屈芫
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金江苏省博士后科研资助计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人催乳素受体胞外区蛋白的原核表达及纯化
- 2010年
- 目的:建立人催乳素受体的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:由RT-PCR获得人催乳素受体(human prolactin receptor,hPRLR)胞外区氨基酸的编码序列,扩增并通过酶切位点修饰后克隆至pMD18-T载体,经测序正确后,切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG诱导重组工程菌表达,使用谷胱甘肽偶联的GSTrapFF柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:重组菌株可以表达GST-hPRLR融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为37.6×103处有一条带。结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-hPRLR融合蛋白,为进一步研究催乳素受体的功能和制备特异性的抗体奠定了基础。
- 刘雪瑶鲁雅洁屈芫姚俊魏钦俊曹新冯振卿
- 关键词：融合蛋白原核表达纯化
- 人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRLR融合蛋白作为抗原包板,经过3轮循环的吸附-洗脱-扩增的筛选及1轮交叉筛选,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,将筛选到的阳性克隆FabG2转化至Top10’受体菌,诱导表达可溶性Fab抗体,通过Western blot和ELISA进行特异性的鉴定。结果构建的人源Fab库容为1.0×109,4轮的筛选,获得6株能与hPRLR结合的人源抗体克隆。选取的FabG2能够进行可溶性Fab抗体蛋白的表达,ELISA初步鉴定,能够与hPRLR进行特异性地结合。结论成功构建了人源Fab噬菌体抗体库,筛选并鉴定了1株抗hPRLR Fab抗体的克隆。hPRLR特异性Fab抗体的获得将为高表达hPRLR乳腺癌的生物免疫治疗奠定了基础。
- 屈芫魏钦俊姚俊鲁雅洁王天明曹新冯振卿
- 关键词：人源化抗体
- 泛素样含PHD和环指域1对胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响被引量：1
- 2018年
- 目的观察RNA干扰下调泛素样含PHD和环指域1（UHRF1）基因对人胃癌SGC-7901细胞生长、凋亡、侵袭转移和周期分布变化的影响。
方法合成针对UHRF1基因的小干扰RNA（siRNA）片段，转染至胃癌细胞株SGC-7901；实验分为3组：转染组（转染特异性siRNA）、阴性对照组（转染非特异性siRNA）、空白对照组；细胞转染24 h后用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测转染前后UHRF1的mRNA和蛋白的表达水平变化；细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖能力；Matrigel和Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布。
结果转染后，胃癌细胞株SGC-7901 UHRF1 mRNA的相对表达量为0.22±0.02，低于阴性对照组（P＝0.003）和空白对照组（P＝0.001），UHRF1蛋白的相对表达量为0.17±0.01，低于阴性对照组（P＝0.001）和空白对照组（P＝0.000）；细胞增殖能力显著降低（P＝0.000）;转染组细胞和非特异性阴性对照组侵袭细胞数分别为（117.3±4.2）个和（433.3±5.5）个（P＝0.000），迁移细胞数分别为（123.0±3.6）个和（377.3±4.7）个（P＝0.000），细胞的侵袭迁移能力显著减弱；转染组凋亡率为（16.36±0.84）%较阴性对照组（9.67±0.36）%、空白对照组（8.63±0.10）%明显增加（P＝0.002）；细胞周期分布改变显著，G0/G1期的细胞明显增多（P＝0.010）。
结论UHRF1能促进胃癌细胞株SGC-7901增殖，增强其迁移侵袭能力，抑制细胞凋亡。
- 屈芫王天明严枫
- 关键词：胃癌细胞周期
- 全人源抗人催乳素受体单链抗体及其应用
- 本发明公开了一种全人源抗人催乳素受体单链抗体，它的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示。本发明还公开了上述全人源抗人催乳素受体单链抗体在制备治疗人乳腺癌药物中的应用。本发明获得了一株具有高特异性和高亲和力的全人源抗人催乳...
- 魏钦俊曹新屈芫何伟姚俊鲁雅洁
- 文献传递
