张友明
- 作品数：46 被引量：71H指数：4
- 供职机构：湖南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 多杀菌素基因重组的工程菌菌剂
- 本发明涉及多杀菌素基因重组的工程菌。发明采用Red/ET同源重组技术对多杀菌素(Spinosad)全基因进行修饰及插入功能性组件，同时与Bt4.0718菌株的crylAc基因重组，分别在发光杆菌(Photorhabdus...
- 夏立秋张友明丁学知孙运军莫湘涛黄璠罗朝辉王海龙
- 文献传递
- 复合微生物菌剂在长毛对虾标苗养殖过程中的应用研究被引量：1
- 2020年
- 复合微生物菌剂是一类有效的生物防治剂,在农业和水产养殖业中都起着重要的作用。本研究以长毛对虾(Penaeus penicillatus)标苗为试验对象,共分为4个组别,组1投喂无微生物菌剂添加的饲料作为对照组,组2、组3和组4为试验组,投喂有复合微生物菌剂添加的饲料,其中微生物菌剂分别占饲料质量的1.0%、1.5%和2.0%。每个组进行33 d的养殖,测定养殖期间对虾生长性能、养殖水池底泥和水质相关性质,探讨微生物菌剂对对虾生长的影响。结果显示:试验前对照组与3个试验组的体重无显著差异(P>0.050),试验后各试验组的体重均高于对照组(P<0.050),其中组4体重达(0.60±0.03)g,表明微生物菌剂的使用促进了对虾标苗的生长;水体弧菌个数在试验不同时间之间有显著差异(P=0.000),对照组呈上升趋势,第30天时未添加微生物菌剂的对照组弧菌数目最高,表明微生物菌剂能控制水体有害菌的生长;水体中的溶解氧(DO)含量在养殖不同时间之间均具有显著差异(F=191.959,P=0.000),NH4-N、NO2-N和NO3-N的含量均是如此,F值分别为250.633、659.806和1937.649,P值均为0.000,从养殖第10天开始,试验组DO含量均高于对照组,而试验组的NH4-N、NO2-N和NO3-N含量均低于对照组。综上所述,复合微生物菌剂对对虾有明显地促生长作用,并且还能在一定程度上净化养殖环境。
- 谢芝玲徐佳莹潘登刘峰陈燕杨焕胜印遇龙印遇龙张友明张友明
- 关键词：复合微生物菌剂对虾养殖
- 苦瓜MAP30蛋白的原核表达及其生物活性研究被引量：4
- 2014年
- 以天然苦瓜基因组为模板PCR扩增去前导肽后成熟的MAP30蛋白基因,克隆至可诱导表达载体pET28a中。将含MAP30基因的表达载体pET28a-MAP30转化至E.coli Rostta(DE3)中并通过IPTG诱导表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白杂交(Western blot)以及液相色谱-质谱(LC-MS)对表达的重组MAP30蛋白进行鉴定,并通过镍柱亲和层析纯化。将pUC19质粒与不同浓度的纯化后的重组MAP30蛋白孵育,分析其切割DNA的活性。同时将纯化后的重组MAP30蛋白体外作用于人乳腺癌细胞(MCF-7),采用MTT、AO/PI双染等方法进行抗肿瘤活性分析。实验结果表明纯化后的蛋白经质谱鉴定和Western blot分析,目的蛋白成功地与His-tag融合表达。首次发现大肠杆菌异源表达的重组MAP30蛋白同天然蛋白一样可以切割超螺旋DNA活性。MTT、AO/PI双染结果证实重组MAP30体外可诱导MCF-7细胞发生凋亡。通过基因工程技术大量制备MAP30蛋白,进一步研究其体外生物学活性,为以后的临床应用奠定基础。
- 邱华丽穰杰丁学知胡胜标张友明朱道奇夏立秋
- 关键词：核糖体失活蛋白基因工程DNA切割
- 三种组成型启动子调控的鼠李糖脂基因在防御假单胞菌中的异源表达及活性研究被引量：1
- 2019年
- 本研究利用Red/ETDNA重组技术对实验室已有的含鼠李糖基转移酶基因RhlAB的分泌表达载体pBBR1-genta-RhlAB进行修饰,将3种不同强度组成型启动子(Papra、Ptac和PrhaB)成功替换了RhlAB基因在铜绿假单胞菌中的原始启动子,成功获得了表达载体pBBR1-genta-Papra-RhlAB,pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB,并将这些表达载体分别在防御假单胞菌Pf-5中异源表达,通过LB培养基发酵42h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂产量为17.56mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-Papra-RhlAB,Pf-5/pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB分别是11.135mg/L,441.135mg/L,557.764mg/L,启动子优化后产量分别是原始启动子的0.63,25.12和31.76倍。对发酵产物进行高效液相色谱-质谱联用技术分析,共检出相对含量变化的4类质核比不同的鼠李糖脂同系物。并通过实时荧光定量PCR检测RhlAB基因的表达量,发现启动子替换为Ptac和PrhaB后RhlAB基因表达量分别是原始启动子的2.16和2.77倍。本研究初步实现了RhlAB基因在Pf-5中的表达,发现组成型启动子Ptac和PrhaB比RhlAB的原始启动子表达效率更高,可为异源合成鼠李糖脂提供重要参考。
- 谢芝玲陈汉娜钟林徐佳莹李演潘登刘峰丁学知夏立秋张友明张友明
- 关键词：鼠李糖脂
- 噬菌体在防控鱼类细菌性病害中的作用机制及其应用
- 2023年
- 鱼类细菌性病害对发展鱼类养殖业构成了严重的威胁,而抗生素的滥用和病原菌耐药性的出现对鱼类养殖产量、水产品质量和养殖环境造成了严重的影响。为了推动鱼类健康养殖产业的发展,亟待创新研究鱼类病害的绿色防控技术。噬菌体作为一种天然、无残留的细菌杀手,具有特异性强、裂解效率高等特点,利用噬菌体治疗鱼类细菌性病害将是一种重要的技术途径。本文综述了噬菌体的重要资源挖掘、鱼类细菌性病害防控中的作用机制及其应用前景,并提出了在鱼类健康养殖领域加快研究噬菌体治疗技术的措施,对鱼类的健康养殖具有重要意义。
- 周方方胡胜标张友明夏立秋
- 关键词：鱼类养殖细菌性病害绿色防控技术
- 类枯草杆菌蛋白酶基因重组杀虫工程菌及其菌剂制备方法
- 类枯草杆菌蛋白酶基因重组杀虫工程菌及其菌剂制备方法。该杀虫工程菌是由苏云金芽胞杆菌的crylAc基因与一种外源毒素基因融合构建的双效工程菌，并在苏云金芽胞杆菌中表达融合杀虫晶体蛋白。所述苏云金芽胞杆菌为苏云金芽胞杆菌4....
- 夏立秋丁学知曾智孙运军张友明
- 文献传递
- 发光杆菌毒素复合体(Tc)克隆及其生物活性研究
- 李纯刘晨浪方倩于芳楠夏立秋张友明
- 苏云金芽孢杆菌毒素Cry1Aa，Cry2Aa，Cry3Aa和Cry4Aa结构的计算机对比分析被引量：8
- 2008年
- 运用生物信息学软件对苏云金芽孢杆菌毒素Cry1Aa,Cry2Aa,Cry3Aa和Cry4Aa的基本参数、一级结构、二级结构、三级结构、跨膜区和表面电势进行了预测比较.它们在一级结构上有较大差异,但二级结构和跨膜区相似,三级结构中各毒素的结构域I之间基本相似,结构域II之间差异较大,其中Cry2Aa为差异最大成员.4种毒素的表面电势分布不同.毒素之间的结构相似性和差异性与其作用机理和杀虫特异性有关.
- 赵新民夏立秋王发祥丁学知单世平张友明
- 关键词：苏云金芽孢杆菌毒素生物信息学计算机
- 脂肪酶lipAB操纵子在防御假单胞菌中的克隆、表达及活性研究被引量：2
- 2018年
- 对荚壳伯克氏菌PG1(Burkholderia glumae PG1)基因组中的脂肪酶操纵子lipAB片段进行直接克隆,构建含有脂肪酶基因的分泌表达载体,实现其在防御假单胞菌Pf-5(Pseudomonas protegens Pf-5)中的异源表达,并研究重组工程菌的胞外脂肪酶活性。利用Red/ET直接克隆技术获得克隆载体p15A-cm-lipAB;再通过亚克隆技术构建重组表达载体pBBR1-km-lipAB和pBBR1-km-Papra-lipAB,将这两个表达载体分别电转至Pf-5中,通过卡那霉素或者阿伯拉霉素抗性筛选得到转化子,以三丁酸甘油酯平板扩散法和对硝基苯酚法检测脂肪酶酶活,并通过实时荧光定量PCR检测启动子的替换对lipA表达的影响。本研究从PG1中成功克隆了脂肪酶操纵子lipAB(GenBank accession number:AJK49931. 1 and AJK49932. 1);成功构建了重组工程菌Pf-5/pBBR1-km-lipAB和Pf-5/pBBR1-km-Papra-lipAB,并成功检测到两株工程菌的胞外脂肪酶活性;以LB培养基培养至24 h时,启动子优化后lipA基因表达量是原始水平的2. 1倍;在LB培养基摇瓶发酵至66 h时,Pf-5/pBBR1-km-lipAB的脂肪酶酶活最高且为13. 51 U/mL,而Pf-5/pBBR1-km-Papra-lipAB的酶活为46. 85 U/mL,是Pf-5/pBBR1-km-lipAB的3. 47倍。初步实现基因lipA在Pf-5中的表达,发现组成型启动子Papra比lipAB的原始启动子PlipAB效率更高,为将来实现规模化生产奠定了技术基础。
- 方倩谢芝玲陈汉娜李建伟潘登丁学知夏立秋涂强张友明
- 关键词：异源表达
- 大肠杆菌Nissle1917L-天冬酰胺酶Ⅱ基因在大肠杆菌BL21中的表达与抗肿瘤活性被引量：1
- 2014年
- 【目的】从大肠杆菌Nissle1917中获得L-天冬酰胺酶Ⅱ基因,并研究其抗肿瘤活性。【方法】以大肠杆菌Nissle1917基因组为模板PCR扩增L-天冬酰胺酶Ⅱ基因,克隆至可诱导表达载体pET28a上。将L-天冬酰胺酶Ⅱ表达载体pET28a-asp转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并通过IPTG诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和液相色谱-质谱(LC-MS)对表达的L-天冬酰胺酶Ⅱ进行鉴定,并通过镍柱亲和层析纯化收集表达出的L-天冬酰胺酶Ⅱ。用纯化定量以后的L-天冬酰胺酶Ⅱ作用小鼠乳腺癌4T1细胞、人肝癌Hep-3B细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC。【结果】来自于大肠杆菌Nissle1917的L-天冬酰胺酶Ⅱ基因可在大肠杆菌BL21中高效表达并通过LC-MS得到鉴定,细胞毒性实验结果表明L-天冬酰胺酶Ⅱ对4T1细胞和Hep-3B细胞的生长具有较强的抑制作用,而对人脐静脉内皮细胞HUVEC的生长无明显抑制效果。【结论】来源于大肠杆菌Nissle1917的L-天冬酰胺酶Ⅱ能显著抑制4T1细胞和Hep-3肿瘤细胞的生长,而对人正常组织细胞的生长无明显抑制效果,为进一步研究L-天冬酰胺酶Ⅱ特异性抗肿瘤作用机制和对实体瘤的应用研究奠定了重要基础。
- 梁毅偈孙运军胡胜标颜富张旭白利明张友明丁学知夏立秋
- 关键词：大肠杆菌克隆抗肿瘤
