杨肃文
- 作品数：38 被引量：61H指数：4
- 供职机构：浙江大学医学院附属邵逸夫医院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省中医药科学研究基金浙江省分析测试基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 实时荧光PCR快速检测嗜肺军团菌的研究被引量：1
- 2008年
- 目的建立TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测嗜肺军团菌技术，为临床和环境样品检测嗜肺军团菌提供可实用工具。方法在对嗜肺军团菌mip序列进行分析、比较基础上，设计一对特异性引物和TaqMan—MGB探针，通过实时荧光PCR反应条件和反应体系的优化，实现对嗜肺军团菌的快速检测；用克隆到pMD-19T载体上的嗜肺军团菌mip基因阳参片段和不同菌株验证方法的敏感性和特异性。结果当用热裂解法提取DNA，25μl的反应体系中包括上、下游引物（20μmoL／L）各0．6μl，探针（20μmol／L）0．4μl，模板DNA6．0μl，反应条件为预变95℃20s，变性95℃10s，退火50℃40s，40个循环时，TaqMan—MGB探针实时荧光PCR技术对嗜肺军团菌mip基因阳参片段最低检测浓度为0．71拷贝μl，其循环阈值（Ct值）与模板浓度具有极好的对应关系（r=0．999）；1株嗜肺军团菌标准株、12株嗜肺军团菌分离株的Ct值在13．23—16．04之间，而包括金黄葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺菌共计76株其他菌PCR Ct值均大于30；整个检测过程仅需1．5h。结论TaqMan-MGB探针的嗜肺军团菌实时荧光PCR检测方法具有特异性和敏感性、易操作、结果准确可靠等优点，可用于嗜肺军团菌检测。
- 许海红梅玲玲朱敏谢鑫友金红杨肃文
- 关键词：嗜肺军团菌TAQMAN-MGB探针实时荧光PCRMIP基因
- NNMT蛋白单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用
- 本发明提供了一种尼克酰胺-N-甲基化酶蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，以及该细胞株分泌的单克隆抗体及应用。本发明的单克隆抗体对NNMT蛋白均具有较高的抗体效价，亲和力和纯化后较高的纯度，提示该单克隆抗体可应用于对NNMT蛋白...
- 张钧谢鑫友杨肃文王燕忠
- 文献传递
- 血清转氨酶异常的乙型肝炎患者外周血大颗粒淋巴细胞的观察
- 2006年
- 许海红金红戴泽宁杨肃文
- 关键词：肝炎乙型淋巴细胞肝功能检查
- 采用多参数流式细胞术检测鉴别正常浆细胞与骨髓瘤细胞
- 目的研究多发性骨髓瘤细胞与正常浆细胞膜表面免疫表型是否存在差异显著差异。方法采用多参数流式细胞技术测定30例多发性骨髓瘤(MM)患者及10例非单克隆性免疫球蛋白血症浆细胞增高患者的浆细胞表面免疫表型CD45、CD38、C...
- 杨肃文金红钟玉虹王伟
- 关键词：骨髓瘤细胞流式细胞技术免疫表型浆细胞多参数流式细胞术
- 文献传递
- 杂交瘤细胞株Zj/2D8及其检测尼克酰胺-N-甲基化酶抗原的应用
- 本发明公开了一种杂交瘤细胞株Zj/2D8及在检测尼克酰胺-N-甲基化酶抗原中的应用，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2013年10月22日，保藏编号为CCTCC NO：C2013149，保藏地址为中国武汉，武汉大...
- 张钧谢鑫友杨肃文王燕忠
- 文献传递
- 血细胞形态学CAI课件的研制与应用
- 血细胞形态学是血液学检验的重点，也是教学和临床检验工作中的难点。原因有二：①骨髓血细胞正常细胞和异常细胞种类繁多，每种细胞形态本身变化多样，有的细胞典型有的不典型，且形态学分类易受许多外在、人为因素影响：如涂片制作，染色...
- 戴泽宁金春兰谢鑫友金红杨肃文
- 关键词：实验诊断学血细胞形态学CAI课件教学实践
- 文献传递
- 对自动化血沉分析仪TEST1EC检测血沉进行质量控制
- 对于监测感染、炎症、及一些肿瘤等疾病的诊断与病人随访中,作为一项辅助检查,血沉在实验室中仍是应用最广泛的项目之一.最近,为满足这些需要如:使用封闭操作系统以保证操作者的安全;使检测实现自动化、优化工作流程并充分利用人力资...
- 王伟杨肃文
- 关键词：魏氏法
- 文献传递
- 大鼠BMP-7重组腺病毒构建及在肾小管上皮细胞中表达
- 2010年
- 目的:利用AdEasyTMsystem构建携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并鉴定其在原代肾小管上皮细胞中的表达。方法:将BMP-7全长序列分为46个片段分段合成,再采用PCR方法将合成的46个寡核苷酸片段拼接成BMP-7基因,并克隆到测序载体中测序鉴定。经NotI和HindⅢ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-BMP-7。EcoRI酶切重组pShuttle-BMP-7,与pAdEasyTMDNA电穿孔共转化BJ5183感受态菌,抽提重组AdBMP-7质粒,PacI酶切线性化重组质粒AdBMP-7后,转染Ad293细胞进行病毒包装和扩增,腺病毒荧光检测试剂盒测定其滴度。用AdBMP-7感染大鼠肾小管上皮细胞,以ELISA法和W estern-blot法检测BMP-7在大鼠肾小管上皮细胞中的表达。RT-PCR方法检测-αSMA mRNA的表达水平,以鉴定重组腺病毒AdBMP-7的生物学活性。结果:构建了BMP-7基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度重组腺病毒保存液。该重组腺病毒在体外能有效转染大鼠肾小管上皮细胞并高表达BMP-7蛋白,所表达的BMP-7蛋白能有效逆转由TGF-β1诱导的α-SMA表达增高。结论:成功地构建了携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并初步证实其具有一定的抗肾纤维化功能。
- 杨肃文王伟徐再春朱芸芸
- 意义未明单克隆免疫球蛋白病及多发性骨髓瘤患者微RNA-221和微RNA-222的表达被引量：5
- 2016年
- 目的：探讨意义未明单克隆免疫球蛋白病（ MGUS ）、多发性骨髓瘤（MM）患者血清和浆细胞中微RNA-221（miR-221）和微RNA-222（miR-222）的表达水平及其作为MGUS、MM诊断和预测预后生物学指标的可能性。方法：收集2013年1月至2015年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院及浙江省立同德医院14例初诊MGUS患者、81例初诊及复发MM患者和10名健康对照者的血清及骨髓标本，其中骨髓标本用CD138磁珠分选浆细胞。用实时定量PCR检测血清和浆细胞中miR-221／222的表达量。采用Δct表示miR-221／222的相对表达量并比较组间差异。比较缓解组和难治组MM患者治疗前后血清miR-221表达水平的变化，并分析其与血清β2微球蛋白的相关性。结果：MGUS 患者和 MM 患者血清miR-221／222的表达量均较对照组高（均P＜0．01），而浆细胞miR-221／222的表达量均较对照组低（ P＜0．05或＜0．01）；MGUS与MM患者miR-221和miR-222表达量的差异在血清中或在浆细胞中均无统计学意义（均P＞0．05）。 miR-221和miR-222表达量在血清与浆细胞之间无相关性（r＝0．024和－0．127，均P＞0．05）；而血清和浆细胞 miR-221与 miR-222表达量之间均具有相关性（ r ＝0．534和0．552，均P＜0．01）。受试者工作特征（ ROC）曲线显示血清miR-221／222和浆细胞miR-221／222诊断MGUS、MM 的曲线下面积（ AUC ）分别为0．968和0．976、0．801和0．727。 MM患者不同M－蛋白类型之间血清miR-221的表达量差异无统计学意义（P＞0．05）。复发患者血清miR-221的表达量高于初诊患者（P＜0．01）。DS分期为Ⅲ期MM患者血清miR-221表达量高于MGUS及DS分期Ⅰ期和Ⅱ期MM患者（P＜0．01）。缓解组治疗后血清miR-221表达量低于治疗前（U＝51．5， P＜0．01），而难治组治疗前后血清miR-221表达量差异无统计学意义（U＝67．5， P＞0．05）。 MM患者血清β2微球蛋白水平�
- 杨肃文王伟金红钟玉虹谢鑫友
- 迪康胶囊对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠胶原表达的影响被引量：1
- 2004年
- 王伟张立煌郁子扬杨肃文方嘉坚
- 关键词：肝纤维化二甲基亚硝胺胶原
