闻伟刚 作品数:59 被引量:390 H指数:12 供职机构: 宁波出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 宁波出入境检验检疫局科研基金项目 国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 自动化与计算机技术 化学工程 更多>>
检测小麦线条花叶病毒的TaqMan MGB探针技术 被引量:9 2009年 为给小麦线条花叶病毒(Wheat streak mosaic virus,WSMV)的灵敏、稳定、快速检测提供依据,根据该病毒不同分离株外壳蛋白(Coat protein,CP)基因的保守序列,设计了特异性引物与Taq Man MGB荧光探针,建立了WSMV的实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,本研究设计的Taq Man MGB荧光探针对WSMV的检测具有很好的特异性,解决了因病毒不同分离物之间基因组变异较大、难以找到长片段保守序列来设计探针的困难。该方法无需任何PCR后处理,基因污染风险小。它与双抗体夹心酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高1 000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合于WSMV的快速检测。 闻伟刚 谭钟 张吉红 张颖关键词:TAQMAN 食品中转基因成分的检测方法研究 闻伟刚 崔俊霞 赵秀玲 朱世华 潘克强 张晓峰 1、项目来源与背景对转基因产品的检测是口岸检验检疫的工作内容,其目的是落实标识制度,保障公众的知情权与选择权;同时,也是防止转基因产品给环境与人类健康带来潜在的危害。目前,针对转基因产品成分的检测已建立有SN和GB标准,...关键词:关键词:食品 转基因成分 一步RT-PCR检测南芥菜花叶病毒方法的建立 被引量:22 2003年 本研究采用Trizol快速提取植物叶片总RNA ,通过GeneBank设计特异性引物 ,并利用一步RT PCR技术 ,最终建立了一套比较实用的检测ArMV的方法。该方法对于其它病毒的检测同样具有借鉴意义。 闻伟刚 赵秀玲 翁志平 孙立群关键词:南芥菜花叶病毒 总RNA提取 检疫 一种诱导植物过敏性反应的激发子、制备方法及其应用 本发明水稻黄单胞菌诱导植物过敏性反应和抗病性的激发子、制备方法及其应用,属于生物技术领域。利用超声波破碎细胞,从水稻黄单胞菌菌体中提取到一种能够诱导植物过敏性反应和抗病性的蛋白类激发子,并通过等电聚焦及柱层析技术对其进行... 王金生 闻伟刚 陆徐忠 宋从凤 吴健胜文献传递 玉米褪绿斑驳病毒实时荧光RT-PCR检测方法研究 被引量:11 2011年 玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)是我国对外公布的检疫性有害生物。本研究根据该病毒外壳蛋白基因的保守序列,设计得到特异性引物及Taqman荧光探针,建立了MCMV的实时荧光RT-PCR方法,并对其灵敏度与特异性进行了研究。该方法针对2个不同来源的毒株均能得到典型扩增曲线,而没有从小麦线条花叶病毒、玉米粗缩病毒和玉米矮花叶病毒的RNA得到扩增曲线,表明引物与荧光探针具有良好的特异性。针对玉米褪绿斑驳病毒RNA不同稀释度样品,实时荧光RT-PCR检测低限达到10-5稀释度,检测灵敏度要比普通RT-PCR高出100倍。因此,本研究建立的MCMV实时荧光方法具有特异性强、灵敏度高和快速有效的优点。 闻伟刚 张建成 崔俊霞 张颖百合无症病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量:3 2014年 百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)是侵染百合科植物的主要病毒之一。根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与荧光探针,建立了LSV的实时荧光RTPCR检测方法。利用该方法检测LSV的2个阳性样品,均能够得到典型扩增曲线,而在百合斑驳病毒、烟草环斑病毒、番茄环斑病毒等其他病毒阳性样品中没有典型的扩增曲线,表明了该方法的特异性。与普通RTPCR法相比,此方法灵敏度提高10倍。应用该方法,2012年6月至今,宁波出入境检验检疫局从荷兰进境的67批百合种球样品中检出53批百合无症病毒阳性,检出率为93%。 余澍琼 陈先锋 张吉红 于翠 张慧丽 闻伟刚关键词:百合无症病毒 百合科 赤羽病病毒套式RT-PCR检测方法的建立与初步应用 被引量:13 2010年 根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了3条特异性引物,建立了检测AKAV的套式RT-PCR方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增出AKAV的S基因片段,但从牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)等13种对照病毒中均不能扩增出目的条带。敏感性试验表明,套式RT-PCR能够扩增10-5稀释度的病毒RNA(核酸含量约1.18 ng/μL),比普通RT-PCR高出1 000倍。用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料,均未检测到阳性样本,但AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。研究结果表明,该方法灵敏、特异,为AKAV的检测提供了一个快速、有效的手段。 张吉红 黄素文 闻伟刚 李如松关键词:赤羽病病毒 套式 RT-PCR方法 流产胎儿 核酸含量 GENBANK 余姚市松木中伞滑刃属线虫种类调查 被引量:1 2010年 对宁波余姚市针叶林中的伞滑刃属线虫种类进行了调查,从采集的218份样本中,根据形态学特征共分离和鉴定出伞滑刃属线虫8种,松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)、莱奴尔夫伞滑刃线虫(B.rainulfi)、拟松材线虫(B.mucronatus)、林伞滑刃线虫(B.lini)、湖南伞滑刃线虫(B.hunanensis)、泰国伞滑刃线虫(B.thailandae)、中华伞滑刃线虫(B.sinensis)和程氏伞滑刃线虫(B.chengi)。其中,程氏伞滑刃仅在台湾的木质包装中报道。 郑炜 闻伟刚 戴晓燕关键词:伞滑刃属线虫 松木 基于TaqMan MGB探针的李痘病毒分子检测 被引量:3 2009年 李痘病毒(Plum pox virus,PPV)是我国对外检疫性有害生物。研究根据该病毒不同分离株外壳蛋白(coatprotein,CP)基因的保守序列,设计了特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan MGB分子探针的PPV实时荧光RT-PCR检测方法。方法特异性研究表明,针对PPV的2个主要流行株系M株系与D株系,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为14.96和18.22;而对于马铃薯Y病毒、李属坏死环斑病毒以及桃丛簇花叶病毒等其他毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比双抗体夹心酶联免疫检测方法的灵敏度提高1000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对PPV的检测。 闻伟刚 谭钟 张颖关键词:李痘病毒 TAQMAN 实时荧光RT-PCR 进口奶牛病毒性腹泻病毒快速检测鉴定 被引量:3 2007年 采用ELISA方法对3 073头奶牛全血进行牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)检测,结果发现编号a889的血样呈阳性反应,另外有3份血样(a126、a803、b1277)呈可疑反应;进一步的白细胞抽提物ELISA反应表明,a889血样呈阳性反应,其余呈阴性反应。对a889血样进行RT-PCR扩增,得到1条310 bp大小的特异性条带,与预期片段大小吻合;经序列同源性比较分析,确定a889血样中存在牛病毒性腹泻病毒。 赵秀玲 闻伟刚 黄素文 张吉红 杜华宏关键词:牛病毒性腹泻病毒 ELISA