王子竹
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 转蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体绵羊成纤维细胞株的筛选
- 蜘蛛丝是目前已知的一种集多种优良性能于一身的纤维，无论与其它天然材料还是人工合成的材料相比，蜘蛛丝都显示出了绝对的优势。但是由于蜘蛛的生活习性以及织网特点，无法通过人工进行大规模饲养繁殖，这些都给蜘蛛丝的大量获取造成了巨...
- 王子竹
- 文献传递
- 小鼠miR367逆转录病毒载体的构建与检测被引量：1
- 2013年
- 为了探明小鼠体细胞重编程过程中miR367的作用机制,试验构建小鼠miR367逆转录病毒载体。根据NCBI上小鼠miR367的相关序列,从小鼠基因组中扩增miR367并将其连接到pMD18-T载体,然后对重组质粒进行双酶切并回收目的片段。将目的片段与pMXs逆转录病毒载体连接,然后依次经过酶切、PCR筛选阳性克隆和测序,最终构建逆转录病毒载体miR367-pMXs;采用磷酸钙法将miR367-pMXs转染plat-E细胞,以包装逆转录病毒颗粒;用逆转录病毒颗粒侵染小鼠胚胎成纤维细胞,在侵染后的第5天,提取被侵染细胞的总RNA,逆转录后获得cDNA,并采用Q-PCR方法检测侵染细胞中的miR367表达量。结果表明,被逆转录病毒侵染后,小鼠胚胎成纤维细胞中miR367的相对表达量比侵染前约提高了170倍。上述结果表明,成功构建小鼠miR367的逆转录病毒载体,为开展体细胞重编程机制的相关研究提供依据。
- 张志人安铁洙王子竹朴善花王春生
- 关键词：细胞重编程MICRORNA逆转录病毒载体
- 带有绿色荧光蛋白外源DNA转染绵羊成纤维细胞的研究被引量：2
- 2009年
- 为了优化建立转染绵羊成纤维细胞系的外源基因转染体系,本研究利用带有绿色荧光蛋白（GFP）的外源基因,采用阳离子脂质体法,探讨了DNA用量、脂质体用量和转染时间等因素对转染绵羊成纤维细胞的影响。结果表明,在500μL转染培养基中成纤维细胞达到85%汇合时,添加由50μL DMEM中含有0.2μg DNA和50μL DMEM中含有2.0μL Lipo-fectamineTM2000的两种溶液混合构成的转染液并转染12 h,可获得最高的转染效率。当转染12 h后,用基础培养液培养至第24小时,细胞核周区出现强绿色荧光,而当转染后48～64 h观察时,细胞核周区的荧光强度明显弱,而远离核周区的胞质中的荧光强度增加。
- 安星兰王子竹张志崇曲丽威王春生朴善花安铁洙
- 关键词：质粒DNA转染脂质体法
- 绵羊c-Myc的克隆与序列分析被引量：1
- 2013年
- 参照GenBank上绵羊c-Myc序列设计引物,利用RT-PCR技术从60d左右胎羊生殖嵴总RNA中扩增得到绵羊c-Myc基因编码区序列,其为包括终止密码子在内的1320 bp,编码有439个氨基酸。同源性分析结果显示,绵羊c-Myc基因编码区与牛、猪、猫、人、大鼠、小鼠、鸡、爪蟾和斑马鱼的核苷酸序列同源性分别为98.0%、94.1%、92.4%、90.4%、86.9%、86.2%、75.2%、66.4%和63.9%,其氨基酸序列同源性分别为98.0%、94.0%、92.5%、90.3%、87.2%、86.5%、72.2%、65.5%和64.6%;生物信息学软件分析显示,绵羊c-Myc含有细胞核定位模体和HLH结构域。本研究为进一步研究c-Myc基因的功能及探讨其中绵羊体细胞重编程中的作用奠定了基础。
- 王子竹安铁洙李昊朴善花王春生
- 关键词：绵羊
- 绵羊Sox2基因逆转录病毒载体的构建与检测被引量：1
- 2012年
- 为建立利用内源诱导因子诱导绵羊体细胞为多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)的方法,对绵羊Sox2基因进行克隆,并与pMXs连接构建逆转录病毒载体,将构建的载体转染293GP细胞以获得假病毒上清,利用假病毒上清侵染绵羊胎儿成纤维细胞以检测细胞中的Sox2表达变化。PCR和酶切鉴定结果显示,成功构建了pMXs-Sox2重组质粒,该质粒具有转染293GP细胞的能力,所获得的假病毒上清侵染绵羊胎儿成纤维细胞后,可诱导细胞表达Sox2基因。本研究为开展绵羊iPS的相关研究提供依据。
- 赵健灵安铁洙张志人王子竹朴善花王春生
- 关键词：绵羊成纤维细胞逆转录病毒载体
- 转B2C/拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选
- 2016年
- 为了建立绵羊被毛特异表达蜘蛛拖丝蛋白基因的方法,研究利用前期工作获得的绵羊高硫角蛋白结合蛋白基因B2C启动子和人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体(2S),构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,进行线性化后,采用脂质体法转染进绵羊成纤维细胞并经G418筛选获得转基因阳性细胞,再进行PCR检测和冷冻复苏后进行生物学特性检测。结果表明:成功构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,将其整合入转基因阳性细胞的基因组中;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,其细胞形态仍保持成纤维细胞的梭形形态,且在续培养中呈现正常细胞相近的"S"型生长曲线。说明试验成功获得转pc DNA3.1-B2C-2S绵羊成纤维细胞株。
- 安铁洙李昊王春生王子竹宋红卫郑仁玖朴善花
- 关键词：转染细胞株
