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PSF不同功能片段融合蛋白的构建及其在细胞内的分布: 2010年; 目的将人类PSF基因的不同功能片段定向连入pEGFP—C2质粒，使PSF蛋白的各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达，观察其在HeLa细胞中的表达及定位。方法以重组质粒pEGFP—C2-PSF为模板，PCR法扩增出目的基因，将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP—C2上，构建重组质粒pEGFP—C2-PSF（I—V）。将构建成功的pEGFP—C2-PSF（I—V）质粒脂质体法转染HeLa细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位与分布。结果成功构建质粒pEGFP—C2-PSF（I～V），并在HeLa细胞中实现表达；Western印迹检测到融合蛋白GFP—PSF（I～V）；在激光共聚焦显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位。结论人类PSF基因的不同功能片段的重组质粒pEG—FP—C2-PSF（I～V）构建成功，可用于标记PSF蛋白的不同功能片段，为进一步研究PSF在信号转导中的作用机制以及其生物学功能奠定基础。; 张馨予东莉洁付晓杨振霞杨洁; 关键词：重组质粒融合蛋白

蛋白表达抑制稳定株MDA—MB-231-Tudor—SNI的筛选和鉴定: 2010年; 目的采用针对人类Tudor—SN基因的RNA干扰（RNAi）技术建立Tudor—SN表达抑制的乳腺癌MDA—MB-231稳定细胞株。方法利用脂质体转染方法将pGenesil—shRNA—hTudor—SNI质粒转染进入MDA—MB-231细胞，经G418筛选出稳定株，通过RT—PCR检测Tudor—SN的mRNA水平，再以Western印迹技术鉴定Tudor—SN蛋白表达情况并计算蛋白表达抑制率。结果与对照组相比，以G418筛选的MDA—MB-231-Tudor—SNI稳定株Tudor—SN的mRNA水平降低（P〈0．01，n=3），蛋白表达水平明显下调（P〈0．01，n=3），蛋白表达抑制率达78．12％。结论成功筛选并鉴定人类Tudor—SN蛋白表达抑制MDA—MB-231稳定株，有助于深入研究Tudor—SN蛋白在乳腺癌中的作用。; 王保亚刘欣高星杰朱梦瑜杨振霞赵秀娟杨洁; 关键词：RNA干扰细胞筛选

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杨振霞