刘彦辰
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 反向杂交检测乙型肝炎病毒耐药突变方法的优化及其初步评估被引量：1
- 2011年
- 目的建立一种HBV耐药突变的反向杂交检测方法，并对该方法进行优化和评估。方法针对拉米夫定、阿德福韦酯和恩替卡韦3种药物10个耐药位点的常见耐药突变形式，合成兼顾HBV8种基因型的26条简并探针，并固定于同一张带正电荷的尼龙膜上，与地高辛标记的待测样本聚合酶链反应（PCR）产物进行杂交。为了提高检测灵敏度和特异性，从PeR产物标记地高辛的数目，紫外交联探针的能量强度，以及杂交和严格洗脱4个方面进行优化。为了证实方法的可行性，从检测特异性、灵敏度和临床标本的检测准确性3个方面进行评估。结果当检测体系为引物标记3个地高辛分子，紫外交联的能量强度选择1500×0．1mJ／cm2，杂交温度选择42℃，严格洗脱条件选择44℃，用0．5×SSC和0．1％十二烷基硫酸钠严格洗脱30min时，可获得灵敏、特异的结果。在该检测体系的评估中，当PCR产量在10mg／L以上，可以被检测到，且绝大多数探针特异性较好。临床标本的检测结果与直接测序法的检测结果符合率为93．9％（31／33）。结论该方法可以对HBV拉米夫定、阿德福韦和恩替卡韦耐药突变同时进行检测，是一种简便、快速、灵敏的分析方法，但部分探针的特异性有待进一步提高。对于180／181、202／204这4个位点的探针，由于两两距离较近，同一探针序列包含2个位点的密码子，杂交会相互干扰，通过组合距离较近的2个位点的密码子的各种形式来设计探针，可能有助于取得更好的结果。
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- 关键词：乙型寡核苷酸序列分析核苷(酸)类似物耐药反向杂交
- 一种检测乙型肝炎病毒基因型的方法及试剂盒
- 本发明提供了一种检测乙型肝炎病毒基因型的方法及试剂盒，该方法包括以下步骤：(1)从血清或血浆中提取HBV DNA基因组；(2)根据乙型肝炎病毒基因组保守区设计分型引物和探针；(3)使用小分子标记寡核苷酸引物进行PCR反应...
- 黄爱龙张文露胡源赖国旗赵丽刘彦辰
- 文献传递
- 反向杂交检测HBV耐药突变方法的建立及评估
- 乙型肝炎病毒/(hepatitis B virus, HBV/)一直以来就威胁着全人类的健康,核苷/(酸/)类似物作为抗HBV感染的主要药物,在抑制病毒方面取得了不错的成果。但随着用药时间延长,HBV都会在不同程度上表现...
- 刘彦辰
- 关键词：乙型肝炎病毒耐药反向杂交
- 文献传递
- 反向斑点杂交法快速检测HBV基因型反应条件的优化和建立被引量：3
- 2009年
- 利用反向斑点杂交技术,设计出特异性基因分型探针,并将探针固定在带正电荷的尼龙膜上,与PCR扩增带有地高辛标记的临床血清样本进行杂交。通过优化杂交反应条件,建立起简单、快速、特异地检测HBV基因型的方法。利用该方法对重庆地区临床样本进行分型检测,并与直接测序结果比较。结果表明新建的HBV基因分型方法可对拷贝数在103以上的血清样本准确分型,特异性达到96.67%。重庆地区感染HBV主要以B型为主。
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- 关键词：反向斑点杂交HBV基因型
- 同时检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点的方法及其试剂盒
- 本发明提供了一种同时检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点的方法及其试剂盒。该发明以乙型肝炎病毒基因型序列为基础，在HBV聚合酶区域设计了四条巢式扩增引物和针对十个耐药位点的二十七条野生、耐药检测的寡核苷酸探针，使用地...
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- 同时检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点的方法及其试剂盒
- 本发明提供了一种同时检测乙型肝炎病毒三种核苷酸类似物耐药位点的方法及其试剂盒。该发明以乙型肝炎病毒基因型序列为基础，在HBV聚合酶区域设计了四条巢式扩增引物和针对十个耐药位点的二十七条野生、耐药检测的寡核苷酸探针，使用地...
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- 文献传递
- 一种检测乙型肝炎病毒基因型的方法及试剂盒
- 本发明提供了一种检测乙型肝炎病毒基因型的方法及试剂盒，该方法包括以下步骤：(1)从血清或血浆中提取HBV DNA基因组；(2)根据乙型肝炎病毒基因组保守区设计分型引物和探针；(3)使用小分子标记寡核苷酸引物进行PCR反应...
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- 文献传递
- GRP78在HepG2细胞的亚细胞定位及真核表达被引量：2
- 2009年
- 目的构建GRP78的真核表达载体以检测GRP78在HEK293细胞中的表达和定位。方法采用激光共聚焦显微镜观察GRP78在HepG2细胞中的定位,用RT-PCR方法从HepG2细胞中扩增GRP78cDNA序列,构建真核表达载体pcDNA3.1-GRP78,转染HEK293细胞,分别用Western blotting和激光共聚焦显微镜检测GRP78在HEK293细胞中的表达和定位。结果GRP78在HepG2细胞的胞膜和胞质均有表达,GRP78在细胞膜上均匀分布。双酶切鉴定和核酸序列分析证实pcDNA3.1-GRP78真核表达质粒构建成功,该表达质粒转染HEK293细胞后可以瞬时表达GRP78蛋白。结论正常状态下,GRP78在HepG2细胞胞膜和胞质均有表达。pcDNA3.1-GRP78转染HEK293细胞后能瞬时表达GRP78蛋白,为进一步研究GRP78的功能提供了重要工具。
- 杨凤丁岗强唐霓赵丽刘彦辰黄爱龙
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78
