王永胜
- 作品数：13 被引量：54H指数：3
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区教育厅基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学历史地理更多>>
- 根瘤农杆菌介导的抗虫转基因烟草的初步研究被引量：2
- 1999年
- 王永胜扈廷茂刘明秋孔威
- 关键词：转基因烟草农杆菌介导转基因植株根瘤表达质粒大豆胰蛋白酶抑制剂
- 人血管抑素AK(1-3)基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 2005年
- 用6月龄大月份流产的新鲜肝脏组织为材料,提取总RNA,通过反转录得到cDNA,并以此为模板,经PCR得到人Angiostatin基因的AK(1-3)片段.将此PCR产物直接与载体pMD18-T连接,转化大肠杆菌DH5α.经蓝白菌落筛选,PCR和酶切检测,筛选出阳性克隆,命名为pMDA,测序证明克隆序列与GenBank发表序列一致,大小为858bp.用Sal 和Bgl 酶切将该基因插入载体pQE40,并转化宿主菌M15[pREP4].经质粒电泳PCR和酶切检测筛选阳性克隆,得到表达载体pQEA,插入基因与载体上小鼠DHFR基因重组形成嵌合基因.在30℃,2×YT培养基(Kan25μg/mL+Amp200μg/mL),2mmol/LIPTG条件下诱导pQEA/M15[pREP4]表达.所得菌体总蛋白经SDS-PAGE分析,结果表明,在预期的61kD处得到一条特异带,为AK(1-3)cDNA与载体固有基因DHFR-6хHis的重组蛋白表达产物.实验结果为抗肿瘤药物的研制提供了条件.
- 海燕扈廷茂扈会平汪伟成苏慧敏王永胜
- 关键词：血管抑素
- 番茄1──氨基环丙烷羧酸(ACC)合成酶基因的反义RNA──核酶嵌合DNA序列的构建被引量：18
- 1999年
- 根据番茄ACC合成酶基因（LE—ACC2）DNA序列，以番茄(LycopersiconesculentumMill)果实的总DNA为模板，利用PCR技术扩增得到预期大小的该基因编码区内部分DNA序列，插入到质粒载体pGEM—3zf(＋)的BamHⅠ和HindⅢ位点之间后转化E．coliDH—5α，可选出重组子pRE，经酶切，PCR及DNA序列分析证明克隆成功；将pRE上的目的DNA序列以反义方式构建到我室已合成并克隆的含核酶DNA序列的重组质粒pRⅠ的BamHⅠ和HindⅢ之间，构成含有反义RNA-核酶嵌合DNA序列的重组质粒pREⅠ，经酶切及序列分析，结果与预期一致.
- 仇润祥扈廷茂王永胜张晓海刘中大
- 关键词：番茄ACC合成酶反义RNA
- 内蒙古自治区准格尔旗头道沟遗址发掘简报被引量：1
- 2016年
- 一、遗址概况头道沟遗址位于内蒙古自治区准格尔旗大路新区城壕村西北约3000米,地理坐标北纬40°6′28.95″,东经111°20′10.74″,海拔高度1100米。遗址坐落于黄河西岸的二级阶地上,相对河面高度40-45米。遗址西北约1000米处为呼准铁路黄河特大桥,北部及东部为紧临黄河的现代墓地,南部约150米为沿黄高速公路,遗址西部有一条土路穿过。
- 杨永贺梁云诗沈美辰谭玉华许永杰许永杰洪玉李霞王俞方谭文好梅欣欣范丽媛王永胜
- 关键词：战国晚期灰坑
- 番茄1位氨基环丙烷羧酸(ACC)合成酶基因的分离和克隆被引量：3
- 1998年
- 以番茄基因组ＤＮＡ为模板，利用多聚酶链反应技术（ＰＣＲ）将ＬＥ－ＡＣＣ２基因的编码区的第四外显子进行扩增．所得的ＤＮＡ扩增片段克隆至质粒ｐＥＧＭ－３ｚｆ（＋）的ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ位点之间，并用限制内切酶酶切、ＰＣＲ扩增及ＤＮＡ序列分析等手段证实已获得ＬＥ－ＡＣＣ２第四外显子序列的克隆．该克隆的碱基序列与国外报道的相关序列相一致，本文还对该基因的反义片段在番茄延熟品种培育上的意义进行了阐述和探讨．
- 刘中大仇润祥王永胜张晓海扈廷茂
- 关键词：番茄ACC合成酶基因基因克隆
- 马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆和结构分析
- 1996年
- 以马铃薯基因组ＤＮＡ为模板并基于天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因的ｃＤＮＡ序列所设计的两个引物，通过ＰＣＲ扩增得到６６６ｂｐ的天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因编码区，并将此片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点．序列分析结果表明该基因除去末端一终止密码子外其可译框架编码２２１个氨基酸残基，前导肽包括３２个氨基酸残基，故该抑制剂的成熟蛋白由１８９个氨基酸组成，第６７位的精氨酸为抑制胰蛋白酶的活性中心．与ｃＤＮＡ相比核苷酸的同源性为９４．３％，氨基酸的同源性为９０％．基因ＤＮＡ无内含子．
- 王永胜刘中大施一燊扈廷茂
- 关键词：天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因结构
- 番茄ACC合成酶基因的反义RNA-核酶嵌合基因植物表达载体的构建及对番茄的转化被引量：23
- 2001年
- 将克隆的番茄 ACC合成酶基因的反义 RNA-核酶嵌合的 DNA序列用 Hind 和 Kpn I切割后重组于植物表达载体 p GA643中 ,用三亲融合法导入农杆菌 LBA4 40 4中 ,采用叶盘法转化番茄子叶 ,诱导出再生小植株 ,获得了卡那霉素的抗性植株 .提取植物总 DNA,用p GA643作探针 ,通过斑点杂交 ,已筛选出整合有外源基因的工程植株 .为进一步研究该嵌合基因对 ACC合成酶基因表达的影响及获得商品化的转基因番茄奠定了基础 .
- 张晓海扈廷茂海燕李丽莉王永胜
- 关键词：转基因番茄ACC合成酶反义RNA
- 特异切割番茄1-氨基环丙烷羧酸合成酶mRNA的核酶基因序列的合成与克隆被引量：2
- 1998年
- 根据番茄１－氨基环丙烷羧酸合成酶（ＡＣＣ合成酶）基因ｃＤＮＡ序列，按照锤头状核酶作用模式，设计合成长度分别为４０ｍｅｒ和４８ｍｅｒ的一对引物，经体外退火、延伸、连接，插入质粒ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（＋）的ＫｐｎＩ和ＢａｍＨＩ位点之间，经菌落原位杂交、双酶切、聚丙烯酰胺凝胶电泳和序列分析证明，人工合成了特异切割ＡＣＣ合成酶ｍＲＮＡ第６６７～６６９位点ＧＵＣ序列的核酶基因序列。
- 王永胜李浩戈仇润祥刘中大扈廷茂
- 关键词：合成酶核酶蕃茄基因克隆
- 利用人内皮抑素基因构建植物表达载体及对烟草的遗传转化
- 2006年
- 将人内皮抑素(endostatin)基因重组于植物双元表达载体pGA 643,得到重组质粒pGE.用三亲融合法将其导入农杆菌LBA 4404中,采用叶盘法转化烟草,经诱导与筛选,获得了卡那霉素抗性植株.提取抗性植株总DNA,通过PCR扩增和Sou thern杂交检测,筛选出了整合有外源基因的转化植株.为进一步研究人内皮抑素在烟草中的表达及生物学功能奠定了基础.
- 张学明扈廷茂刘明秋张立全王永胜
- 关键词：人内皮抑素烟草生物反应器
- 马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因5′上游调控区的分离和序列分析
- 1996年
- 利用单一特异引物聚合酶链反应技术，将马铃薯ＤＮＡ中天冬氨酸蛋白酶抑制剂家族一成员的５′上游区分离，并克隆进ｐＵＣ１８质粒ＳｍａＩ位点中．用３２Ｐ中标记的单一特异引物──ＰｒｉｍｅｒＡ为探针，经斑点杂交得一阳性克隆．ＤＮＡ测序获得含有马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因５′上游区的插入物的核苷酸序列．从这序列结构中见到ＴＡ富含区，并发现典型的调控序列ＴＡＴＡ和ＣＡＡＴ．此上游序列与国外所得到的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的上游区相比较在序列和ＴＡＴＡ及ＣＡＡＴ盒的位置上有着很大的不同．
- 刘中大扈廷茂王永胜
- 关键词：马铃薯天冬氨酸蛋白酶抑制剂基因表达调控
