郑喜邦
- 作品数：80 被引量：173H指数：6
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金国家自然科学基金广西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- CRISPR/Cas9 knock-in介导的输卵管特异性表达转基因鸡研究进展
- 2020年
- 利用动物生物反应器生产重组蛋白是一种具有应用前景的生物技术。鸡输卵管生物反应器是理想的动物生物反应器之一,其优点在于表达的外源蛋白能够分泌到蛋清中,可避免蛋白提取过程中对鸡本身造成伤害,同时蛋清成分简单,便于后期的纯化。目前利用慢病毒结合原始生殖细胞(PGCs)制备转基因鸡被认为是最可行的方法,但因外源基因随机整合且生殖系传递效率较低,使转基因鸡研究受到技术上的限制。而2013年问世的CRISPR/Cas9基因敲入(CRISPR/Cas9 knock-in)技术能够使外源基因精准定向插入基因组特异性位点,这对生产输卵管特异性转基因鸡具有重大意义。文章综述了鸡输卵管反应器的研究进展、CRISPR/Cas9 knock-in技术在输卵管特异性表达转基因鸡研究和鸡育种领域的应用现状,并指出了目前存在的问题和相应的解决办法。
- 刘灵康郑喜邦
- 关键词：转基因鸡原始生殖细胞基因敲入
- 小鼠IL-1β、TNF-α TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及脑心肌炎病毒感染小鼠的检测被引量：7
- 2011年
- 为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后促炎细胞因子的表达水平、从分子水平深入研究EMCV的致病机制,本研究分别建立了检测小鼠IL-1β、TNF-α和管家基因β-actin 的 TaqMan real-time PCR 检测方法。该方法标准曲线的相关系数均达到0.998以上,检出下限均达到10copies/μL质粒标准品,组内与组间的变异系数均小于2%。应用该方法对猪源 EMCV GXLC 株人工感染小鼠的脑、心、脾中IL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平进行检测,发现感染后第4dIL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平达到峰值,并且与小鼠发病死亡高峰存在明显的时间相关性。本研究所建立的TaqMan real-time PCR 检测方法为小鼠促炎细胞因子的检测及定量分析提供了技术手段。
- 陈宏备施开创李向涛郑敏郑喜邦李军
- 关键词：脑心肌炎病毒小鼠促炎细胞因子荧光定量RT-PCR
- 山羊Sox2基因克隆、原核表达和GST融合蛋白纯化被引量：4
- 2009年
- 本研究旨在克隆山羊Sox2基因,构建pGEX-Sox2原核表达重组质粒,从大肠杆菌中获得纯化的GST-Sox2融合蛋白。应用RT-PCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列,将其克隆到pMD18-T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体。重组质粒pGEX-Sox2转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳及Western blotting检测GST-Sox2融合蛋白表达,用谷胱甘肽Sepharose 4B介质分离纯化该融合蛋白。结果表明,山羊Sox2基因编码序列全长为960 bp;在优化的表达条件(1 mmol.L-1IPTG,22℃诱导16h)下,重组质粒(pGEX-Sox2)在大肠杆菌得到了高效表达;谷胱甘肽Sepharose 4B颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60 ku)。结论,本研究克隆了山羊Sox2基因,获得了纯化的GST-Sox2融合蛋白,为制备其多克隆抗体奠定了基础,为进一步研究山羊iPS细胞(Induced pluripotent stem cells)创造了条件。
- 郑喜邦杨照海刘平赵华卢晟盛卢克焕毕方方
- 关键词：原核表达蛋白纯化山羊
- 基于PI3K/Akt/NF-κB通路探讨槲皮素对奶牛蹄叶炎性损伤的干预机制
- 蹄叶炎(Laminitis)是蹄叶组织的弥漫性和无菌性炎症。亚临床型蹄叶炎在奶牛养殖中较为多发,严重降低奶牛产奶量、繁殖率和生活质量,对养殖业造成较大的经济损失。蹄叶炎发病期,表皮层的蹄叶角质形成细胞(Lamellar ...
- 翟长红师铭咸雷磊牟静吴文德李恭贺郑喜邦何宝祥丁嘉烽
- 关键词：奶牛槲皮素
- 基于CRISPR/Cas9介导的SSA修复途径检测核酸酶活性的研究
- CRISPR/Cas9系统是用于包括家畜在内的各种生物中进行基因组编辑的简单且强大的工具。然而,由于难以操作禽类的受精卵,该系统应用于家禽的报道甚少。本文报告了CRISPR/Cas9介导的单链退火(Single stra...
- 刘灵康郑喜邦
- 关键词：绿色荧光蛋白
- 氦氖激光麻醉对犬心肾功能的影响
- 2009年
- 杨照海赵华郑喜邦杨丰利
- 关键词：临床麻醉氦氖激光肾功能麻醉方法病畜
- 静松灵对绵羊的麻醉效果观察被引量：4
- 1989年
- 据报道,对牛能产生良好的镇静、镇痛和麻醉作用,具有用量小,使用简便,作用迅速等特点,但对绵羊的报道尚少,尤其对高原地区杂种绵羊的系统观察尚未见报道。为了探索静松灵对青海杂种绵羊的麻醉剂量,观察麻醉时的临床表现以及药物对机体的影响,在25只青海杂种绵羊中进行了试验,现报告如下。
- 宁顺章何富汉张才骏郑喜邦
- 关键词：静松灵绵羊麻醉效果
- 山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化被引量：1
- 2013年
- 旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a-Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的cDNA亚克隆至pET-30a载体,构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测确认,镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4融合蛋白。结果表明:(1)从山羊生殖脊中克隆了Klf4基因,其开放阅读框由1 434个核苷酸组成,编码478个氨基酸,而且该序列与绵羊的同源性最高,达到98.5%;(2)经过SignalP 4.0在线分析,Klf4的编码蛋白不存在信号肽;(3)经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,重组质粒pET30a-Klf4在大肠杆菌中得以表达;在变性条件下纯化,获得了His-Klf4融合蛋白。
- 辛桂瑜王丽霞叶新慧申魁魁符欣蕙李恭贺张明卢晟盛卢克焕郑喜邦
- 关键词：KLF4分子克隆原核表达蛋白纯化山羊
- 一种提高转基因效率的鸡胚背主动脉注射方法
- 本发明公开了一种提高转基因效率的鸡胚背主动脉注射方法，包括对发育2.5天的鸡胚进行壳外背主动脉注射腺相关病毒颗粒，注射后的鸡胚转入受体蛋(双黄蛋)壳中继续孵化出壳。本发明通过改良的背主动脉注射方法实现了对鸡胚背主动脉的壳...
- 郑喜邦李恭贺李非韦金鱼韦茏芹徐小明邢青波刘灵康韦宗海苏立燧唐燕飞覃俊江刘举祥黄文略王鹏霞肖艳宇许梦缘
- 2例犬子宫蓄脓的诊断及治疗
- 犬子宫蓄脓是宠物临床常见产科疾病之一。本文报道了2例罹患子宫蓄脓病犬的诊断及治疗过程,旨在为犬子宫蓄脓临床综合诊疗提供参考资料。患犬临床常表现为精神沉郁,烦渴多尿、呕吐腹泻、腹围膨大、阴门红肿、阴道有异臭味分泌物排出、体...
- 韦茏芹陈胜玖韦金鱼王鹏霞郑喜邦
