测、Tricine-SDS-PAGE分析和MALDI-TOF-MS质谱分析。结果显示,单表达工程菌和串联表达工程菌均在9500 u处有特异性条带;采用BCA法测得的单、串联表达工程菌纯化后的蛋白质量浓度分别为0.258和0.769 mg/m L;通过凝胶成像系统分析,单表达工程菌中目标蛋白的表达量约占上清总蛋白的10.3%,而串联表达的约占上清总蛋白的18.3%;MALDI-TOF-MS质谱分析结果表明,单、串联表达蛋白产物的分子质量分别为4 300、7 811 u;琼脂孔穴扩散抑菌法检测证明纯化蛋白对多种微生物具有不同的抗菌活性。
- 石水琴魏海婷祁克宗涂健吕小龙刘红梅薛挺周秀红
- 关键词：抑菌活性质谱分析
- 一种优化的β-防御素AvBD2基因及其应用
- 本发明公开了一种优化的AvBD2基因及其应用，所述AvBD2基因具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述AvBD2基因可转化至遗传工程菌种并进行蛋白表达，获得的重组表达蛋白与干酪乳杆菌混合，制成一种新型复合微生...
- 祁克宗涂健魏海婷石水琴张明吕小龙汪雪雁薛秀恒蒋雯袁林
- 文献传递
- 饲用干酪乳杆菌产抗菌肽的条件优化及其制剂的功能评价
- 畜禽产品中的药物残留和耐药性菌株的污染等问题，已经严重影响了其产品品质。抗菌肽因其抗菌谱广且高效、不易产生耐药性等优点，成为抗生素的理想替代品，是目前国内外研究的热点。而含抗菌肽的复合微生态制剂作为一种新型绿色饲料添加剂...
- 吴燕利魏海婷祁克宗涂健汪雪雁张明付瑞燕
- 关键词：抗菌肽复合微生态制剂抗菌效果
- 毕赤酵母组成型表达载体的构建及报告蛋白表达评价被引量：2
- 2013年
- 目的构建毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体,并表达报告蛋白葡萄球菌核酸酶(staphylococcus nuclease,SNase,NucA),以评价其表达外源蛋白的能力。方法从巴斯德毕赤酵母GS115基因组中PCR扩增毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter,pGAP)片段,克隆至载体pPIC9K中,构建组成型分泌表达载体pGHKα;从金黄色葡萄球菌基因组中PCR扩增编码报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的序列nucA,克隆至载体pGHKα中,构建重组表达质粒pGHKα-nucA,经SacⅠ和BglⅡ依次酶切线性化后,电转化至毕赤酵母GS115中;PCR及TB-D平板法筛选阳性重组酵母菌;Tricine-SDS-PAGE检测表达产物;琼脂扩散法检测重组酵母菌表达上清液的核酸酶活性。结果组成型分泌表达载体pGHKα经PCR鉴定,证明构建正确;重组表达质粒pGHKα-nucA经PCR及测序鉴定,证明nucA基因片段正确插入载体pGHKα中;重组酵母菌GS115/pGHKα-nucA经PCR及TB-D平板法检测证明构建成功;表达的目的蛋白相对分子质量约为17 000,表达量约占上清总蛋白的42%,且具有显著的核酸酶活性。结论成功构建了毕赤酵母组成型分泌表达载体pGHKα,其能正确表达报告蛋白NucA,且表达的蛋白能分泌到细胞外,表达效率高,为异源蛋白在毕赤酵母中的安全高效表达奠定了基础。
- 张永正温俊柳王燕魏海婷涂健祁克宗
- 关键词：毕赤酵母组成型表达葡萄球菌核酸酶
