范立强
- 作品数：87 被引量：179H指数：7
- 供职机构：华东理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 对虾抗菌肽PEN-3和PEN-4嵌合基因在大肠杆菌中的表达及抗菌活性测定被引量：1
- 2009年
- 目的表达融合2种具有对虾抗菌肽活性的新型抗菌肽。方法利用overlap-PCR连接并扩增对虾抗菌肽Penaeidin-3和Penaeidin-4的嵌合基因序列,定向插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建此嵌合基因的表达质粒。将表达质粒转化至E.coliBL21(DE3),经终浓度1.0mmol/LIPTG分别在37℃和15℃诱导表达4h和14h,SDS-PAGE分析嵌合蛋白质的表达,用抑菌圈法测定产物的抑菌活性。结果获得了含有Penaeidin-3和Penaeidin-4嵌合基因的表达质粒;18%SDS-PAGE电泳显示,大肠杆菌中表达的嵌合蛋白质相对分子质量约14.7×103,主要以包涵体形式存在,包涵体15℃的表达量高于37℃的表达量;包涵体复性后,对枯草杆菌和溶藻弧菌具有明显的抑菌活性。结论实现了2种对虾抗菌肽嵌合基因在大肠杆菌中的表达。
- 郝淼闻范立强刘一赵健李素霞袁勤生
- 关键词：重叠PCR嵌合基因大肠杆菌蛋白质表达
- 酿酒酵母甲酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其酶学性质
- 2011年
- 目的克隆酿酒酵母甲酸脱氢酶(Formate dehydrogenase,FDH)基因,在大肠杆菌中表达、纯化重组蛋白,并进行酶学性质分析。方法以酿酒酵母基因组DNA为模板,采用温度梯度PCR法扩增fdh基因,重叠PCR技术校正fdh中的移码突变,构建重组表达质粒pET-28a-fdh,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,分别采用37℃IPTG诱导、15℃IPTG诱导和37℃乳糖自诱导表达,镍金属螯合亲和层析纯化重组FDH蛋白,并分析重组FDH的酶学性质。结果成功克隆了1 100 bp的fdh基因,碱基突变纠正了基因缺失和置换引起的编码错误;表达的重组FDH相对分子质量约为43 000,37℃乳糖诱导表达的重组FDH主要以可溶形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白比活为7.69 U/mg;重组FDH的最适反应温度和pH分别为30℃和7.5,热稳定性较好,米氏常数分别为:KmNAD+=49μmol/L,Km甲酸=4.5 mmol/L。结论已在大肠杆菌中表达并纯化了重组FDH蛋白,为进一步研究酿酒酵母FDH,利用其构建NAD(P)H辅酶再生体系奠定了基础。
- 倪敏君范立强王怡张锐赵健李素霞
- 关键词：酿酒酵母NADH
- 突变的人铜、锌超氧化物歧化酶基因的克隆、测序及表达被引量：6
- 1999年
- 目的：通过基因工程的方法将ｒｈＣｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ ｃＤＮＡ基因改造以得到更加稳定的酶。方法：以本实验室构建的 ｒｈＣｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ ｃＤＮＡ为模板，利用含有突变核苷酸的引物进行 ＰＣＲ扩增，将正确测定的含 ｒｈＣｕ， Ｚｎ－ＳＯＤ突变（ｒｈＣｕ，Ｚｎ－ＭＳＯＤ）基因的重组质粒重组到表达载体ＰＥＴ－２２ｂ（＋）中，重组质粒在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达ｒｈＣｕ，Ｚｎ－ＭＳＯＤ。结果：表达产物占菌体总蛋白的３８％，具有特异性ＳＯＤ酶活性。结论：从基因突变的角度改善酶的性能不仅具有理论意义，又有一定的实用价值。
- 施惠娟孙建新范立强魏东芝吴祥甫袁勤生
- 关键词：超氧化物歧化酶PCR基因突变
- 一种脂肪酶基因及其重组酶和在制备光学活性扁桃酸中的应用
- 本发明公开了一种脂肪酶及其基因，以及含有该基因的重组表达载体，重组表达转化体，重组酶和该重组酶的制备方法。此外叙述了含有该重组脂肪酶的菌体作为催化剂以2-乙酰氧基苯乙酸(α-acetoxyphenylacetic aci...
- 赵健上官娇娇许建和范立强
- 酶膜耦合大豆乳清废水高值利用及高纯度大豆低聚糖制备技术
- 赵黎明许兰山许振国范立强周家春王奎明赵彬穆洪静高剑郭红刚杨道贵鞠英东
- 所属领域：该项目属于食品生物化学和农副产品综合利用领域。技术内容：大豆乳清废水是生产大豆分离蛋白过程中产生的高浓有机废水，国内年产80万吨大豆分离蛋白每年排放的乳清废水量高达6000万m<'3>，其COD为18000～2...
- 关键词：
- 关键词：有机废水处理大豆乳清低聚糖
- 前导肽对于羧肽酶B折叠的作用研究（英文）
- ＜正＞羧肽酶B可特异性切割蛋白质或多肽C末端的碱性氨基酸,如精氨酸、赖氨酸和组氨酸,是重组胰岛素、降钙素等的生产过程中的重要的工业用酶。目前,商业的羧肽酶B均为从猪胰腺提取,含有其它蛋白酶杂质,且价格昂贵。所以,对于重组...
- 李素霞杨梓安宇宋聿文赵健范立强袁勤生
- 关键词：REFOLDING
- 文献传递
- 黄杆菌肝素酶Ⅱ的克隆及表达
- 目的获得高表达黄杆菌肝素酶Ⅱ工程菌。方法本文用一对特异性引物通过PCR从黄杆菌（Flavobacterium heparinum）基因组DNA中扩增出黄杆菌肝素酶Ⅱ（HpaII）基因,经测序验证后插入到含T7启动子的质粒...
- 傅文彬赵健宋聿文范立强李素霞袁勤生
- 关键词：克隆表达酶活性包涵体复性
- 文献传递
- 表面展示表达谷氨酸脱羧酶的重组工程菌及其构建方法与应用
- 本发明涉及表面展示表达谷氨酸脱羧酶的重组工程菌及其构建方法与应用。主要包括构建基于冰核蛋白的表面展示谷氨酸脱羧酶的重组工程菌，将谷氨酸脱羧酶重组工程菌接种到培养基中振荡培养，加入IPTG或乳糖诱导谷氨酸脱羧酶的表达，收集...
- 赵黎明范立强李明伟秦臻陈启明邱勇隽
- 高活力肉碱脱水酶工程菌的制备及其培养条件优化
- 作者构建了高肉碱脱水酶活力的工程菌,并对基培养条件如:宿主菌亚型、培养温度、PH、诱导时间等加以优化为基因工程法制备L-肉碱创造条件.
- 范立强袁勤生吴祥甫
- 关键词：L-肉碱工程菌培养条件优化
- 文献传递
- 利用表达聚谷氨酸合成酶的重组菌静息细胞和/或聚谷氨酸合成酶制备γ-聚谷氨酸的方法
- 本发明属于生物技术领域，利用表达聚谷氨酸合成酶的重组菌静息细胞和/或聚谷氨酸合成酶制备γ‑聚谷氨酸的方法。本发明的方法在优化反应体系后，重组菌(或酶)能在3小时内将70％以上的谷氨酸转化生成相应的γ‑聚谷氨酸，且γ‑聚谷...
- 赵黎明范立强朱娟刘佳
