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龚毅: 作品数：69 被引量：366H指数：11; 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目国家科技攻关计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>

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PCR及其衍生技术在基因突变检测中的应用被引量：17: 2003年; 许多人类遗传性疾病及某些抗艾滋病药物的抗性乃至细菌对某些抗生素的抗药性通常源于基因突变。本文对近年来在基因突变检测中应用日益广泛的各种PCR衍生技术作一综述;重点介绍了错配PCR技术,以及我们实验室近期报道的一种快速检测喹诺酮类药物耐药大肠杆菌的错配PCR方案。; 颜志强杨胜利龚毅; 关键词：遗传性疾病抗药性基因突变突变检测

人细胞色素P450氧化还原酶的克隆表达和抗体的制备: 2006年; 细胞色素P450还原酶(CPR)是人细胞色素P450酶系的电子供给者,对后者活性的发挥起到重要作用.本研究将从人胚胎cDNA文库中得到的人CPR的编码基因,连接入pT7450表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达并纯化.每升发酵液可得到纯化蛋白49 mg,占总蛋白含量的10%,以细胞色素C为底物检测酶活性,比活为65 u/mg.利用纯化的CPR作为抗原,常规免疫纯系大耳家兔,获得高效价、高特异性的抗血清,抗体滴度为1∶200 000(ELISA法),纯化后抗体应用于不同组织中CPR含量的评价,证明重组CPR及其抗体可用于细胞色素P450的体外药物代谢及细胞色素P450与CPR作用机理的研究.; 程婕龚毅陈悦杨凌; 关键词：克隆抗体药物代谢

利用MPCR方法快速检测植物转基因背景被引量：42: 2000年; 利用复合PCR(MulyiplexPCR -MPCR)技术对植物的转基因背景进行检测。经过对DNA方法的选择 ,对各种PCR程序的比较以及对引物的修饰 ,建立了一种快速检测植物转基因情况的技术 ;利用该技术对 5个大豆样品 ,6个豆粕样品进实验检测 ,同时利用普通PCR方法对上述样品进行检测 ,两者的结果完全符合。; 陶震杨胜利龚毅; 关键词：大豆豆粕转基因植物

基因重组生长激素对异育银鲫促生长的研究被引量：5: 2003年; 2001年4月-2002年11月期间,在浙江佛度、象山、大陈和嵊泗海区对国内外21种网箱网衣防污材料进行了筛选试验。试验结果表明日本油脂公司2 、1 和国际油漆公司1 在附着生物以水螅虫、海葵等为主的浙江佛度、象山、大陈、嵊泗等海区具有相对较好的防附着效果。尤其是日本2 ,防附效果显著,至试验结束(6个月),网衣仍保持洁净。试验还初步调查了试验海区网衣附着生物的种类和季节变化,发现造成较大危害的附着生物种类主要是水螅虫和海葵。; 黄新春周洪琪邱小琮曹丹华雪铭虞谷松陈燕龚毅; 关键词：生长激素异育银鲫浸泡

竞争ELISA法快速检测血液中脂联素的含量: 2006年; 目的快速检测血液中脂联素(Acrp30)的含量。方法大肠杆菌表达Acrp30蛋白的球状区域gAcrp30,用gAcrp30重组蛋白免疫新西兰家兔,获得滴度为10 000的一抗。采用竞争酶联免疫吸收方法(ELISA),将抗原包被在酶标板上,一抗和经过一系列稀释的标准抗原-抑制物或者是待测样品预先结合30 min,再和酶标板上的抗原反应,继而加入二抗(羊抗兔),显色,读取OD450值。以标准抗原的稀释倍数的对数为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准抑制曲线。结果待测样品的浓度即可从标准曲线上查出。结论建立了一种快速检测体内脂联素含量的方法。; 胡小波颜志强陈霞杨胜利许金华龚毅; 关键词：脂联素竞争ELISA 肥胖糖尿病动脉硬化

融合干扰素-BLA(IFN-BLA)的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定(英文): 2005年; 干扰素BLA(IFN BLA)由干扰素beta1b(IFN beta1b)和干扰素alpha2b(IFN alpha2b)通过连接肽GGGS融合而成。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35%以上并且主要以包涵体的形式存在。对包涵体的复性条件进行了摸索,建立了IFN BLA的复性及纯化方法,纯化后的蛋白产量约为45mg/L,纯度在90%以上。抗病毒活性分析表明这一新的融合蛋白可能具有协同或加成活性。; 马文哲沈琼韩威陆晨轶杨胜利龚毅; 关键词：基因表达纯化抗病毒活性

受环境溶氧浓度调控的大肠杆菌外源基因表达系统: 本发明为一种受环境溶氧浓度调控的大肠杆菌外源基因表达系统,通过采用透明颤菌血红蛋白基因(Vgb)的启动子元件实现发明目的,所构建的外源基因表达系统在调控模式上遵循Vgb基因启动子的规律,在外源基因的表达水平上与现有表达系...; 龚毅童芹杨胜利; 文献传递

膜蛋白LASS2的表达研究被引量：1: 2003年; 利用多种原核表达系统、真核体外翻译系统和细菌杆状病毒 (BactoBac)的昆虫表达系统对一个具有重要生理功能的人的膜蛋白LASS2 (Homosapienslongevityassurancehomologue 2ofyeastLAG1)进行表达研究。在原核表达系统中仅能够表达其羧基端胞外区片段却不能表达完整的LASS2蛋白 ,并制备了该片段的抗体。完整的LASS2蛋白能够在两种真核表达系统中进行表达 ,SDS PAGE分析结果表明 ,表达产物分子量为约 2 8kD的LASS蛋白 ,Western印迹分析也证实了这一结果 ,并利用Ni NTA树脂亲和层析将该蛋白纯化 ,纯度达到 90 %以上。; 蔡兴锋陶震曹郁杨胜利龚毅; 关键词：膜蛋白

Tat蛋白的PTD区段促进GFP蛋白进入骨髓瘤细胞SP2/0被引量：4: 2002年; In order to detect the protein delivery mediated by the PTD (protein transduction domain) of TAT Protein, a expression vector, named pT7460-GFP, was constructed by insert the PTD DNA Sequence, followed by a GFP (green fluorescent protein) gene fused in-frame, into the pT7450 vector. The TAT-GFP fusion protein was expressed in the E.coli ER2566. Most of the fusion protein was presented in the inclusion body. The protein was purified by Ni 2+ affinity chromatography under denature conditions, then by a Sepharose Q column to remove urea. The soluble denatured protein was added directly to medium containing the Myeloma Cell SP2/0. It came out that the fusion protein could be detected delivered into the cells under fluorescent microscope in a short time.; 李志奇胡小波杨胜利龚毅; 关键词：TAT蛋白

蛇毒纤溶酶原激活剂TSV-PA在昆虫细胞中的表达被引量：10: 2001年; 将蛇毒TSV PA基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中 ,在粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞中进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,表达产物为分子量 33kD的TSV PA蛋白 ,Western印迹分析也证实了此结果。酶活力测定结果表明 ,昆虫细胞表达的TSV; 曹郁虞谷松杨胜利龚毅; 关键词：蛇毒纤溶酶原激活剂昆虫杆状病毒表达系统